具有标准化和可重复致敏性的蛋白质可食用粉末

本发明涉及一种制备具有可重复糖化程度和抗原性的可食用粉末的方法，该可食用粉末用于向对蛋白质过敏或处于对蛋白质过敏风险的人受试者引入或重新引入致敏性蛋白质。本发明还涉及可食用粉末和包含多份可食用粉末的试剂盒，用于向对蛋白质过敏或处于对蛋白质过敏风险的人受试者引入或重新引入蛋白质。背景技术：1、乳和蛋过敏是儿童最常见的食物过敏。特别是，牛乳过敏和鸡蛋过敏在儿童中的患病率在1％至3％之间。例如，牛乳过敏会导致过敏反应，并可能对儿童的生长和营养健康产生长期影响。2、减少过敏反应发生的一种方法是避免摄入受试者过敏的食物产品(通常是蛋白质)。这种方法需要严格控制受试者的饮食，通常结合补充由消除蛋白质来源引起的营养不足。3、婴儿配方食品中经常使用的替代性方法是避免使用完整的乳蛋白，并且代替使用深度水解的蛋白质配方食品(ehf)或基于氨基的配方食品(aaf)；在摄入前已破坏引起过敏反应的蛋白质表位。这些方法缓解过敏症状并防止进一步的过敏反应，同时支持患者的营养健康。4、然而，上述方法都不能治疗过敏的潜在病症。因此，通过受控的过敏原呈递引入或重新引入引起过敏反应(经由特异性免疫调节)的蛋白质变得越来越常见。5、wo 2007/054587披露了促进动物口服耐受的方法，该方法包括向动物施用糖化的蛋白质。wo 2007/054587还披露了通过将产品中包含的蛋白质进行固态糖化工艺来生产食物产品的方法。6、g.p.bosman等人.(limited lactosylation of beta-lactoglobulin from cow’s milk exerts strong influence on antigenicity and degranulation of mastcells[来自牛乳的β-乳球蛋白的有限乳糖基化对肥大细胞的抗原性和脱颗粒产生强烈影响],nutrients[营养]2021,13,2041)示出了美拉德反应后β-乳球蛋白的乳糖基化降低了蛋白质的抗原性。发现抗原性的降低是乳糖基化依赖性的。尽管有这些发现，仍然需要具有可靠且可重复的抗原性的产品(范围)，该产品适用于向过敏受试者引入或重新引入食物蛋白质。7、在目前的临床实践中，使用了若几种技术来引入或重新引入侵入性食物蛋白质。例如，口服免疫疗法(oit)涉及消耗递增剂量的侵入性蛋白质。治疗是通过提供低于给定阈值水平(该阈值水平将引发过敏患者的反应)的蛋白质剂量来启动的。随后，蛋白质的剂量随着时间推移(通常在几个月的时间段内)逐渐增加。一旦达到蛋白质的维持剂量，患者必须在给定的时间段内(通常≥1年，可能无限期)摄入蛋白质剂量，以维持受保护的脱敏状态。oit的缺点是需要在很长的时间段内严格饮食，这可能会影响患者的生活质量。8、口服免疫疗法的一种形式是所谓的烘焙乳激发，它涉及在监督的医疗环境中经由含有烘焙乳的食物(例如，饼干；松饼；和薄煎饼)将递增剂量的牛乳蛋白引入或重新引入回患者的饮食中。烘焙乳被用作一种产品，因为大多数孩子在喝牛奶之前已经可以耐受。进一步建立在烘焙乳激发概念的基础上，已经开发出涉及使用俗称为乳阶梯(milk ladder)的指南。乳阶梯很容易按照患者或医生的说明进行操作，可以允许经由已经加热到不同温度的含烘焙乳的食物，逐渐引入或重新引入增量剂量的牛乳蛋白抗原性或乳蛋白类型。它不同于烘焙乳激发，因为它不仅涉及剂量的增加，而且也在爬升阶梯时使用不同的热处理减少的产品。例如，食物阶梯底部的食物(用作过敏患者的起点)包含少量烘焙良好的乳。相比之下，乳阶梯顶部的食物含有大量适度加热的乳。因此，通过调节施用的乳蛋白的量和通过热处理调节乳蛋白的抗原性来实现对乳蛋白的耐受性。烘焙乳激发或乳阶梯除去了对于不必要的饮食限制的需要，从而提高了患者的生活质量。烘焙乳激发或乳阶梯还可以识别出在生命早期产生耐受性的个体。9、使用烘焙乳激发或乳阶梯的一个相关缺点是对于个体很难调节给定烘焙食物中蛋白质的耐受剂量。例如，个体从乳阶梯底部开始摄入包含少量烘焙良好的乳的食物，可能仍然会经历对蛋白质的过敏反应。因此，个体可能因此必须减少食物份量，直到感觉不到过敏反应。由此，发现难以再现伴随已知食物份量的抗原性水平。烘焙差异可能导致抗原性水平差异，例如核心可能仍然是生的，而外部是烧熟的。厨房电器的不同增加了这种差异。此外，减少食品食谱中的乳量或提高烘焙温度以提供耐受的剂量是具有挑战性的。