一种格氏乳杆菌或其胞外多糖的应用

本发明属于食品加工领域，具体涉及一种格氏乳杆菌及其胞外多糖的应用。背景技术：1、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，uc)是一种慢性反复发作的疾病，主要临床表现为粘液性便血、腹痛和腹泻。其主要特征是直肠和结肠浅表粘膜溃疡的发展。此外，患者经常会出现严重并发症，如结肠癌癌症，预后不佳。2、目前，uc治疗有四种主要类型：氨基水杨酸、糖皮质激素、免疫调节药物和生物药物。临床上，使用氨基水杨酸和糖皮质激素治疗轻度至中度uc患者的，而中度至重度uc患者通常使用免疫抑制剂、生物制剂或其组合。然而，目前依旧存在激素依赖、不良反应和耐药性等问题，迫切需要开发安全有效的治疗方法。利用益生菌和天然多糖治疗或辅助治疗溃疡性结肠炎是目前研究的热点。3、乳酸菌(lactic acid bacteria,lab)广泛存在于自然界中，并在其生长代谢过程中分泌胞外多糖(exopolysaccharides,eps)。乳酸菌(lab)类的益生菌的胞外多糖是最常见也最被广泛研究的。lab的eps在各个行业都有潜在的应用，尤其是食品、化妆品、制药、纺织、石油和农业。格氏乳杆菌是乳酸菌中的一种，但目前关于格氏乳杆菌的研究还主要停留在菌株的益生特性上，关于格氏乳杆菌多糖的研究较少，还未有格氏乳杆菌胞外多糖治疗溃疡性结肠炎研究的报道。技术实现思路1、针对于微生物多糖应用问题，本发明的目的是提供一种格氏乳杆菌及其胞外多糖的应用。本发明针对目前溃疡性结肠炎治疗过程中存在的治疗预后效果差、耐药性强、激素依赖等不足，提供了一种安全、高效、副作用小的天然治疗溃疡性结肠炎的制备方法和应用。2、本发明的目的通过如下技术方案实现：3、一种格氏乳杆菌或其胞外多糖在制备抗溃疡性结肠炎药物中的应用，所述格氏乳杆菌为格氏乳杆菌(lactobacillus gasseri)lgz1029，于2019年4月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称为gdmcc，菌株保藏编号为gdmcc no:60641；4、所述格氏乳杆菌胞外多糖是将格氏乳杆菌lgz1029接种至发酵培养基进行发酵培养，获得发酵液；从发酵液中提取胞外多糖。5、优选地，从发酵液中提取胞外多糖是对发酵液除菌体、醇沉、除蛋白、经离子交换柱、凝胶柱洗脱。6、优选地，所述胞外多糖的提取方法，包括如下步骤：7、(1)菌种活化：将格氏乳杆菌lgz1029活化后得到种子发酵液，所述种子发酵液的菌含量为108～109cfu/ml；8、(2)扩大培养：将步骤(1)所述种子发酵液按体积比(1～5):100接入发酵培养基中，静置培养，得到发酵液；9、(3)除菌体：将步骤(2)所述发酵液离心，除去菌体沉淀，保留上清液；10、(4)醇沉：向步骤(3)所述上清液经过旋蒸浓缩后，加入95％乙醇，静置过夜后离心取沉淀，收集沉淀溶于水，得粗多糖溶液；11、(5)除蛋白：向步骤(4)中所得粗多糖液加入sevage试剂，置于摇床震荡混匀，使得蛋白充分吸附在有机相中，然后离心，保留水相，重复操作，直至蛋白完全除去，将收集的水相进行透析冻干，得到粗胞外多糖；12、(6)将步骤(5)所述粗胞外多糖配置成10～30mg/ml溶液，经deae sepharosetmfast flow离子交换柱洗脱得到lp2，所述洗脱液为0.1±0.05mol/l nacl溶液，接着经sephadex g-100凝胶柱分离纯化，再旋蒸浓缩后，真空冷冻干燥，得到胞外多糖冻干粉lp2*。13、优选地，步骤(4)所述上清液与95％乙醇体积比为1：(3～5)；步骤(5)所述粗多糖液与sevage试剂体积比为(4～5):1。14、优选地，步骤(2)所述培养条件为：发酵温度37±2℃，接种量2～5％，发酵时间为21±3h。15、deae sepharosetm fast flow阴离子交换柱层析，是基于离子交换层析的原理，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。阴离子交换基质结合带有负电荷的酸性多糖，带有负电荷的酸性多糖被吸附在柱子上无法被去离子水洗脱下来。当提高洗脱液中的盐浓度时，根据酸性多糖中所带负电荷与填料基质的结合能力不同依次被洗脱下来。