仿生红细胞纳米颗粒在制备治疗口腔癌药物中的

本发明涉及生物化学，尤其涉及一种仿生红细胞纳米颗粒在制备治疗口腔癌药物中的应用。背景技术：1、光动力疗法(pdt)治疗口腔鳞癌具备微创、安全的特点，相较于手术和放疗，pdt因其副作用小和无并发症而更易被患者接受。早期病灶广泛的口腔鳞癌患者应用pdt治疗后，能最大程度保留口腔功能，而对晚期口腔鳞癌患者可作为安全而有效的姑息治疗手段。然而目前传统的pdt在口腔癌中的应用还受到许多限制：小分子光敏剂的非选择性富集，光源的照射深度浅，肿瘤细胞内的缺氧微环境等都限制了pdt的临床应用及疗效。2、为了克服传统pdt的局限性，近年来基于纳米材料的pdt逐渐成为研究热点，纳米结构通过增强渗透与滞留效应，实现了光敏剂在肿瘤部位的被动靶向和选择性聚集；或在纳米颗粒表面修饰结合单克隆抗体或特异性肿瘤探针分子，实现肿瘤对纳米颗粒的主动性摄取，然而在解决pdt对缺氧的限制上依旧没有很大的突破。众所周知，缺氧是实体肿瘤的一个显著和重要的特征，源于肿瘤细胞的快速增殖、高氧耗和肿瘤血管系统的异常。肿瘤缺氧区典型的氧压水平低于2.5mm hg，而为了适应代谢需求，正常组织的氧压通常高于40mmhg。研究表明，缺氧促进肿瘤血管生成、转移和对许多治疗方法的耐药性，包括化疗、放疗和pdt。因此，口腔鳞癌肿瘤微环境的缺氧特点极大地阻碍了光敏剂在氧环境下产生足量的活性氧(ros)，而pdt过程中的持续耗氧又大大降低了pdt对肿瘤细胞的持续杀伤作用，极大限制了pdt在治疗口腔鳞癌的应用。3、此外，pdt可通过不可逆的光驱动损伤直接诱导肿瘤细胞免疫原性死亡(icd)。例如，构建靶向内质网(er)的光敏剂触发强大的er应激、破坏致密的肿瘤细胞外基质以重塑肿瘤微环境、抑制肿瘤血管生成等都能诱导damps的释放，使癌细胞具有免疫原性。然而，单一的光敏剂诱导肿瘤icd的能力较弱，需要设计合理有效的光敏剂载体通过主动靶向和重塑肿瘤微环境来提高肿瘤的免疫原性，协同增强pdt的治疗效果。技术实现思路1、本发明的目的在于，提供一种仿生红细胞纳米颗粒(ce6-hb-peg-cfa@lips，chfl)在制备治疗口腔癌药物中的应用，利用改良的薄膜水化法制备表面修饰叶酸(fa)的脂质体，将光敏剂和血红蛋白(hb)负载其中，以解决光动力疗法治疗口腔癌效果低下的技术问题，光敏剂载体通过fa基团主动靶向口腔癌表面高表达的fa受体和重塑肿瘤微环境来提高口腔癌的免疫原性，协同增强光动力疗法的治疗效果。2、为了实现上述目的，本发明提供了一种仿生红细胞纳米颗粒在制备治疗口腔癌药物中的应用，所述仿生红细胞纳米颗粒包括磷脂、胆固醇、叶酸、光敏剂和血红蛋白，其各组分质量比为17～23:5～9:0.7～1.3:1～2.5:40～100，所述叶酸经二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇修饰。3、作为一个优选方案，所述磷脂、胆固醇、叶酸、光敏剂和血红蛋白质量比优选为20:7:1:2:70，优选为17:5:0.7:1:40，优选为23:8:1.2:2.3:80，优选为20:8:1.3:2.4:100。磷脂、胆固醇、叶酸、光敏剂和血红蛋白的质量优选为20mg，7mg，1mg，2mg和70mg，或者优选为17mg，5mg，0.7mg，1mg和40mg，或者优选为23mg，8mg，1.2mg，2.3mg和80mg，或者优选为20mg，8mg，1.3mg，2.4mg和100mg。4、作为一个优选方案，所述磷脂选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、神经鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、脑磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、鞘髓磷脂、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱中的一种。5、作为一个优选方案，所述光敏剂选自卟啉类衍生物、吲哚菁绿衍生物、二氢卟吩e6、酞菁、金丝桃素中的一种。