此外，挑剔的食客可能不喜欢使用乳阶梯或乳阶梯中的特定食物部分，并且如果每次都需要消耗相同的食物，那么不挑剔的孩子可能会开始具有味觉疲劳。另一个缺点是，这些产品并不总是被视为健康饮食的一部分(例如，饼干)。因此，难以获得具有高依从性的给定烘焙食物的标准化抗原性。在本领域中，需要具有明确定义和可重复抗原性的产品范围和oit的方案，其可以直接地进行(重新)调整以适应人的需要和过敏反应。技术实现思路1、首先，诸位发明人评估了现有成功的烘焙乳激发和阶梯的抗原性，并且发现烘焙的乳蛋白以这样的方式被引入这些阶梯中，使得抗原性随时间逐渐增加，从在高温下烘焙的饼干开始，以牛乳结束。诸位发明人认为，当向对蛋白质过敏或处于对蛋白质过敏风险的人受试者引入具有标准化和可重复的低抗原性的粉末时，在减少过敏方面的大部分进展是在早期阶段实现的；诸位发明人专注于生产替代乳阶梯的产品(例如，饼干、松饼和酸奶)的粉末。2、考虑到这些发现，诸位发明人开发了一种方法，该方法能够生产具有可重复抗原性水平的含营养蛋白质的粉末，用于向对蛋白质过敏或处于对蛋白质过敏风险的人受试者引入或重新引入蛋白质。已发现，抗原性确实可以制造到预定水平，但关键是以干燥形式加热蛋白质和还原糖，通过在加热的振动管中均匀加热粉末，达到蛋白质和还原糖糖化的程度。还发现通过本发明的方法获得预定的且可重复糖化程度，其中糖化程度被表示为被还原糖阻断的赖氨酸残基的百分比。因此，在糖化程度方面，可以在产品中方便地监测抗原性的可重复控制，而在治疗应用本身的上下文中，在抗原性方面，表达控制可能更方便。根据术语‘可重复糖化程度’理解的是，可以在制造过程中控制糖化程度，优选地在15％以内，更优选地在10％以内，甚至更优选地在5％以内，并且糖化程度可以控制在预定(预设)值，优选地在15％以内、更优选地在10％以内、甚至更优选地在5％以内。不希望被任何理论束缚，诸位发明人相信由于糖化，ige结合点可能被阻断，这阻碍了过敏反应的发生。3、选择管中的温度和湿度条件以避免粉末结块，因此实现对粉末的均匀和连续加热。发现以干燥形式进行加热步骤是关键；虽然还发现湿法加热和湿法糖化会导致蛋白质抗原性降低，但在湿条件下的抗原性只能降低到有限的程度，无法被控制，因此不可重复；发现在65℃-95℃下加热2-4小时会降低抗原性，但不可能以标准化的方式重复抗原性；例如，参考wo 2007/054587中的图1。4、随着制造致敏性定制可食用粉末的可能性，开发了用于oit的更有效的口服免疫疗法程序和试剂盒。这些粉末还处于解决与以上描述的现有烘焙乳激发和阶梯相关的问题的形式。诸位发明人开发了特别适合早期阶段的试剂盒，用低的可重复抗原性粉末替代例如饼干或松饼(现有乳阶梯中的一部分)。5、根据术语‘可重复抗原性’理解的是，可以在制造过程中控制抗原性，优选地在10％以内、更优选地在5％以内，并且抗原性可以控制在预定(预设)值，优选地在10％以内、更优选地在5％以内。抗原性描述了由于对给定物质的免疫应答而产生的抗体特异性识别的能力；可以使用敏感且准确的酶联免疫吸附测定(elisa)来确定抗原性。与乳阶梯相比，将100ml商业超高温(uht)脱脂牛乳(德国米尔博纳af股份有限公司(milbona afdeutschland gmbh))的(乳蛋白)抗原性设定为100，并且将整个说明书和权利要求中使用的基于乳-蛋白质的粉末的抗原性水平被标准化为100ml经uht处理的牛乳参考物的抗原性。参考物的uht处理优选地涉及在140℃-150℃下加热2-5秒，但还可以是任何其他相应的时间和温度的uht组合。100ml经uht处理的脱脂牛乳相当于3.47克乳蛋白。可替代地，可以将100ml巴氏消毒的牛乳的抗原性设定为100％，其中优选地将乳在72℃下巴氏消毒20秒，或相应的时间和温度组合以达到相同的效果。6、营养组合物可在消费者端进行进一步加工或处理，但优选地提醒消费者不要进行实质性热处理，即在超过40℃的温度下对营养产品进行处理；较高的温度可能会诱导蛋白质变性并影响抗原性。组合物可附有说明，以避免在用于消耗的产品的制备过程中进行热处理。贯穿申请和权利要求，术语‘含营养蛋白质的粉末、‘可食用粉末’和‘可食用粉末产品’可互换地使用。7、具有可重复抗原性的含蛋白质的营养组合物可有利地用于经由随时间的推移逐步增加抗原性水平以受控方式将蛋白质引入或重新引入个体的饮食中。营养组合物可用于替代或模拟乳阶梯。由于该产品具有可重复抗原性，因此不受消费者对组合物处理的影响，并解决了与传统乳阶梯和烘焙乳激发相关的问题。