一种具有免疫调节功能的纳米硒-卵白蛋白肽复合

本发明涉及一种纳米硒-卵白蛋白肽复合物的制备及其应用，具体涉及一种具有免疫调节功能的纳米硒-卵白蛋白肽复合物的制备与应用。背景技术：1、免疫调节肽是具有调节机体免疫功能的一类生物活性肽，它能够提高机体的免疫力，激活免疫系统产生免疫应答。一般对非特异性免疫和特异性免疫都具有一定的调节作用，如通过增加胸腺和脾脏的指数、巨噬细胞的吞噬能力、增强nk细胞的活性、调节淋巴细胞、增加细胞因子和抗体的表达。已有研究表明蛋清肽具有一定的免疫调节作用，能够恢复免疫抑制导致的机体损伤，但是目前市场中蛋清肽产品主要以分子量为质量要求，突出的是蛋白、氨基酸营养的快速补充，现有初级产品的活性和功能特性并不明确。因此亟需一种高免疫调节活性、绿色天然安全的生物活性肽。2、中国鸡蛋的产量稳居世界第一，鸡蛋不仅作为蛋白质的主要来源，还是生物活性肽的重要原料。卵白蛋白作为鸡蛋蛋清中含量最高的蛋白质(含量54％)，它是一种分子量为42-47kda的球形糖蛋白。通过酶解制得的卵白蛋白肽具有多种生理活性，包括免疫调节、抗高血压、抗氧化活性等。它作为一种小分子多肽，相较于蛋清肽，它具有易于消化吸收和低致敏性的优势，可以有效改善产品同质化严重的问题。3、硒是维持人体生理活动一种重要的必需元素，具有抗氧化、抗炎、提高免疫力等作用，日常生活无法满足推荐摄入量，国民面临缺硒的问题。纳米硒是一种利用纳米技术制备而成的硒制品，与无机硒相比，纳米硒具有更高的生物活性、安全性。以酶法制备而成的卵白蛋白肽是一种天然的免疫增强剂，以它为模板，半胱氨酸还原亚硒酸钠制备成纳米硒-卵白蛋白肽复合物，这种具备免疫调节功能的产品尚未有相关报道。纳米硒-卵白蛋白肽复合物为开发新型增强免疫、抗氧化、快速补充硒的功能食品提供了一种新的思路，其产品具有广阔的开发和应用前景。技术实现思路1、本发明的目的在于提供一种具有免疫调节功能的纳米硒-卵白蛋白肽复合物的制备与应用，开发出一种功能明确的具有天然生物活性的纳米硒肽。包括以下步骤：2、步骤一、卵白蛋白肽的制备3、称取卵白蛋白加蒸馏水制备3-8％溶液，混匀后90℃恒温水浴10min，调节初始ph5.5-7.5，37-60℃水解温度下，加入2000-7000u/g木瓜蛋白酶水解，水解时间为2-5h，然后加热至90℃10min，迅速冷却，于9000rpm 4℃离心10min取上清液，用截留分子量1kda超滤膜分离后，获得小于1kda的水解液后冻干，即为卵白蛋白肽(op)，根据lc-ms/ms鉴定结构，并结合软件分析及蛋白质数据库，确定出卵白蛋白肽的序列。4、步骤二、纳米硒-卵白蛋白肽复合物的制备5、将5-50mg/ml卵白蛋白肽与5-10mm亚硒酸钠混匀后，再加入1-10mm半胱氨酸，常温下磁力搅拌2-5h，采用超滤150-300da膜除去多余的亚硒酸钠，冻干后即得纳米硒-卵白蛋白肽复合物(senps-op)。6、步骤三、具有免疫调节功能的纳米硒-卵白蛋白肽复合物的应用7、选取6-8周balb/c小鼠，将小鼠分为4组，每组10只，分别是空白对照组(ck)，模型组(m)、阳性药物组(p)、低剂量的纳米硒-卵白蛋白肽复合物(senps-op-l)、高剂量的纳米硒-卵白蛋白肽复合物(senps-op-h)。除ck组外，其余组在第1-3天腹腔注射环磷酰胺(ctx)，建立免疫抑制小鼠模型，第4-17天p组灌胃盐酸左旋咪唑，senps-op-l灌胃200mg/kgop+15μg/kg senps-op，senps-op-h灌胃200mg/kg op+30μg/kg senps-op。8、在第18天采集小鼠的脾脏、胸腺并称重。取脾脏放置于组织固定液中，用于he病理组织切片。小鼠眼眶取血，在4℃以3000r/min离心15min后取上清，检测血清中的超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽(gsh)和丙二醛(mda)含量。9、本发明具有以下有益效果：10、1、本发明制备的卵白蛋白肽包含以下核心氨基酸序列seq id no.1radhpflf(arg-ala-asp-his-pro-phe-leu-phe)、seq id no.2dklpgfg(asp-lys-leu-pro-gly-phe-gly)、seq id no.3navlff(asn-ala-val-leu-phe-phe)中至少一种。11、2、本发明制备的纳米硒-卵白蛋白肽复合物粒径在50-200nm。红外光谱中纳米硒-卵白蛋白肽复合物特征峰从3278.65cm-1(-oh伸缩)位移至3383.35cm-1，表明卵白蛋白肽通过-oh与se分子之间产生缔合作用。