16、本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：17、(1)本发明所得到的胞外多糖lp2*为首次从格氏乳杆菌lgz1029发酵液中提取的，具有新的结构，组分均一，其分子量为53,705da，单糖组成摩尔比为半乳糖：葡萄糖：甘露糖＝3.03：22.46：74.52。18、(2)本发明提取的格氏乳杆菌lgz1029胞外多糖lp2*纯度高达98％。19、(3)采用红外、甲基化分析格氏乳杆菌lgz1029胞外多糖lp2*的结构由t-manp-(1→、t-galp-(1→、→3)-manp-(1→、→2)-manp-(1→、→6)-manp-(1→、→6)-glcp-(1→、→4)-glcp-(1→和→2,6)-glcp-(1→(相对摩尔比为31.05：1.40：11.26：23.63：4.43：6.84：1.82：19.58)组成。20、(4)采用扫描电镜发现格氏乳杆菌lgz1029胞外多糖lp2*表现为不规则片状结构，部分呈圆球结构，具有一定吸水保湿性和潜在的食品应用价值。21、(5)经小鼠动物实验证实格氏乳杆菌lgz1029及其胞外多糖lp2具有良好的抗溃疡性结肠炎效果，lgz1029及其胞外多糖lp2能够减缓体重下降，降低dai疾病活动指数评分，改善结肠缩短，减轻结肠粘膜损伤，调节炎症因子、mpo和nf-κb水平。22、(6)本发明首次探究了格氏乳杆菌胞外多糖对溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用，丰富了目前国内格氏乳杆菌胞外多糖的研究，同时对难治愈的结肠炎提供了新的治疗或辅助治疗手段。23、菌体：格氏乳杆菌(lactobacillus gasseri)lgz1029，由本实验室前期从广州1月龄婴儿粪便中分离筛选得到，并于2019年4月29日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存的菌株编号为gdmcc 60641，该菌株已在中国专利cn201910902795.8中公开。技术特征：1.一种格氏乳杆菌或其胞外多糖在制备抗溃疡性结肠炎药物中的应用，其特征在于，所述格氏乳杆菌为格氏乳杆菌(lactobacillus gasseri)lgz1029，于2019年4月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称为gdmcc，菌株保藏编号为gdmcc no:60641；2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胞外多糖的分子量为53,705da。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，从发酵液中提取胞外多糖是对发酵液除菌体、醇沉、除蛋白、经离子交换柱、凝胶柱洗脱。4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述胞外多糖的提取方法，包括如下步骤：5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(4)所述上清液与95％乙醇体积比为1：(3～5)；步骤(5)所述粗多糖液与sevage试剂体积比为(4～5):1。6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)所述培养条件为：发酵温度37±2℃，接种量2～5％，发酵时间为21±3h。技术总结本发明属于食品加工领域，公开了一种格氏乳杆菌或其胞外多糖的应用。所述格氏乳杆菌为格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)LGZ1029，于2019年4月16日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，简称为GDMCC，菌株保藏编号为GDMCC No:60641；本发明的胞外多糖为首次从格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)LGZ1029发酵液中提取。经小鼠动物实验证实该格氏乳杆菌及其胞外多糖均具有良好的抗溃疡性结肠炎的效果。技术研发人员：刘冬梅,吴佳娟受保护的技术使用者：华南理工大学技术研发日：技术公布日：2024/8/16