用于红细胞介导的递送活性药物成分至靶细胞的

本发明总体上涉及被配置成结合cd47的治疗化合物，并且更具体地，被配置成结合红细胞表面上的cd47并且随后转移至靶细胞表面上的cd47的这样的化合物，该治疗化合物最终通过胞吞作用被靶细胞内化。背景技术：1、分化簇47(“cd47”)为一种整合素相关蛋白，是多跨质膜蛋白，参与抑制吞噬细胞清除或中性粒细胞运动的过程。信号调节蛋白α(“sirpα”)是由先天免疫细胞(例如巨噬细胞和树突状细胞)表达的跨膜蛋白，是cd47的主要受体。sirpα与cd47的结合触发sirpα抑制信号，所述抑制信号作为给予接受者巨噬细胞的“不要吃我”信号，阻止其吞噬作用的激活。因此，sirpα-cd47相互作用作为先天免疫和后续适应性免疫的负检查点发挥作用。其它蛋白质(例如信号调节蛋白γ(“sirpγ”)和血小板反应蛋白-1(“tsp-1”))也可以结合cd47，从而抑制免疫反应的方面。2、哺乳动物细胞通常表达低水平的cd47以保护它们不被吞噬。然而，癌细胞过表达cd47作为逃逸免疫监视和吞噬细胞攻击的逃逸机制。一些人实体瘤过表达cd47，即这些实体瘤的细胞比正常细胞平均表达更多的cd47(willingham et al.pnas109(17):6662-6667(2012)，其全文通过引用并入本文)。因此，cd47已成为癌症免疫治疗的一个有前途的新治疗靶点(willingham et al.pnas109(17):6662-6667(2012)；weiskopf,eur.j.cancer 76:100-109(2017)；weiskopf et al.j clin invest 126(7):2610-2620(2016)，其中每一篇全文均通过引用并入本文)。3、此外，病毒感染细胞也表达高水平的cd47。这些病毒感染细胞包含被sars-cov-2感染的细胞，所述病毒引起covid-19(cham et al.cell rep 14；31(2):107494(2020)doi:10.1016/j.celrep.2020.03.058和mclaughlin et al.biorxiv 2021.03.01.433404(2021)doi:10.1101/2021.03.01.433404，其中每一篇全文均通过引用并入本文)。cd47抑制信号传导的阻断已被证明增强对病毒感染的先天和适应性免疫反应。4、此外，已在纤维化成纤维细胞中观察到增加的cd47表达，并且阻断cd47通过增强对促纤维化的成纤维细胞的吞噬作用以及通过消除对适应性免疫力的抑制作用来逆转纤维化(cui et al.nat commun 11:2795(2020)；wernig et al.pnas2017；114(18):4757-62；boyd j cyst fibros suppl 1:s54-s59(2020)；lerbs et al.jci insight 2020；5(16):e140458(2020)，其中每一篇全文均通过引用并入本文)。5、因此，cd47为癌症、病毒感染以及纤维化疾病(例如囊性纤维化)的治疗提供了有前途的靶点。技术实现思路1、根据本发明的一种实施方案，治疗化合物，用于在哺乳动物对象体内通过rbc介导递送至表达cd47的靶细胞，治疗化合物包含：与活性药物成分(“api”)缀合以形成缀合物的cd47结合蛋白；其中cd47结合蛋白选自由以下组成的组：野生型sirpα(seq id no:1)、vsirpα(seq id no:3)、野生型血小板反应蛋白-1(tsp-1)(seq id no:7)、野生型sirpγ(seq id no:4)、vsirpγ-1(seq id no:5)、vsirpγ-2(seq id no:6)、alx148(seq id no:962)、tti-661(seq id no:963)、tti-662(seq id no:964)、前述任一种的同源物和它们的组合，并且被配置成使缀合物与对象的红细胞的cd47结合，以能够通过对象的循环系统，将缀合物运送至靶细胞，以便(i)被配置成使缀合物与红细胞的cd47结合的cd47结合蛋白与靶细胞的cd47结合，从而将缀合物从红细胞转移至靶细胞以在靶细胞上形成缀合物-cd47复合物，以此阻断cd47并抑制作为靶细胞的免疫逃逸机制的cd47活性，以及(ii)缀合物通过缀合物-cd47复合物的胞吞作用被靶细胞摄取，以此进一步抑制靶细胞的免疫逃逸机制，并将api递送至靶细胞。