免疫原性融合蛋白组合物和其使用方法与流程

本发明涉及用于预防或治疗肺炎球菌感染的疫苗领域。通过引用并入序列表与本技术相关联的序列表xml以xml文件格式以电子方式提供，并且特此通过引用并入本说明书中。含有序列表xml的xml文件的名称为“mtrv-001_001wo_seq_listing_st26.xml”。xml文件的大小为65,890字节，创建于2022年11月18日。背景技术：1、肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae)是一种革兰氏阳性菌，是败血症、脑膜炎、中耳炎和大叶性肺炎等疾病的主要病因(tuomanen等人《新英格兰医学杂志(nejm)》322:1280-1284,1995)。肺炎链球菌引起的感染仍然是世界范围内的一个重大健康威胁。肺炎球菌与上呼吸道和下呼吸道的细胞以及血管中存在的内皮细胞亲和结合。与大多数细菌一样，肺炎球菌与人类细胞的粘附是通过与真核细胞表面蛋白结合的细菌表面因子的呈递来实现的(cundell,d.&tuomanen,e.(1994)《微生物发病机制(microbpathog.)》17:361-374)。例如，细菌通过聚合免疫球蛋白受体(pigr)在上呼吸道和鼻咽的细胞中转移(zhang等人(2000)《细胞(cell)》102:827-837)。可替代地，当细菌在血流中时，肺炎球菌与内皮细胞结合，并且细菌穿过血管内皮并通过与血小板活化因子(paf)受体结合和转运进入组织(cundell等人(1995)《自然(nature)》,377:435-438)。2、目前针对肺炎链球菌的疫苗使用了在疾病中发现的至多23种最常见血清型的这种细菌的荚膜中的纯化的碳水化合物，然而未缀合的多糖疫苗对肺炎的保护作用仅为50％(shapiro等人《新英格兰医学杂志》325:1453,1991)，并且在年龄在2岁以下的儿童中不具有免疫原性。针对肺炎链球菌的缀合物疫苗涉及肺炎球菌荚膜多糖与白喉类毒素或破伤风类毒素等蛋白质的共价连接，以引发更高的免疫应答并为年龄在2岁以下的儿童提供保护。然而，这些疫苗提供的对肺炎球菌疾病(包含肺炎、败血症或脑膜炎)的保护仅限于调配物中存在的血清型，由此使患者对一百多种肺炎链球菌血清型中的大多数没有保护。此外，无论血清型如何，本领域都需要能够防止肺炎链球菌的鼻咽定植、组织侵袭和疾病症状的疫苗。因此，本文提供的组合物和方法通过提供用于预防和治疗所有年龄组的广泛血清型肺炎球菌感染的药物组合物(例如，疫苗)来满足这些需求。技术实现思路1、本公开提供了包括seq id no:43的氨基酸序列的免疫原性融合蛋白。本公开提供了编码本公开的所述免疫原性融合蛋白中的任一种的多核苷酸。本公开提供了一种宿主细胞，其包括本公开的所述多核苷酸中的任一种。2、本公开提供了一种组合物，其包括本公开的所述免疫原性融合蛋白中的任一种和药学上可接受的载剂。3、在一些实施例中，所述免疫原性融合蛋白是糖基化的。在一些实施例中，所述免疫原性融合蛋白未被糖基化。4、在一些实施例中，所述组合物进一步包括至少一种佐剂。在一些实施例中，所述佐剂包括氢氧化铝、磷酸铝或硫酸铝。在一些实施例中，所述佐剂包括氢氧化铝。在一些实施例中，所述氢氧化铝包括5、本公开提供了：i)经纯化的免疫原性融合蛋白群体，其中至少约90％的所述经纯化的免疫原性融合蛋白为包括seq id no:43的氨基酸序列的全长经纯化的免疫原性融合蛋白；ii)小于80,000ng的宿主细胞蛋白/mg经纯化的免疫原性融合蛋白；和/或iii)小于17eu的内毒素/mg经纯化的免疫原性融合蛋白。