一种维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂及其制备方法和

本发明涉及药学领域，具体地，本技术提供了一种维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂及其制备方法和应用。背景技术：1、维甲酸（retinoic acid）是维生素a的活性代谢产物，在多种生物过程中起着至关重要的作用，包括胚胎形态发生和器官发生、细胞增殖、分化和凋亡、调节体内免疫平衡等。其中，维甲酸不仅参与中枢神经系统的正常生理活动，而且在中枢神经系统的多种病理状态中可以起到较好的保护作用。研究证实，维甲酸可以通过抗炎、抗氧化、促进神经再生、调节免疫细胞等多种机制起到对脑疾病的保护作用，如减轻脑缺血再灌注损伤作用、降低脑损伤对血脑屏障的破坏等。这些特性使维甲酸在脑卒中防治研究领域非常有吸引力。2、然而，由于维甲酸的一些物理化学性质的限制，其临床应用并不理想。首先，维甲酸难溶于水，在室温下，ph 7.3的水溶液中溶解度仅为0.21µm，同时维甲酸对光敏感，其稳定性较差，这导致维甲酸给药存在困难；其次，维甲酸在应用于皮肤时会引起刺激，而在静脉内给药时其分解代谢较快，体内半衰期短（t1/2=45min），从而降低其治疗效果；此外，维甲酸参与许多生物过程，因此大剂量的维甲酸的全身给药会引起副作用。所有这些局限性促使研究人员寻找新型且耐受性更好的药物递送载体，开发基于凝胶、脂质体、微粒、纳米颗粒和微/纳米纤维的维甲酸递送制剂，这些药物递送系统的开发为基于维甲酸的疗法提供了几个优势，包括改善溶解、延长循环、降低毒性、实现药物缓释效果和提高疗效。然而，这些新型的药物递送系统往往制备工艺复杂，处方辅料较多、生产成本高，临床转化困难。因此，开发一种更简单易得的维甲酸的药物输送载体尤为重要。3、由于维甲酸在水介质中不溶且高度不稳定，人体内的维甲酸通过结合蛋白来提高自身溶解性和稳定性，并实现体液运输。生理学研究发现，血清白蛋白、转甲状腺素蛋白、附睾维甲酸结合蛋白（epididymal retinoic acid-binding protein）、视黄醇结合蛋白（retinol-binding protein）和细胞维甲酸结合蛋白（cellular retinoic acid-bindingprotein）等都是维甲酸体内转运载体。体外研究发现，维甲酸利用结构上的羧基与转运蛋白上的氨基之间容易形成离子键而生成共晶体。利用这些特性，可以将维甲酸与合适的蛋白通过纳米技术制备成纳米晶。4、纳米晶是解决难溶性小分子药物低溶解度、低生物利用度和制剂处方挑战的重要策略。其药物被稳定剂包裹形成纳米颗粒，纳米晶不需要使用大量表面活性剂或载体材料，含药量高；由于颗粒尺寸减小增加了纳米晶的饱和溶解度，同时，纳米晶通过静电吸附和范德华力等增加了对胃肠道黏膜的生物粘附性，可提高药物口服生物利用度；降低给药剂量而减少药物毒副作用。5、乳铁蛋白（lactoferrin）是一种乳清蛋白，在食品、化妆品和制药应用中作为功能性成分具有相当大的潜力。乳铁蛋白具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗真菌、抗炎、免疫调节、镇痛、抗氧化、增强脂质代谢等多种生物学功能。最新的研究表明，基于乳铁蛋白的单一疗法在减少脑出血后脑损伤方面具有独特的强大作用。乳铁蛋白可以减轻自发性高血压大鼠脑出血引起的神经损伤、保护神经元免受红细胞的毒性作用，并促进小胶质细胞吞噬红细胞和死亡神经元，表明乳铁蛋白在用于脑卒中治疗方面具有较大的潜力。此外，乳铁蛋白成本低廉，没有毒副作用。阻碍其广泛应用的主要挑战是其由于蛋白水解酶的快速降解而导致的体内稳定性差。静脉注射时，乳铁蛋白的血浆半衰期为几分钟，需要频繁给药才能达到治疗效果,口服给药是补充机体乳铁蛋白主要的方式，因为体内乳铁蛋白的重要受体分布在肠粘膜和肠道相关淋巴组织相关细胞上。因此，需要制备一种适合乳铁蛋白口服递送的新制剂。6、虽然已有研究证实，维甲酸和乳铁蛋白在减轻脑疾病导致的神经元损伤、血脑屏障破坏、促进脑损伤后的神经修复、提高新生神经元的存活率方面均具有一定的作用，但维甲酸和乳铁蛋白联合用于脑疾病的预防/治疗目前均未见报道。