哺乳动物对象可以是人类。2、根据本发明的另一种实施方案，治疗化合物，用于在哺乳动物对象体内通过rbc介导递送至表达cd47的靶细胞，治疗化合物包含：与api缀合以形成缀合物的cd47结合蛋白；其中cd47结合蛋白选自由以下组成的组：野生型血小板反应蛋白-1(tsp-1)(seq id no:7)、野生型sirpγ(seq id no:4)、vsirpγ-1(seq id no:5)、vsirpγ-2(seq id no:6)、alx148(seq id no:962)、tti-661(seq id no:963)、tti-662(seq id no:964)、前述任一种的同源物和它们的组合，并且被配置成使缀合物与对象的红细胞的cd47结合，以能够通过对象的循环系统，将缀合物运送至靶细胞，以便(i)被配置成使缀合物与红细胞的cd47结合的cd47结合蛋白与靶细胞的cd47结合，从而将缀合物从红细胞转移至靶细胞以在靶细胞上形成缀合物-cd47复合物，以此阻断cd47并抑制作为靶细胞的免疫逃逸机制的cd47活性，以及(ii)缀合物通过缀合物-cd47复合物的胞吞作用被靶细胞摄取，以此进一步抑制靶细胞的免疫逃逸机制，并将api递送至靶细胞。哺乳动物对象可以是人类。3、根据本发明的另一种实施方案，治疗化合物，用于在哺乳动物对象体内通过rbc介导递送至表达cd47的靶细胞，治疗化合物包含：与api缀合以形成缀合物的cd47结合蛋白；其中cd47结合蛋白是抗cd47抗体，所述抗cd47抗体包含：(a)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别含有seq id no:932、seq id no:933和seq id no:934的互补决定区cdr1、cdr2和cdr3，并且所述轻链可变区包含分别含有seq id no:935、seq id no:936和seq id no:937的互补决定区cdr1、cdr2和cdr3；(b)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别含有seq id no:940、seq id no:941和seq id no:942的互补决定区cdr1、cdr2和cdr3，并且所述轻链可变区包含分别含有seq id no:943、seq id no:944和seq idno:945的互补决定区cdr1、cdr2和cdr3；(c)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别含有seq id no:948、seq id no:949和seq id no:950的互补决定区cdr1、cdr2和cdr3，并且所述轻链可变区包含分别含有seq id no:951、seq id no:952和seq id no:953的互补决定区cdr1、cdr2和cdr3；或者(d)重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含分别含有seq id no:956、seq id no:957和seq id no:958的互补决定区cdr1、cdr2和cdr3，并且所述轻链可变区包含分别含有seq id no:959、seq id no:960和seq id no:961的互补决定区cdr1、cdr2和cdr3；并且被配置成使缀合物与对象的红细胞的cd47结合，以能够通过对象的循环系统，将缀合物运送至靶细胞，以便(i)被配置成使缀合物与红细胞的cd47结合的cd47结合蛋白与靶细胞的cd47结合，从而将缀合物从红细胞转移至靶细胞，使得在靶细胞上形成缀合物-cd47复合物，以此阻断cd47并抑制作为靶细胞免疫逃逸机制的cd47活性，以及(ii)缀合物通过缀合物-cd47复合物的胞吞作用被靶细胞摄取，从而进一步抑制靶细胞的免疫逃逸机制，并将api递送至靶细胞。哺乳动物对象可以是人类。4、cd47结合蛋白可以通过选自由以下组成的组的键与api缀合：共价键、氢键、离子键、范德华相互作用及其组合。cd47结合蛋白可以通过连接子与api缀合，并且连接子可以是可裂解的。