6、在一些实施例中，所述组合物包括：i)经纯化的免疫原性融合蛋白群体，其中约95％、约96％、约97％、约98％或约99％的所述经纯化的免疫原性融合蛋白为包括seq idno:43的氨基酸序列的全长经纯化的免疫原性融合蛋白；ii)小于50ng的宿主细胞蛋白/mg经纯化的免疫原性融合蛋白；和/或iii)小于2eu的内毒素/mg经纯化的免疫原性融合蛋白。7、本公开提供了一种产生免疫原性融合蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：a)在适于宿主细胞群体的条件下培养表达包括seq id no:43的氨基酸序列的免疫原性融合蛋白的所述宿主细胞群体，以产生所述免疫原性融合蛋白；b)破坏所述宿主细胞的细胞膜；c)回收包括所述免疫原性融合蛋白和一种或多种杂质的样品；d)使包括所述免疫原性融合蛋白的所述样品与疏水性相互作用色谱树脂接触，并在允许所述免疫原性融合蛋白优先分离的条件下从所述疏水性相互作用色谱树脂中洗脱所述免疫原性融合蛋白，由此获得包括所述免疫原性融合蛋白的洗脱液；e)使步骤d)的包括所述免疫原性融合蛋白的所述洗脱液经受流通阴离子交换树脂，由此获得包括所述免疫原性融合蛋白的洗脱液；以及f)使步骤e)的包括所述免疫原性融合蛋白的所述洗脱液与多模式色谱树脂接触，并在允许所述免疫原性融合蛋白优先分离的条件下从所述多模式色谱树脂中洗脱所述免疫原性融合蛋白，由此获得包括所述免疫原性融合蛋白的洗脱液。在一些实施例中，所述宿主细胞是大肠杆菌细胞。8、在一些实施例中，所述方法进一步包括以下步骤：g)使步骤f)的包括所述免疫原性融合蛋白的所述洗脱液与流通阴离子交换膜接触；由此获得包括所述免疫原性融合蛋白的洗脱液。在一些实施例中，所述方法进一步包括以下步骤：h)使步骤g)的包括所述免疫原性融合蛋白的所述洗脱液与超滤膜/渗滤膜接触；以及i)在允许优先分离所述免疫原性融合蛋白的条件下，从所述超滤膜/渗滤膜中洗涤所述免疫原性融合蛋白，由此获得包括所述免疫原性融合蛋白的洗脱液。在一些实施例中，所述方法进一步包括以下步骤：j)使步骤i)的包括所述免疫原性融合蛋白的所述洗脱液与0.2μm过滤器接触。9、本公开提供了一种组合物，其包括通过本公开的方法中的任一种产生的经纯化的免疫原性融合蛋白。10、本公开提供了一种调配物，其包括：i)免疫原性融合蛋白，所述免疫原性融合蛋白包括seq id no:43的氨基酸序列；ii)表面活性剂；iii)缓冲液；以及iv)盐。在一些实施例中，所述表面活性剂的浓度为约175μg/ml至约375μg/ml。11、在一些实施例中，i)所述免疫原性融合蛋白的浓度为约0.5mg/ml至约1.5mg/ml；ii)所述表面活性剂的浓度为约175μg/ml至约375μg/ml；iii)所述缓冲液的浓度为约5mm至约20mm；iv)所述盐的浓度为约50mm至约200mm；并且其中所述调配物的ph水平介于ph6与ph9之间。12、在一些实施例中，i)所述所述免疫原性融合蛋白的浓度为约0.8mg/ml至约1.2mg/ml；ii)所述表面活性剂的浓度为约275μg/ml；iii)所述缓冲液的浓度为约10mm；iv)所述盐的浓度为约154mm；并且其中所述调配物的ph水平为约7.4。13、在一些实施例中，所述缓冲液包括磷酸钠，所述盐包括氯化钠(nacl)，和/或所述表面活性剂包括聚山梨醇酯20。14、在一些实施例中，所述调配物进一步包括佐剂。在一些实施例中，所述佐剂的浓度为约0.5mg/ml至约2mg/ml。