递送包含核酸的活性剂的组合物和方法与流程

背景技术：1、治疗性核酸包括例如小干扰rna(sirna)、微小rna(mirna)、反义寡核苷酸、核酶、质粒、mrna、sgrna和免疫刺激核酸。这些核酸通过多种机制发挥作用。在sirna或mirna的情况下，这些核酸可以通过称为rna干扰(rnai)的过程下调特定蛋白质的细胞内水平。将sirna或mirna引入细胞质中后，这些双链rna构建体可以进入称为risc的蛋白质复合物。sirna或mirna的有义链从risc复合物中置换出来，在risc中提供模板，该模板可以识别并结合具有与所结合的sirna或mirna互补序列的mrna。结合互补mrna后，risc复合物切割mrna并释放切割的链。rnai可以通过靶向特异性破坏编码蛋白质合成的相应mrna来下调特定蛋白质。2、rnai的治疗应用非常广泛，因为sirna和mirna构建体可以用针对靶蛋白的任何核苷酸序列合成。迄今为止，sirna构建体在体外和体内模型中均显示出特异性下调靶蛋白的能力。此外，sirna构建体目前正在临床研究中进行评估。3、尽管最近取得了进展，但本领域仍然需要适用于一般治疗用途的改进的脂质治疗性核酸组合物。这些组合物将例如高效地包封核酸，具有高的药物:脂质比率，保护包封的核酸在血清中免于降解和清除，适合全身递送，并提供包封的核酸的细胞内递送。此外，这些脂质-核酸颗粒应该具有良好的耐受性并提供足够的治疗指数，使得以有效剂量的核酸治疗患者不会对患者产生显著的毒性和/或风险。技术实现思路1、本文提供了包含包封活性剂的脂质颗粒的药物组合物。脂质颗粒可以包含一种或多种可电离脂质；一种或多种中性脂质；以及一种或多种聚乙二醇化脂质。这些组合物可以在酸性ph(例如小于6.5的ph，诸如4至6.5的ph，或5.0至6.5的ph)下缓冲。通过在酸性ph下缓冲，与在7或更高的ph下缓冲的其他相同组合物相比，所述组合物的递送效率能够提高。2、在一些实施方案中，一种或多种可电离脂质以形成脂质颗粒的总组分的20摩尔％至65摩尔％(例如30摩尔％至50摩尔％)的量存在于脂质颗粒中。在一些实施方案中，一种或多种可电离脂质可以包含含有叔胺的脂质头基。在某些实施方案中，一种或多种可电离脂质可以包含n,n-二甲基-2,3-二油氧基丙胺(dodma)、[(4-羟丁基)氮烷二基]二(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)(alc-0315)；8-{(2-羟乙基)[6-氧代-6-(十一烷氧基)己基]氨基}辛酸9-十七烷基酯(sm-102)、dlin-mc3-dma；dlin-kc2-dma；或其任何组合。3、在一些实施方案中，一种或多种中性脂质以形成脂质颗粒的总组分的35摩尔％至80摩尔％(30摩尔％至50摩尔％)的量存在于脂质颗粒中。一种或多种中性脂质可以包含任何合适的中性脂质。例如，在一些实施方案中，一种或多种中性脂质可以包含二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(popc)、卵磷脂酰胆碱(epc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、胆固醇或其任何组合。4、在一些实施方案中，一种或多种聚乙二醇化脂质以形成脂质颗粒的总组分的大于0摩尔％至5摩尔％的量存在于脂质颗粒中。一种或多种聚乙二醇化脂质可以包含例如peg-二(十四烷基)乙酰胺、peg-肉豆蔻酰甘油二酯、peg-二酰基甘油、peg二烷氧基丙基、peg-磷脂、peg-神经酰胺或其任何组合。5、脂质颗粒的平均直径可以小于1微米，诸如50nm至750nm、50nm至250nm、50nm至200nm、50nm至150nm或50nm至100nm。脂质颗粒的多分散性指数(pdi)可以小于0.4。6、包封在脂质颗粒中的活性剂可以包含任何合适的活性剂，诸如小分子治疗剂、诊断剂、肽、蛋白质、抗体或核酸。