连接子可以被配置成被溶酶体降解酶裂解。5、在一些实施方案中，api选自由rna、dna、rna衍生物、dna衍生物、蛋白质和小分子组成的组。rna可以选自由sirna、shrna、mirna、antimir和mrna组成的组。6、靶细胞可以是选自由癌细胞、病毒感染细胞、纤维化细胞及其组合组成的组的细胞。在一些实施方案中，靶细胞是癌细胞。在一些实施方案中，靶细胞是病毒感染细胞。在一些实施方案中，靶细胞是纤维化细胞。7、在一些实施方案中，癌细胞在能归因于选自由以下组成的组的癌症的肿瘤中：脑肿瘤、脊髓肿瘤、视网膜母细胞瘤、口腔癌、鼻腔癌、鼻窦癌、咽癌、喉癌、颈癌、头颈癌、黑色素瘤、皮肤癌、乳腺癌、甲状腺癌、恶性肾上腺肿瘤、内分泌癌、肺癌、胸膜肿瘤、呼吸道癌、食道癌、胃癌、小肠癌、结肠癌、肛门癌、肝癌、胆道癌、胰腺癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、阴茎癌、宫颈癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、卵巢癌、血癌包括急性/慢性白血病、恶性淋巴瘤和多发性骨髓瘤、骨肿瘤、软组织肿瘤、儿童白血病和儿童癌症。8、在一些实施方案中，癌细胞能归因于选自以下组成的组的癌症：卵巢浆液性囊腺癌、肺腺癌、宫颈和宫颈内膜癌、头颈鳞状细胞癌、甲状腺癌、子宫体子宫内膜样癌、前列腺腺癌、间皮瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、急性白血病、肺鳞状细胞癌、急性淋巴细胞性白血病、食道癌、粘液纤维肉瘤、胰腺腺癌、直肠腺癌、结肠腺癌、急性巨核细胞白血病、乳腺浸润性癌、胃腺癌、膀胱尿路上皮癌、胆管癌、白血病、胸腺癌、平滑肌肉瘤、胸腺瘤、未分化多形性肉瘤、子宫癌肉瘤、急性髓系白血病、多形性胶质母细胞瘤、肉瘤、皮肤黑色素瘤、肾透明细胞癌、去分化脂肪肉瘤、淋巴瘤、视网膜母细胞瘤、神经母细胞瘤、骨肉瘤、幼年型粒单核细胞白血病、胃肠道间质瘤、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤、肾上腺皮质癌、谱系不明的急性白血病、嗜铬细胞瘤和副神经节瘤、胶质瘤、睾丸生殖细胞瘤、幕上胚胎性肿瘤nos、神经纤维瘤、肾乳头状细胞癌、肝细胞癌、肾嫌色细胞癌、恶性外周神经鞘瘤、室管膜瘤、肾上腺皮质癌、鼻咽癌、梭形细胞/硬化性横纹肌肉瘤、黑色素瘤、脉络丛癌、未分化梭形细胞癌、肌上皮癌、腺泡状横纹肌肉瘤、横纹肌肉瘤、非典型畸胎瘤/横纹肌肉瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、纤维瘤病、滑膜肉瘤、肾母细胞瘤、肌纤维黏液瘤、纤维板层型肝细胞癌、未分化肉瘤nos、胚胎性横纹肌肉瘤、葡萄膜黑色素瘤、尤因肉瘤、肝母细胞瘤、婴儿纤维肉瘤、ini缺乏型软组织肉瘤noa、未分化肝肉瘤和髓母细胞瘤。9、在一些实施方案中，病毒感染细胞感染有sars-cov-2病毒。在一些实施方案中，纤维化细胞与囊性纤维化相关。10、在一些实施方案中，api为sirna，sirna为包含反义rna链和有义rna链的双链rna分子，其中：(a)反义rna链的长度为19个至29个核苷酸，并且与靶哺乳动物mrna序列中的连续核苷酸互补，mrna序列选自由seq id no:8至seq id no:747和seq id no:771至seq idno:824组成的组，(b)有义rna链长度为19个至29个核苷酸，并且与来自反义rna链的14个至29个核苷酸互补，并且(c)双链rna分子具有长度为14个至29个核苷酸的双链区域和长度为0个至5个核苷酸的3’突出端区域。在其它实施方案中，mrna序列选自由seq id no:22至seqid no:747和seq id no:771至seq id no:824组成的组。在一些实施方案中，mrna序列选自由seq id no:22至seq id no:37组成的组。在其它实施方案中，mrna序列选自由seq idno:38至seq id no:39组成的组。在一些实施方案中，mrna序列选自由seq id no:40至seqid no:43组成的组。在其它实施方案中，mrna序列选自由seq id no:44至seq id no:51组成的组。