6、作为一个优选方案，所述仿生红细胞纳米颗粒通过以下方法制备获得：7、(1)将上述质量比的磷脂、胆固醇、叶酸和光敏剂溶于有机溶剂氯仿和无水乙醇中，充分溶解混匀，旋蒸转速在防止爆沸的情况下，从30rpm逐步增高至120rpm，旋蒸时间为15min～60min，瓶壁内侧形成薄膜；8、(2)称取上述质量比的血红蛋白粉末，用pbs将其溶解为血红蛋白水溶液，通氧5min～25min，充分水化，待薄膜脱落后形成多层脂质体溶液；9、(3)磁力搅拌步骤(2)所得溶液，温度为30℃～45℃，转速为20rpm～40rpm，用移液枪吹打混匀后再次搅拌，使多层脂质体溶液更加均一化；10、(4)将步骤(3)所得溶液在冰浴下进行超声破碎，设置功率为1％～10％，超声时间为5min～25min，将较大的脂质体囊泡破碎为较小的脂质体囊泡；11、(5)用微型脂质体挤出器进行挤压，其中聚碳酸酯多孔膜的孔径为100nm～400nm，过滤去除游离物，得到携氧的仿生红细胞纳米颗粒。12、具体实施例中，1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱含量可以为17mg、18mg、19mg、20mg、21mg、22mg或23mg；胆固醇含量为5mg、6mg、7mg、8mg或9mg；二硬脂酞基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸含量为0.7mg、0.8mg、0.9mg、1mg、1.1mg、1.2mg或1.3mg；二氢卟吩e6含量为1mg、1.2mg、1.5mg、2mg、2.2mg或2.5mg。将上述四种药物置于茄型瓶中，加入有机溶剂氯仿(chci3)和无水乙醇(ea)，其体积比为1:1、1:2或者2:1，在避光条件下使其充分溶解混匀，旋蒸转速在防止爆沸的情况下，从30rpm逐步增高至120rpm，旋蒸时间为15min、20min、30min、40min、50min或60min，优选为40min。随后可见瓶壁内测见一均匀磷脂膜。13、称取人血红蛋白粉末40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg或100mg。用pbs将其溶解为hb水溶液，通氧5min、8min、10min、12min、15min、20min或25min后(优选为15min)移至茄型瓶中充分水化，待薄膜脱落后形成多层脂质体溶液。磁力搅拌上述得到的溶液，温度为30℃、35℃、40℃或45℃，优选为40℃；转速为20rpm、25rpm、30rpm、35rpm或40rpm，优选为30rpm，且搅拌30min后，用移液枪吹打混匀后再次搅拌30rpm，使多层脂质体溶液更加均一化。14、将上述得到的溶液在冰浴下进行超声破碎，设置功率为1％、3％、4％、5％、8％或10％；超声时间为5min、8min、10min、15min、20min或25min；超声开关的时间比设置为1s:2s、1s:3s、1s:4s、2s:3s、2s:4s、2s:5s、3s:4s、3s:5s、4s:5s或5s:5s，将较大的脂质体囊泡破碎为较小的脂质体囊泡。用avanti微注射器进行挤压，其中聚碳酸酯多孔膜的孔径为100nm、150nm、200nm、250nm、300nm或400nm；过滤次数为2次、5次、8次、10次、15次、20次或30次不等，旨在去除游离的药物，最终得到携氧的仿生红细胞纳米颗粒chfl。15、本发明的优点在于，构建改良配方的主动靶向仿生红细胞纳米颗粒(chfl)，旨在利用氧增强型pdt策略，通过fa基团的靶向效应，解决ce6的非选择性肿瘤富集，提高其稳定性和生物利用度；通过hb的自供氧，有效抑制内源性缺氧诱导因子(hif)/血管生成因子(vegf)介导的缺氧相关通路；通过诱导免疫原性细胞死亡(icd)，将“冷”肿瘤转变为具有免疫原性的“热”肿瘤，逆转肿瘤免疫耐受，并建立长期免疫记忆，控制远端肿瘤的转移和复发，协同增强pdt的抗肿瘤作用，克服传统pdt治疗对口腔癌残存及复发、转移的局限，为pdt在口腔颌面肿瘤治疗方面提供更广阔的临床应用前景。