在某些实施方案中，活性剂可以包含核酸，诸如sirna、mrna或其任何组合。7、还提供了包含包封活性剂的脂质颗粒的药物组合物，该脂质颗粒包含：20摩尔％至65摩尔％的一种或多种可电离脂质；35摩尔％至80摩尔％的一种或多种中性脂质；大于0摩尔％至5摩尔％的一种或多种聚乙二醇化脂质；以及5摩尔％至50摩尔％的一种或多种融合油。与缺少一种或多种融合油的其他相同组合物相比，通过掺入一种或多种融合油，可以提高组合物的递送效率。8、任选地，这些组合物可以在酸性ph(例如，小于6.5的ph，诸如4至6.5的ph，或5.0至6.5的ph)下缓冲。通过在酸性ph下缓冲，与在7或更高的ph下缓冲的其他相同组合物相比，所述组合物的递送效率能够提高。9、一种或多种融合油可以形成脂质颗粒的总组分的10摩尔％至40摩尔％的量存在于脂质颗粒中。在一些实施方案中，融合油可以包含含有少于3个环的c12-c40烃。在一些情况下，c12-c40烃可以包含烷基或亚烷基链，诸如任选地包含至少一个顺式双键的亚烷基链。例如，融合油可以包含角鲨烯、角鲨烷、降植烷、降植烯、法呢烯、法呢烷、视黄醇、植醇、胡萝卜素、生育酚、生育三烯酚、植物甲萘醌、甲基萘醌(其中化合价允许其酯)或其组合。在某些实施方案中，融合油可以包含角鲨烯。10、在一些实施方案中，一种或多种可电离脂质以形成脂质颗粒的总组分的30摩尔％至50摩尔％的量存在于脂质颗粒中。融合油和一种或多种可电离脂质可以0.25:1至1:1的摩尔比存在于脂质颗粒中。在一些实施方案中，一种或多种可电离脂质可以包含含有叔胺的脂质头基。在某些实施方案中，一种或多种可电离脂质可以包含n,n-二甲基-2,3-二油氧基丙胺(dodma)、[(4-羟丁基)氮烷二基]二(己烷-6,1-二基)双(2-己基癸酸酯)(alc-0315)；8-{(2-羟乙基)[6-氧代-6-(十一烷氧基)己基]氨基}辛酸9-十七烷基酯(sm-102)、dlin-mc3-dma；dlin-kc2-dma；或其任何组合。11、在一些实施方案中，一种或多种中性脂质以形成脂质颗粒的总组分的35摩尔％至80摩尔％(30摩尔％至50摩尔％)的量存在于脂质颗粒中。一种或多种中性脂质可以包含任何合适的中性脂质。例如，在一些实施方案中，一种或多种中性脂质可以包含二棕榈酰磷脂酰胆碱(dppc)、二油酰磷脂酰乙醇胺(dope)、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱(popc)、卵磷脂酰胆碱(epc)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(dspc)、胆固醇或其任何组合。12、在一些实施方案中，一种或多种聚乙二醇化脂质以形成脂质颗粒的总组分的大于0摩尔％至5摩尔％的量存在于脂质颗粒中。融合油和一种或多种聚乙二醇化脂质可以5:1至20:1的摩尔比存在于脂质颗粒中。一种或多种聚乙二醇化脂质可以包含例如peg-二(十四烷基)乙酰胺、peg-肉豆蔻酰甘油二酯、peg-二酰基甘油、peg二烷氧基丙基、peg-磷脂、peg-神经酰胺或其任何组合。13、脂质颗粒的平均直径可以小于1微米，诸如50nm至750nm、50nm至250nm、50nm至200nm、50nm至150nm或50nm至100nm。脂质颗粒的多分散性指数(pdi)可以小于0.4。14、包封在脂质颗粒中的活性剂可以包含任何合适的活性剂，诸如小分子治疗剂、诊断剂、肽、蛋白质、抗体或核酸。在某些实施方案中，活性剂可以包含核酸，诸如sirna、mrna或其任何组合。15、本文所述的组合物可用于将一种或多种活性剂递送至细胞(例如体内、离体或体外)。因此，本文提供了将活性剂递送至细胞(例如体内、离体或体外)的方法，该方法包括使细胞与本文所述的组合物接触。还提供了用于将活性剂体内递送至细胞的方法，该方法包括向哺乳动物受试者(例如人)施用本文所述的组合物。在一些实施方案中，施用可以包括全身性施用(例如静脉注射或输注)。