11、在一些实施方案中，api为sirna，sirna为包含反义rna链和有义rna链的双链rna分子，其中：(a)反义rna链的长度为19个至29个核苷酸，并且与靶哺乳动物mrna序列中的连续核苷酸互补，mrna序列选自由seq id no:8至seq id no:21、seq id no:482至seq idno:486和seq id no:748至seq id no:765组成的组，(b)有义rna链的长度为19个至29个核苷酸，并且与来自反义rna链的14个至29个核苷酸互补，并且(c)双链rna分子具有长度为14个至29个核苷酸的双链区域和长度为0个至5个核苷酸的3’突出端区域。在其它实施方案中，mrna序列选自由seq id no:482至seq id no:486和seq id no:748至seq id no:765组成的组。12、在一些实施方案中，api为sirna，sirna为包含反义rna链和有义rna链的双链rna分子，其中：(a)反义rna链的长度为19个至29个核苷酸，并且与靶哺乳动物mrna序列中的连续核苷酸互补，mrna序列选自由seq id no:8至seq id no:21、seq id no:40至seq id no:43和seq id no:766至seq id no:770组成的组，(b)有义rna链的长度为19个至29个核苷酸，并且与来自反义rna链的14个至29个核苷酸互补，并且(c)双链rna分子具有长度为14个至29个核苷酸的双链区域和长度为0个至5个核苷酸的3’突出端区域。在其它实施方案中，mrna序列选自由seq id no:40至seq id no:43和seq id no:766至seq id no:770组成的组。13、api为shrna，shrna为长度为44个至71个核苷酸的单链rna分子，并且在5’-3’方向上具有：在单链rna分子的5’端的19个至29个核苷酸的第一区域，第一区域具有第一序列；与第一区域直接相邻的4个至11个核苷酸的第二区域，第二区域具有第二序列；与第二区域直接相邻的19个至29个核苷酸的第三区域，第三区域具有第三序列；以及在单链rna分子的3’端的与第三区域直接相邻的2个核苷酸的第四区域，第四区域具有第四序列，其中：(a)第一区域具有与第三区域相同数目的核苷酸，(b)第三序列是第一序列的反向互补序列，(c)第三区域与靶哺乳动物mrna序列中的连续核苷酸互补，mrna序列选自由seq id no:8至seqid no:747和seq id no:771至seq id no:824组成的组，并且(d)单链rna分子被配置成形成茎环结构，第一区域与第三区域碱基配对以形成茎，第二区域形成环，并且第四区域形成3’突出端。在其它实施方案中，mrna序列选自由seq id no:22至seq id no:747和seq idno:771至seq id no:824组成的组。在一些实施方案中，mrna序列选自由seq id no:22至seq id no:37组成的组。在其它实施方案中，mrna序列选自由seq id no:38至seq id no:39组成的组。在一些实施方案中，mrna序列选自由seq id no:40至seq id no:43组成的组。在其它实施方案中，mrna序列选自由seq id no:44至seq id no:51组成的组。14、在一些实施方案中，api为shrna，shrna为长度为44个至71个核苷酸的单链rna分子，并且在5’-3’方向上具有：在单链rna分子5’端的19个至29个核苷酸的第一区域，第一区域具有第一序列；与第一区域直接相邻的4个至11个核苷酸的第二区域，第二区域具有第二序列；与第二区域直接相邻的19个至29个核苷酸的第三区域，第三区域具有第三序列；以及在单链rna分子3’端的与第三区域直接相邻的2个核苷酸的第四区域，第四区域具有第四序列，其中：(a)第一区域具有与第三区域相同数目的核苷酸，(b)第三序列是第一序列的反向互补序列，(c)第三区域与靶哺乳动物mrna序列中的连续核苷酸互补，mrna序列选自由seqid no:8至seq id no:21、seq id no:482至seq id no:486和seq id no:748至seq id no:765组成的组，并且(d)单链rna分子被配置成形成茎环结构，第一区域与第三区域碱基配对以形成茎，第二区域形成环，并且第四区域形成3’突出端。