纳米硒-卵白蛋白肽复合物吸收峰从1654.32cm-1(酰胺i带，c＝o伸缩)位移至1643.64cm-1，与c＝o伸缩震动有关。从1562.63cm-1(酰胺ii带，cn伸缩，nh弯曲)位移至1587.17cm-1，说明卵白蛋白肽与纳米硒发生疏水相互作用。卵白蛋白肽能够有效的防止纳米硒聚集沉淀，对稳定和分散纳米硒起到重要作用。icp-ms电感耦合等离子体质谱仪测得纳米硒-卵白蛋白肽复合物中硒元素的含量为5-10％。12、3、在环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠模型中，低剂量和高剂量纳米硒-卵白蛋白肽复合物能显著提高胸腺和脾脏指数。通过脾脏he病理切片发现低剂量和高剂量纳米硒-卵白蛋白肽复合物均能使脾脏细胞排列整齐，红髓和白髓边界清晰，改善小鼠的脾脏损伤。高剂量的纳米硒-卵白蛋白肽复合物显著提高gsh、sod含量和降低mda含量，改善免疫抑制小鼠的免疫调节功能。13、4、纳米硒-卵白蛋白肽复合物能够协同相互作用，不仅能增强免疫调节功能和保护氧化损伤，还能快速补充硒元素，因此可作为新型免疫保健食品和抗氧化剂的原料，其制备方法简单，具有广阔的开发和应用前景。技术特征：1.一种具有免疫调节功能的纳米硒-卵白蛋白肽复合物的制备方法，其特征在于：制备方法如下所述：2.根据权利要求1所述的一种具有免疫调节功能的纳米硒-卵白蛋白肽复合物的制备方法，其特征在于：卵白蛋白肽(op)包含以下被鉴定出的卵白蛋白肽序列：radhpflf(arg-ala-asp-his-pro-phe-leu-phe)、dklpgfg(asp-lys-leu-pro-gly-phe-gly)、navlff(asn-ala-val-leu-phe-phe)。3.根据权利要求1所述的一种具有免疫调节功能的纳米硒-卵白蛋白肽复合物的制备方法，其特征在于：纳米硒-卵白蛋白肽复合物的粒径分布在50-200nm左右，分散性良好。4.根据权利要求1所述的制备方法制得的纳米硒-卵白蛋白肽复合物，其特征在于：纳米硒-卵白蛋白肽复合物特征峰从3278.65cm-1(-oh伸缩)位移至3383.35cm-1，表明卵白蛋白肽通过-oh与se分子之间产生缔合作用；纳米硒-卵白蛋白肽复合物吸收峰从1654.32cm-1(酰胺i带，c＝o伸缩)位移至1643.64cm-1，与c＝o伸缩震动有关；从1562.63cm-1(酰胺ii带，cn伸缩，nh弯曲)位移至1587.17cm-1，说明卵白蛋白肽与纳米硒发生疏水相互作用。5.根据权利要求4所述的纳米硒-卵白蛋白肽复合物的应用，其特征在于：纳米硒-卵白蛋白肽复合物具有免疫调节功能的应用：6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：灌胃低剂量的纳米硒-卵白蛋白肽复合物组与免疫抑制模型组相比，200mg/kg op+15μg/kg senps-op处理免疫抑制小鼠时，能显著提高胸腺和脾脏指数，使脾脏的红髓和白髓边界清晰，改善脾脏损伤，增加gsh、sod含量，显著降低mda含量，证明增强免疫抑制小鼠的免疫功能。7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：灌胃高剂量的纳米硒-卵白蛋白肽复合物组与免疫抑制模型组相比，200mg/kg op+30μg/kg senps-op处理免疫抑制小鼠时，能显著提高胸腺和脾脏指数，使脾脏的红髓和白髓边界清晰，改善脾脏损伤，显著增加gsh、sod含量，显著降低mda含量，证明增强免疫抑制小鼠的免疫功能。8.根据权利要求5所述的应用，纳米硒-卵白蛋白肽复合物能增强免疫调节功能、保护机体的氧化损伤，快速补充硒元素。技术总结本发明属于生物活性肽领域，具体涉及一种具有免疫调节功能的纳米硒‑卵白蛋白肽复合物的制备及其应用。具体而言，以卵白蛋白为原料，经酶解、超滤、干燥得到卵白蛋白肽，包括RADHPFLF、DKLPGFG、NAVLFF中的至少一种；将卵白蛋白肽与亚硒酸钠、半胱氨酸反应后，超滤、干燥得到纳米硒‑卵白蛋白肽。本发明能显著提高免疫抑制小鼠的胸腺和脾脏指数，改善脾脏损伤，提高GSH、SOD含量和降低MDA含量。本发明不仅具有增强免疫调节和保护氧化损伤的功能，还能够快速补充硒元素，为开发新型增强免疫、抗氧化的功能食品提供了一种新的思路，其产品具有广阔的开发和应用前景。技术研发人员：张婷,曾英男,刘静波,徐梦蕾受保护的技术使用者：吉林大学技术研发日：技术公布日：2024/8/16