免疫刺激性MRNA组合物及其用途的制作方法

本发明属于免疫疗法领域。更具体地，本发明涉及编码功能性免疫刺激蛋白(诸如il-21)和共刺激分子的一种或多种核酸分子的组合物，任选地与细胞因子和/或趋化因子组合以增强宿主对体内存在的肿瘤细胞的免疫应答。本发明还涉及含核酸的组合物或药物制剂用于治疗患有肿瘤和/或癌症疾病的患者。背景技术：1、旨在激活针对肿瘤细胞的免疫应答的免疫疗法彻底改变了癌症治疗，并且为以前无法治疗的患者提供临床益处。免疫疗法的长期益处需要诱导、扩充和维持识别癌症相关抗原的记忆t细胞。检查点抑制剂(cpi)即阻断t细胞抑制性受体(诸如ctla-4和pd-1/pd-l1)的抗体的系统性递送通过重新激活/扩充预先存在的t细胞导致了持久的临床应答，但许多肿瘤已经进化出免疫抑制策略，使其具有cpi抗性，所以需要开发互补策略以产生增强的t细胞免疫力。2、诱导最佳的t细胞应答需要将抗原呈递给t细胞受体(tcr)和由共刺激配体和细胞因子或趋化因子介导的其它t细胞激活信号组合。包括病毒载体、质粒dna和信使mrna的基于核酸的方法已被用于在肿瘤微环境中局部编码这些免疫刺激蛋白，导致诱导和扩增针对肿瘤床中存在的抗原的系统性免疫应答。这些编码免疫刺激蛋白的核酸也可用于在疫苗接种情况下促使针对共递送的抗原的t细胞应答的产生。3、尽管个体免疫刺激蛋白可以引发一些程度的抗肿瘤功效，但需要同时靶向多个免疫刺激途径以增强治疗益处。然而，组合哪些因子以产生最佳的功效仍然是一个巨大的挑战，这是本发明的主题。技术实现思路1、发明人已经确立，(局部)递送包含编码至少功能性免疫刺激蛋白il-21的核酸的组合物；其诱导系统性免疫应答，引起肿瘤减少或肿瘤生长延迟。2、此外，包含编码功能性免疫刺激蛋白il-21的核酸的所述组合物与共刺激分子、细胞因子和/或趋化因子的一种或多种组合；还加强观察到的效果。3、本发明具体涉及一种组合物，所述组合物包含编码功能性免疫刺激蛋白il-21和编码共刺激分子的一种或多种分离的非病毒核酸分子。在具体实施方案中，所述组合物可以进一步包含编码细胞因子和/或趋化因子的一种或多种核酸分子。4、本发明通过递送后减少肿瘤体积等提供了此类组合物可以来诱导/增强抗肿瘤作用的概念证明，并且从而形成用于抗肿瘤免疫疗法的有前景的新方法。5、因此，本发明提供用于改善组合物的免疫刺激特性的解决方案，所述解决方案包括引入至少一种核酸，特定地是mrna或dna分子，所述核酸编码修饰肿瘤微环境的蛋白质，其特征在于在编码的功能性免疫刺激蛋白中是至少il-21，任选地与共刺激分子、细胞因子和/或趋化因子的一种或多种组合。6、在具体实施方案中，组合物包含编码il-21同等型的核酸分子，特定地是从包含il-21同等型1和il-21同等型2的列表中选择的il-21同等型，更特定地是il-21同等型1。7、在特定实施方案中，组合物还包含以下的一种或多种：靶特异性抗原和/或检查点抑制剂。8、在一些实施方案中，组合物包含选自包含4-1bbl、ox40l、icos配体和cd40l的列表的共刺激分子。9、在特定实施方案中，组合物包含选自包含il-7、il-12、il-18、ifnλ、il-15sushi、il-23、i型ifn、ii型ifn、iii型ifn的列表的细胞因子。10、在另一个实施方案中，组合物包含选自包含ccl19、ccl20、ccl21、cxcl9、cxcl10、ccl4、ccl5和xcl1的列表的趋化因子。