在其它实施方案中，mrna序列选自由seq id no:482至seq id no:486和seq id no:748至seq id no:765组成的组。15、在一些实施方案中，api为shrna，shrna为长度为44个至71个核苷酸的单链rna分子，并且在5’-3’方向上具有：在单链rna分子的5’端的19个至29个核苷酸的第一区域，第一区域具有第一序列；与第一区域直接相邻的4个至11个核苷酸的第二区域，第二区域具有第二序列；与第二区域直接相邻的19个至29个核苷酸的第三区域，第三区域具有第三序列；以及在单链rna分子的3’端的与第三区域直接相邻的2个核苷酸的第四区域，第四区域具有第四序列，其中：(a)第一区域具有与第三区域相同数目的核苷酸，(b)第三序列是第一序列的反向互补序列，(c)第三区域与靶哺乳动物mrna序列中的连续核苷酸互补，mrna序列选自由seq id no:8至seq id no:21、seq id no:40至seq id no:43和seq id no:766至seq idno:770组成的组，并且(d)单链rna分子被配置成形成茎环结构，第一区域与第三区域碱基配对以形成茎，第二区域形成环，并且第四区域形成3’突出端。在其它实施方案中，mrna序列选自由seq id no:40至seq id no:43和seq id no:766至seq id no:770组成的组。16、在一些实施方案中，api为选自由以下组成的组的mirna：seq id no:825至seq idno:844、seq id no:849至seq id no:851、seq id no:853、seq id no:855、seq id no:857、seq id no:864、seq id no:865和seq id no:867至seq id no:883。17、在一些实施方案中，api为antimir，antimir为长度为12个至25个核苷酸的单链核酸分子，antimir具有与靶成熟mirna产物序列中的连续核苷酸互补的12个至25个连续核苷酸的序列，成熟mirna产物序列选自由seq id no:884至seq id no:908组成的组，其中成熟mirna产物序列中的连续核苷酸在5’到3’方向上包含成熟mirna产物序列的第2个至第8个核苷酸。18、在一些实施方案中，api为选自由以下组成的组的小分子：甲氨蝶呤；多柔比星；长春花生物碱；喜树碱类似物；微管破坏剂，例如奥瑞他汀类(auristatins)(例如，mmae和mmaf)和美登木素生物碱(例如，dm1和dm4)；以及dna损伤剂，例如dna拓扑异构酶i抑制剂(例如，sn-38和依喜替康(exatecan))、双链断裂剂(例如，卡奇霉素(calicheamicin))、交联剂(例如，吡咯并苯并二氮杂卓二聚体-pbd)和烷化剂(例如，倍癌霉素(duocarmycin)和吲哚并苯并二氮杂卓二聚体-ign)。19、在一些实施方案中，api为蛋白质，蛋白质具有选自由seq id no:909至seq idno:929及其同源物组成的组的氨基酸序列。在其它实施方案中，蛋白质由选自由seq idno:909至seq id no:929及其同源物组成的组的氨基酸序列组成。20、在一些实施方案中，api为编码选自由seq id no:909至seq id no:929及其同源物组成的组的氨基酸序列的mrna，mrna被配置成在靶细胞中翻译以产生包含该氨基酸序列的蛋白质。在其它实施方案中，mrna被配置成在靶细胞中翻译以产生由该氨基酸序列组成的蛋白质。在一些实施方案中，mrna是经密码子优化的。21、根据本发明的一种实施方案，治疗有相应需要的哺乳动物对象的癌症的方法，方法包括施用治疗有效量的本文所述的治疗化合物。哺乳动物对象可以是人类。22、根据本发明的另一种实施方案，治疗有相应需要的哺乳动物对象的病毒感染的方法，方法包括施用治疗有效量的本文所述的治疗化合物。哺乳动物对象可以是人类。23、根据本发明的一种实施方案，治疗有相应需要的哺乳动物对象的纤维化疾病的方法，方法包括施用治疗有效量的本文所述的治疗化合物。哺乳动物对象可以是人类。24、根据本发明的另一种实施方案，药物组合物包含本文所述的治疗化合物。