Fab片段的雾化的制作方法

本发明涉及包含与半乳凝素-10结合的fab片段的药物组合物，其中所述组合物被配制成用于气雾剂化(aerosolization)。本发明还涉及治疗与半乳凝素-10晶体的存在或形成相关的疾病或病症的方法，以及用于所述方法中的药物组合物。所述方法包括例如通过使用雾化器将所述药物组合物作为气雾剂施用。本发明还涉及包含所述药物组合物的雾化器。背景技术：1、哮喘是传导气道的慢性炎性疾病，影响着全球3亿人。在病理学上，该疾病的特征在于气道嗜酸性粒细胞增多和增厚黏液的过度产生，这在一些患者中可导致致命的嗜酸性粒细胞性炎性应答，例如小气道的不可逆阻塞。2、在嗜酸性粒细胞性哮喘中，嗜酸性粒细胞在气道上皮细胞中非常丰富，并且可经受嗜酸性粒细胞胞外陷阱细胞死亡(eetosis)。在eetosis过程期间，嗜酸性粒细胞释放核染色质连同半乳凝素-10蛋白。在高浓度下，胞外半乳凝素-10开始结晶，形成独特且无色的晶体，称为夏科莱登晶体(charcot leyden crystal，clc)。已发现这些clc增强哮喘中的2型免疫力，并且有助于提高黏液的黏弹性和将黏液栓锚定至气道上皮细胞。在人组织和分泌物中也观察到了与嗜酸性粒细胞性炎性应答(例如髓系白血病、变应性疾病和寄生虫病以及嗜酸性粒细胞性囊性纤维化)相关的clc。3、本发明人先前已表明抗半乳凝素-10抗体能够使clc增溶(wo2019/197675)。其报道了半乳凝素-10晶体如何可在体内诱导促炎性应答，以及如何可通过施用能够破坏半乳凝素-10结晶的半乳凝素-10抗体来抑制该应答；重要的是，半乳凝素-10抗体能够溶解来自患者黏液样品的clc。综上所述，这表明了靶向半乳凝素-10结晶的药剂是如何可用于治疗其中病理状况与clc的存在相关的病症和障碍。4、clc存在于这些患者的黏液中，并因此存在于气道的腔中。因此，到达这些clc的唯一有效方法是通过局部递送至气道。气雾剂化通常用于小药物分子的递送；然而，通过吸入来施用蛋白质是罕见的。特别是对于单克隆抗体(monoclonal antibody，mab)，在气雾剂技术和药物制剂方面仍存在许多挑战。气雾剂化对mab施加物理应力很可能诱导蛋白质构象变化，潜在地降低其生物活性并使其具有免疫原性。5、雾化器是用于从蛋白质溶液产生气雾剂的最广泛使用的吸入器；然而，由于观察到较低的活性水平、部分蛋白质降解和较高的聚集水平(respaud et al.2014；mabs；6(5):1347-1355)，雾化器尚未被证明是完全成功的。这些聚集体可导致治疗活性的损失，并因此可需要优化制剂以试图降低聚集体形成。因此，存在对进一步改善通过吸入来递送蛋白质治疗的需求。技术实现思路1、已经证明开发适于通过吸入递送的抗体治疗对药物配制师具有挑战性。气雾剂化对抗体施加相当大的物理应力，通常导致聚集体的形成。这可有助于由抗药物抗体(anti-drug antibody，ada)响应引起的生物活性降低和免疫原性提高。本发明人已经确定fab片段的气雾剂化导致形成非常少的蛋白质聚集体，并且在许多情况下没有蛋白质聚集体。特别地，发现来源于全长igg的fab片段可被成功地气雾剂化，而全长igg对应物的气雾剂化导致聚集。本文中报道了与半乳凝素-10结合的气雾剂化fab片段不仅产生很少的聚集体，而且还保留了其生物活性和效力。特别地，这些气雾剂化fab片段保留了与半乳凝素-10的结合，并保留了溶解半乳凝素-10晶体(clc)的能力。因此，可在不需要添加表面活性剂的情况下，或在仅添加低浓度的表面活性剂的情况下制备包含fab片段的药物制剂。2、在第一方面中，本发明提供了包含与半乳凝素-10结合的fab片段的药物组合物，其用于治疗与半乳凝素-10晶体的存在或形成相关的疾病或病症的方法中，其中所述方法包括向有此需要的对象施用治疗有效量的药物组合物，其中所述组合物作为气雾剂施用。3、在第二相关方面中，本发明提供了治疗与半乳凝素-10晶体的存在或形成相关的疾病或病症的方法，其中所述方法包括向有此需要的对象施用治疗有效量的包含与半乳凝素-10结合的fab片段的药物组合物，其中所述组合物作为气雾剂施用。4、在某些实施方案中，与半乳凝素-10晶体的存在或形成相关的疾病或病症选自：哮喘；慢性鼻窦炎；乳糜泻；蠕虫感染；胃肠嗜酸性粒细胞性炎症；囊性纤维化(cysticfibrosis，cf)；变应性支气管肺曲霉病(allergic bronchopulmonary aspergillosis，abpa)；churg-straus血管炎；慢性嗜酸性粒细胞性肺炎；和急性髓系白血病。在某些优选实施方案中，与半乳凝素-10晶体的存在或形成相关的疾病或病症是哮喘或囊性纤维化(cf)。5、在某些实施方案中，fab片段在与可溶性半乳凝素-10结合时抑制半乳凝素-10的结晶，和/或在与结晶半乳凝素-10结合时促进结晶半乳凝素-10的溶解。在某些实施方案中，结晶半乳凝素-10是夏科-莱登晶体(clc)。