技术实现思路1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂及制备方法和应用，用于解决现有技术中维甲酸、乳铁蛋白制剂制备工艺复杂、处方辅料多及药物生物利用度的问题。同时，本发明结合维甲酸和乳铁蛋白在防治脑损伤疾病方面的药理作用，对维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂对缺血性脑卒中再灌注损伤的保护效果进行了研究，考察了两者联合用药的协同作用，为维甲酸及乳铁蛋白新制剂、新治疗方案提供基础。2、针对现有技术的不足，本发明第一方面提供维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂，目的之一在于通过将维甲酸制备成纳米级别的药物，克服维甲酸稳定性差和水溶性低的缺点，同时改善维甲酸和乳铁蛋白口服生物利用度低的问题，降低药物给药剂量从而减少药物毒副作用和不良反应。3、一方面，本技术提供了一种维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂，所述维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂通过超声-溶剂挥发法制备。4、进一步地，所述乳铁蛋白为人乳铁蛋白或牛乳铁蛋白，优选为牛乳铁蛋白。5、进一步地，所述维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂中维甲酸与乳铁蛋白的质量比为1:5-20，优选为1:5。6、进一步地，所述维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂的制备方法包括：7、（1）将维甲酸完全溶解于有机溶剂；乳铁蛋白完全溶解于水溶液；8、（2）将所述步骤（1）中的两种溶液混匀，进行超声；9、（3）将所述步骤（2）得到的混合溶液旋蒸除去有机溶剂，即得所述维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂。10、进一步地，步骤（1）中所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、二氯甲烷、二甲基亚砜、四氯化碳中的任意一种或多种的组合；优选为甲醇、乙醇或二氯甲烷；进一步优选为二氯甲烷。11、步骤（1）中维甲酸与二氯甲烷的质量/体积比为4:1～20:1,优选为10：1；步骤（1）中乳铁蛋白和水的质量/体积比4:1～10:1,优选为6.25：1。12、进一步地，步骤（1）中维甲酸和二氯甲烷的比例为20-5mg：0.5-5ml；优选维甲酸和二氯甲烷的比例为10mg：1ml。13、进一步地，步骤（1）中乳铁蛋白和水的比例为20-100mg：5-10ml；优选乳铁蛋白和水的比例50mg：8ml。14、进一步地，步骤（2）中超声功率为150-400w，优选为200-300w，最优选为260w；超声功率时间1-30min，优选为2.5-10min，最优选为5min。15、另一方面，本技术提供了上述维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂在制备治疗脑卒中、脑损伤、抑郁、肝损伤、炎症或肿瘤的药物中的应用；优选在制备治疗脑缺血/再灌注损伤的药物中的应用。16、进一步地，所述药物具有以下任一项或多项作用：17、(1)降低机体炎症水平；(2)对抗氧化应激损伤；（3）改善神经功能缺损；（4）降低脑梗死体积；（5）调节免疫细胞功能。18、维甲酸、乳铁蛋白可选各种市售产品或自行制备，根据监管的不同使用不同级别和纯度的产品。维甲酸化学式如下所示：19、20、有益效果：21、根据本发明制备维甲酸-乳铁蛋白纳米晶制剂能够极大改善维甲酸溶解性和稳定性。22、根据本发明制备的维甲酸-乳铁蛋白纳米晶，能够极大提高药物口服生物利用度。23、根据本发明制备的维甲酸-乳铁蛋白纳米晶中，乳铁蛋白既作为药效活性成分，协同增强维甲酸抗脑缺血/再灌注损伤的药效作用，同时乳铁蛋白也作为维甲酸的载体蛋白，并发挥了稳定剂的作用，极大提高了维甲酸的递送效率，实现一个成分多功能的效果。24、本发明提供的维甲酸-乳铁蛋白处方不涉及其他药用辅料，处方简单。纳米晶的制备工艺简单迅速、条件温和、得率高；有利于大规模生产，具有广阔的应用和市场前景。