基于mRNA的HPV+癌症疫苗以及其用途的制作方法

本发明涉及hpv+癌症疫苗，特别是基于mrna的针对hpv+癌症的疫苗。本文还提供了包含疫苗的药物组合物、使用疫苗预防或改善病毒感染的方法以及包含疫苗的药盒。背景技术：1、人乳头瘤病毒(hpv)为展示高物种特异性的约7.9千碱基长度的小裸双链dna病毒。预期约5分之4(80％)的人变得由hpv病毒株感染。许多hpv感染不引起症状，并且90％在两年内自行消退。超过40种hpv病毒株通过性接触扩散，引起生殖器疣、增生性病变以及甚至恶性肿瘤。基于hpv病毒株如何罕见或常见地在异常组织或肿瘤中被检测到，将hpv病毒株广义地归类至“低”和“高”风险组。低风险hpv病毒株(诸如hpv6和hpv11)很少发展成癌症。高风险hpv可引起若干类型的癌症并且包括约14种高风险hpv类型，例如hpv16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66以及68。这些高风险hpv中的两个hpv16和hpv18负责大多数hpv相关癌症，包括但不限于女性的侵入性宫颈癌、头颈区癌症类型(例如头颈鳞状细胞癌(hnscc))以及其他生殖器肿瘤。到2015年为止，与发展恶性肿瘤相关的高风险hpv类型与90-93％的肛门癌、12-63％的口咽癌、36-40％的阴茎癌、40-64％的阴道癌以及40-51％的外阴癌有关。总的说来，hpv被评估为引起约5.2％的全世界癌症负荷(nakagama等人,(2015),clin vaccine immunol；22(7):679-687)。技术实现思路1、本发明提供了一种新颖的基于mrna的疫苗，所述基于mrna的疫苗引发针对hpv+癌症的免疫性。2、在本发明的一个方面中，提供了一种包含信使核糖核酸(mrna)的药物组合物，其中mrna包含编码融合蛋白的编码序列，所述融合蛋白包含：(a)包含人乳头瘤病毒(hpv)e6蛋白或其免疫原性变体或片段的e6组分，以及(b)包含hpv e7蛋白或其免疫原性变体或片段的e7组分。3、在一些实施方案中，e6组分包含野生型hpv e6蛋白或其免疫原性片段。在一些实施方案中，e6组分包含seq id no:1或2中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，e6组分包含变体hpve6蛋白或其免疫原性片段。在一些实施方案中，其中变体hpve6蛋白包含突变e18r、f47r和/或d49a，其中氨基酸位置是相对于seq id no:1。在一些实施方案中，e6组分包含seq id no:3或4中所示的氨基酸序列。4、在一些实施方案中，e7组分包含野生型hpv e7蛋白或其免疫原性片段。在一些实施方案中，e7组分包含seq id no.5中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，e7组分包含变体hpve7蛋白或其免疫原性片段。在一些实施方案中，变体hpve7蛋白包含突变c24g和/或e26q，其中氨基酸位置是相对于seq id no:5。在一些实施方案中，e7组分包含seq id no:6中所示的氨基酸序列。5、在一些实施方案中，e6组分与e7组分直接融合至彼此。在一些实施方案中，e6组分与e7组分经由接头融合。在一些实施方案中，接头为gs接头。在一些实施方案中，e6组分在e7组分的n端。在一些实施方案中，e6组分在e7组分的c端。6、在一些实施方案中，融合蛋白还包含增强组分。在一些实施方案中，增强组分包含泛素肽。在一些实施方案中，泛素肽包含seq id no:28中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，泛素肽还包含c端延伸肽。在一些实施方案中，c端延伸肽长至少约25个氨基酸。在一些实施方案中，c端延伸肽包含seq id no:29中所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，增强组分在e6和e7组分的n端。7、在一些实施方案中，融合蛋白还包含信号肽。