6、在某些实施方案中，fab片段与人半乳凝素-10结合。在某些优选实施方案中，fab片段包含可变重链(variable heavy chain，vh)结构域和可变轻链(variable lightchain，vl)结构域，7、其中vh结构域包含：8、含有seq id no：4(glrvgvlgfdy)或由其组成的hcdr3；9、含有seq id no：3(ainagggstsyadsvkg)或由其组成的hcdr2；和10、含有seq id no：2(syams)或由其组成的hcdr1；并且11、其中vl结构域包含：12、含有seq id no：8(qvwdgsaav)或由其组成的lcdr3；13、含有seq id no：7(adeyrpe)或由其组成的lcdr2；和14、含有seq id no：6(dgnnigsksaq)或由其组成的lcdr1。15、在某些实施方案中，fab片段包含可变重链(vh)结构域和可变轻链(vl)结构域，其中：16、vh结构域包含seq id no：1的氨基酸序列或与其具有至少90％、95％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列，并且17、vl结构域包含seq id no：5的氨基酸序列或与其具有至少90％、95％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。18、在某些实施方案中，fab片段包含可变重链(vh)结构域和可变轻链(vl)，其中：19、vh结构域包含seq id no：120、(evqllesggglvqpggslrlscaasgftfssyamswvrqapgkglewvsainagggstsyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakglrvgvlgfdywgqgtlvtvss)的氨基酸序列；21、并且vl结构域包含seq id no：522、(syeltqplsvsvalgqtaritcdgnnigsksaqwyqqkpgqapvlviyadeyrpegiperfsgsnsgntatltisraqagdeadyycqvwdgsaavfgggtqltvl)的氨基酸序列。23、在某些实施方案中，fab片段是人源化的、种系化的或去免疫化的。24、在某些实施方案中，药物组合物通过吸入施用于对象。在某些实施方案中，药物组合物作为气雾剂使用雾化器、加压定量吸入器(pressurised metered-dose inhaler，pmdi)、干粉吸入器、软雾吸入器或智能吸入器施用。在某些优选实施方案中，药物组合物作为气雾剂使用雾化器施用。在某些实施方案中，药物组合物作为气雾剂使用射流雾化器、超声雾化器或网孔式雾化器施用。25、在某些实施方案中，在施用之前，药物组合物是水性液体制剂。在某些实施方案中，药物组合物包含可药用载体或赋形剂。在某些实施方案中，赋形剂是液体赋形剂，任选地是溶剂或水性溶剂。26、在某些实施方案中，组合物包含量为小于5％、小于2％、小于1％、小于0.5％、小于0.1％、小于0.05％、小于0.02％或小于0.01％的表面活性剂。在某些替代实施方案中，组合物不包含表面活性剂。27、在某些实施方案中，组合物中fab片段的浓度为约1至约20mg/ml、约1至约15mg/ml、约1至约10mg/ml、约1至约5mg/ml、约2至约10mg/ml、约3至约10mg/ml、约4至约10mg/ml或约5至约10mg/ml。在某些实施方案中，组合物中fab片段的浓度为约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15mg/ml。28、在某些实施方案中，气雾剂中颗粒的颗粒尺寸为小于30μm、小于25μm、小于10μm、小于2μm、小于1μm、小于0.5μm、小于0.4μm、小于0.3μm、小于0.2μm或小于0.1μm。在某些优选实施方案中，气雾剂中颗粒的颗粒尺寸为小于2μm。29、在某些实施方案中，气雾剂中颗粒的浓度为小于2×105、小于1×105、小于2×104或小于1×104个总颗粒/ml。30、在某些实施方案中，气雾剂中尺寸大于2μm的颗粒的浓度为小于1×105、小于5×104、小于2×104、小于1×104、小于1×103或小于1×102个颗粒>2μm/ml。31、在第三方面中，本发明提供了包含与半乳凝素-10结合的fab片段的药物组合物，其中该组合物被配制成用于气雾剂化。32、上述与本发明第一和第二方面中的药物组合物相关的实施方案同样适用于第三方面的药物组合物。33、在第四方面中，本发明提供了包含本文中所述任何药物组合物的雾化器。在某些实施方案中，提供了包含含有与半乳凝素-10结合的fab片段的药物组合物的雾化器，其中该组合物被配制成用于气雾剂化。