11、在具体实施方案中，组合物包含靶特异性抗原，诸如肿瘤相关的或肿瘤特异性抗原或新抗原。12、所述靶特异性抗原可以来源于以下的任一种：从靶细胞分离的总mrna，一种或多种特异性靶mrna分子，靶细胞的蛋白质裂解物，来自靶细胞的特定蛋白，或合成的靶特异性肽或蛋白质和编码靶特异性抗原或其衍生的肽的合成的mrna或dna。13、在特定实施方案中，本发明的组合物包含检查点抑制剂，诸如检查点抑制剂多肽，其具体地选自包含以下的抑制分子的列表：pd-1，pd-l1，ctla4，tigit，tim3，lag-3和vista；优选pd-1、pd-l1或ctla4的抑制分子。14、本发明方法中使用的免疫刺激因子的优选的组合是il-21和4-1bbl。在其它优选的实施方案中，使用il-21、4-1bbl和il-7免疫刺激分子的组合。在其它优选的实施方案中，使用il-21、4-1bbl和ifnλ免疫刺激分子的组合；或使用il-21、4-1bbl和il-18的组合。在其它优选的实施方案中，使用il-21、4-1bbl和il-15的组合。在其它优选的实施方案中，使用il-21、4-1bbl和il-15sushi的组合。15、在特定实施方案中，所述mrna或dna分子是分别的核酸分子。在另一个实施方案中，mrna或dna分子是一种单一核酸分子的部分，其中所述单一核酸分子能够同时表达两种或更多种免疫刺激蛋白，例如，编码所述免疫刺激蛋白的两种或更多种mrna或dna分子可以通过内部核糖体进入位点(ires)或自切割2a肽编码序列连接在所述单一mrna或dna分子中。16、在某些实施方案中，组合物中的核酸分子选自包含rna、dna的组，优选地是rna，更优选地是mrna。17、在特定实施方案中，组合物的核酸分子包含以下的一种或多种：5'帽，聚(a)尾和/或一种或多种修饰的核苷；其中所述修饰的核苷可以是n1-甲基假尿苷。18、在具体实施方案中，组合物的核酸分子是裸核酸分子的形式或以包封在纳米颗粒(诸如脂质纳米颗粒或聚合物纳米颗粒，特别是脂质纳米颗粒)中的核酸的形式。19、本发明还提供一种包含本发明所述的组合物的脂质纳米颗粒。20、在另一个实施方案中，组合物或脂质纳米颗粒包含可电离的脂质、胆固醇、磷脂和peg化的脂质。21、在优选的实施方案中，组合物或脂质纳米颗粒包含约35mol％至65mol％的可电离的脂质；约5mol％至25mol％的磷脂；约0.5mol％至3.0mol％的peg脂质；由一定量的固醇平衡；特定地是50mol％的可电离的脂质、10mol％的磷脂、1.5mol％的peg脂质和38.5mol％的固醇。22、本发明还提供一种药物制剂，所述药物制剂包含本发明的组合物或脂质纳米颗粒和至少一种药学上可接受的运载体或赋形剂。本发明的药物制剂特定地适合作为疫苗。23、在另一方面，本发明提供本文定义的组合物、脂质纳米颗粒或药物制剂用于肠胃外施用；更特定地用于静脉内、肿瘤内、皮内、腹膜内、肌内或结节内施用，优选地肿瘤内施用。24、在特定实施方案中，提供本发明的组合物、脂质纳米颗粒或药物制剂用于人类或兽医医学中。25、在优选的实施方案中，提供本文定义的组合物、脂质纳米颗粒或药物制剂与包括放射疗法和化学疗法的标准护理癌症疗法组合使用。26、在更优选的实施方案中，提供本发明的组合物、脂质纳米颗粒或药物制剂用于预防和/或治疗细胞增殖性病症。27、在又一实施方案中，提供本文定义的组合物、脂质纳米颗粒或药物制剂以用于引发受试者中的对肿瘤和/或癌症的免疫应答。