在一些实施例中，所述佐剂的浓度为约1mg/ml。在一些实施例中，所述佐剂选自由以下组成的组：氢氧化铝、磷酸铝和硫酸铝。在一些实施例中，所述佐剂为氢氧化铝。在一些实施例中，所述氢氧化铝为15、本公开提供了一种调配物，其包括：约1.0mg/ml的免疫原性融合蛋白，所述免疫原性融合蛋白包括seq id no:43的氨基酸序列，约275μg/ml聚山梨醇酯20、约10mm磷酸钠和约154mm氯化钠，并且其中所述调配物的ph水平为约7.4。16、本公开提供了一种调配物，其包括：约20μg/ml的免疫原性融合蛋白，所述免疫原性融合蛋白包括seq id no:43的氨基酸序列，约275μg/ml聚山梨醇酯20、含约1mg/ml氢氧化铝的9mm磷酸钠和约139mm氯化钠，并且其中所述调配物的ph水平为约7.4。17、本公开提供了一种调配物，其包括：约60μg/ml的免疫原性融合蛋白，所述免疫原性融合蛋白包括seq id no:43的氨基酸序列，约275μg/ml聚山梨醇酯20、含约1mg/ml氢氧化铝的9mm磷酸钠和约139mm氯化钠，并且其中所述调配物的ph水平为约7.4。18、本公开提供了一种调配物，其包括：约120μg/ml的免疫原性融合蛋白，所述免疫原性融合蛋白包括seq id no:43的氨基酸序列，约275μg/ml聚山梨醇酯20、含约1mg/ml氢氧化铝的9mm磷酸钠和约139mm氯化钠，并且其中所述调配物的ph水平为约7.4。19、本公开提供了一种调配物，其包括：约180μg/ml的免疫原性融合蛋白，所述免疫原性融合蛋白包括seq id no:43的氨基酸序列，约275μg/ml聚山梨醇酯20、含约1mg/ml氢氧化铝的9mm磷酸钠和约139mm氯化钠，并且其中所述调配物的ph水平为约7.4。20、本公开提供了一种诱导受试者中的保护性免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用本公开的组合物中的任一种或调配物中的任一种。21、本公开提供了一种针对由肺炎链球菌引起的感染使受试者免疫的方法，所述方法包括向所述受试者施用本公开的组合物中的任一种或调配物中的任一种。22、本公开提供了一种治疗、预防性地预防有需要的受试者的由肺炎链球菌引起的病状、疾病或感染或减少其发生的方法，所述方法包括向所述受试者施用本公开的组合物中的任一种或调配物中的任一种。23、在一些实施例中，向所述受试者施用至少一剂所述免疫原性融合蛋白。在一些实施例中，向所述受试者施用不超过两剂所述免疫原性融合蛋白。在一些实施例中，所述剂量进一步包括约1mg/ml氢氧化铝。24、在一些实施例中，所述剂量包括约1μg至约150μg所述免疫原性融合蛋白。在一些实施例中，所述剂量包括约10μg所述免疫原性融合蛋白。在一些实施例中，所述剂量包括约30μg所述免疫原性融合蛋白。在一些实施例中，所述剂量包括约60μg所述免疫原性融合蛋白。在一些实施例中，所述剂量包括约90μg所述免疫原性融合蛋白。25、在一些实施例中，每个剂量之间的时间量是约4周至约一年。在一些实施例中，每个剂量之间的时间量是约一周、约两周、约三周或约四周。在一些实施例中，每个剂量之间的时间量是约四周。26、在一些实施例中，所述组合物或所述调配物通过肠胃外施用来施用。在一些实施例中，所述肠胃外施用是通过肌内注射进行的。27、在一些实施例中，所述受试者的年龄介于0岁与80岁之间。在一些实施例中，所述受试者的年龄介于0岁与2岁之间。在一些实施例中，所述受试者的年龄介于18岁与50岁之间。在一些实施例中，所述受试者的年龄介于60岁与75岁之间。