8、在一些实施方案中，mrna还包含5'非翻译区(utr)。在一些实施方案中，5'utr与seq id no:7中所示的核酸序列具有至少80％序列同一性。在一些实施方案中，mrna还包含3'非翻译区(utr)。在一些实施方案中，3'utr与seq id no:8中所示的核酸序列具有至少80％序列同一性。在一些实施方案中，mrna还包含聚(a)序列。在一些实施方案中，聚(a)序列具有约50个核苷酸或更长的长度。在一些实施方案中，mrna包含化学修饰。在一些实施方案中，化学修饰包含假尿苷、1-甲基假尿苷。在一些实施方案中，mrna还包含5'帽。9、在一些实施方案中，编码序列为密码子优化的。在一些实施方案中，mrna的编码序列中编码e6组分的部分包含与以下各项具有至少80％同一性的核酸序列：seq id no:10和12的核苷酸72-524；seq id no:14的核苷酸282-734；seq id no:16的核苷酸357-809；或seq id no:18、20、22以及24的核苷酸357-830。在一些实施方案中，mrna的编码序列中编码e7组分的部分包含与以下各项具有至少80％同一性的核酸序列：seq id no:10和12的核苷酸579-872；seq id no:14的核苷酸789-1,082；seq id no:16的核苷酸864-1,157；seq idno:18、22以及24的核苷酸885-1,178；或seq id no:20的核苷酸885-1,178。在一些实施方案中，mrna的编码序列中编码增强组分的部分包含与以下各项具有至少80％同一性的核酸序列：seq id no:14的核苷酸54-281；或seq id no:16、18、20、22以及24的核苷酸54-356。在一些实施方案中，编码融合蛋白的mrna的编码序列包含与以下各项具有至少80％同一性的核酸序列：seq id no:10和12的核苷酸72-872；seq id no:14的核苷酸54-1,094；seq idno:16的核苷酸54-1,169；seq id no:18、22以及24的核苷酸885-1,182；或seq id no:20的核苷酸54-1,178。在一些实施方案中，mrna包含与seq id no:10、12、14、16、18、20、22以及24中的任一者中所示的核酸序列具有至少80％同一性的核酸序列。在一些实施方案中，mrna包含seq id no:10、12、14、16、18、20、22以及24中所示的核酸序列。10、在一些实施方案中，药物组合物包含在脂质纳米颗粒(lnp)中配制的mrna。在一些实施方案中，lnp包含阳离子脂质。在一些实施方案中，lnp包含磷脂。在一些实施方案中，lnp包含固醇。在一些实施方案中，lnp包含聚合物缀合脂质。在一些实施方案中，lnp包含：30-55％阳离子脂质、5-40％磷脂、20-50％固醇以及聚合物缀合脂质。11、在本发明的另一方面中，提供一种治疗或预防个体的hpv阳性癌症的方法，所述方法包括向个体施用治疗有效量的本文所描述的药物组合物。在一些实施方案中，hpv阳性癌症为肛门与生殖器癌、宫颈癌或阴茎癌或头颈鳞状细胞癌(hnscc)。在一些实施方案中，hpv属于hpv 16型、18型、31型、33型、34型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型、59型、66型、68型以及70型中的任一者。在一些实施方案中，hpv为hpv 16型。12、在一些实施方案中，药物组合物一年施用不超过一次。在一些实施方案中，将药物组合物局部施用至肿瘤。在一些实施方案中，药物组合物与一种或多种抗癌疗法组合施用。在一些实施方案中，一种或多种抗癌疗法选自化学治疗剂、细胞因子、免疫疗法、放射疗法、治疗性抗体以及手术。在一些实施方案中，一种或多种抗癌疗法包含抗pd-1、抗pdl-1和/或抗pdl-2单克隆抗体或其生物活性片段。在一些实施方案中，一种或多种抗癌疗法包含抗tgf-βrii抗体或其生物活性片段。在一些实施方案中，个体为人。13、本文提到的所有公布、专利、专利申请以及公布的专利申请的公开内容在此以全文引用方式并入本文中。