一种治疗性细胞的递送支架及其制备方法

本发明涉及药物递送领域，具体涉及一种治疗性细胞的递送支架及其制备方法。背景技术：1、手术切除是治疗多种实体瘤最主要的方式，但局部残留的肿瘤和循环在体内的肿瘤细胞仍然会诱导肿瘤复发。因此，化疗和放疗通常用来预防局部残余肿瘤和转移瘤的复发，但是这些疗法常常伴随严重的毒副作用。2、相比化疗与放疗无差别地攻击肿瘤细胞和正常细胞而造成的严重的毒副作用，新型的免疫疗法可以训练免疫系统特异性地识别并杀死肿瘤细胞，并减少这些毒副作用。其中以嵌合抗原受体t细胞(car-t细胞)疗法为代表的过继性细胞疗法已经在血液瘤上展现出惊人的疗效。3、然而实体肿瘤内的免疫抑制微环境限制了t细胞在肿瘤部位的存活与扩增，另外静脉输注的car-t细胞在实体瘤内的浸润量不足严重限制了car-t细胞疗法对实体瘤的疗效。因此，越来越多的研究致力于开发实体瘤原位递送car-t细胞的技术，以维持car-t细胞在肿瘤微环境中的活力，促进增殖并提高浸润，如植入式或注射型凝胶、微针或支架等。由于这些材料均为人工合成或设计而成，尽管大多会加入白细胞介素2、7或15等细胞因子来维持t细胞在这些材料中的活性，但并不能完全真实地模拟天然淋巴器官对t细胞的支持作用。4、由于上述人工材料合成或设计而成的用于实体瘤原位递送的产品无法更好的支持t细胞，故市场急需一种能够提高对t细胞的支持的实体瘤原位递送产品。5、淋巴结是支持t细胞和b细胞增殖分化的场所，它的基质环境可以对t细胞起到良好支持作用，并且淋巴结内天然含有的多种细胞因子的配伍组成对t细胞也是最适宜的。临床上对肿瘤进行手术切除时会采取淋巴结清扫术，来切除可能存在癌转移的淋巴结，以减少肿瘤复发风险。而这一部分淋巴结则可以利用起来作为促进car-t细胞生存、增殖的天然支架材料，实现car-t细胞在病灶部位的局部缓释递送。技术实现思路1、为解决现有技术中人工材料合成或设计而成的用于实体瘤原位递送的产品无法更好的支持t细胞的缺陷，本发明提供了一种治疗性细胞的递送支架及其制备方法。本发明中淋巴结作为递送支架保持了良好的生物相容性，在体内可被内化，且具有保持car-t细胞活性以及使car-t细胞更好的增殖的优点；载car-t细胞的淋巴结可有效地抑制肿瘤的生长。2、本发明第一方面提供了一种递送支架的制备方法，其中，所述制备方法包括以下步骤：将淋巴结进行冷冻、干燥，即得所述递送支架。3、在一些实施方案中，所述制备方法包括以下一种或多种条件：4、所述淋巴结为人的淋巴结；5、所述淋巴结为不含转移肿瘤细胞的淋巴结；6、所述冷冻为将所述淋巴结置于-30～-80℃或液氮中，例如所述-30～-80℃可将所述淋巴结置于-80冰箱或干冰中实现；7、所述干燥为冻干。8、在一些实施方案中，所述冷冻的时间为2min～240min。9、在一些实施方案中，所述干燥的时间为4～20h。10、在一些实施方案中，所述制备方法还包括清洗所述淋巴结的步骤。11、在一些实施方案中，所述清洗在预冷的pbs溶液中进行。12、本发明第二方面提供了本发明第一方面所述的制备方法获得的递送支架。13、本发明第三方面提供了一种递送支架-细胞复合物，其包括本发明第二方面所述的递送支架，以及用于治疗的细胞。14、在一些实施方案中，所述用于治疗的细胞包括工程化的免疫细胞和干细胞。15、在一些实施方案中，所述工程化的免疫细胞选自car-t细胞、tcr-t细胞、car-nk细胞和car-m细胞，例如，所述工程化的免疫细胞为car-t细胞。16、在一些实施方案中，所述递送支架-细胞复合物通过以下方法制备：在所述递送支架中注射用于治疗的细胞。17、在一些实施方案中，所述用于治疗的细胞与所述递送支架的浓度质量比为(2×106个)/g。18、在一些实施方案中，所述用于治疗的细胞离心或沉淀后重悬于不含fbs的x-vivo培养基或pbs中，使用注射器抽取悬液，注射于所述递送支架中。19、在一些实施方案中，所述重悬置于冰上进行。20、在一些实施方案中，所述注射置于冰上进行。21、在一些实施方案中，当所述用于治疗的细胞为car-t细胞时，car分子的氨基酸序列如seq id no:2所示。22、在一些实施方案中，编码所述car分子的核苷酸序列如seq id no:1所示。23、本发明第四方面提供了本发明第三方面所述的递送支架-细胞复合物在制备抑制肿瘤的药物中的应用。24、在一些实施方案中，所述肿瘤选自胃癌、肠癌、胰腺癌、子宫颈癌、肺癌和前列腺癌。25、在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。26、本发明所用试剂和原料均市售可得。27、本发明的积极进步效果在于：28、(1)淋巴结作为递送支架保持了良好的生物相容性，且具有保持car-t细胞活性以及使car-t细胞更好的增殖的优点。29、(2)载car-t细胞的淋巴结可有效地抑制肿瘤的生长。技术特征：1.一种递送支架的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：将淋巴结进行冷冻、干燥，即得所述递送支架。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其包括以下一种或多种条件：3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述冷冻的时间为2min～240min；和/或，所述干燥的时间为4～20h。4.如权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，还包括清洗所述淋巴结的步骤；5.如权利要求1～4任一项所述的制备方法获得的递送支架。6.一种递送支架-细胞复合物，其特征在于，其包括如权利要求5所述的递送支架，以及用于治疗的细胞。7.如权利要求6所述的递送支架-细胞复合物，其特征在于，所述用于治疗的细胞包括工程化的免疫细胞和干细胞；8.如权利要求7所述的递送支架-细胞复合物，其特征在于，所述递送支架-细胞复合物通过以下方法制备：在所述递送支架中注射用于治疗的细胞；9.如权利要求7所述的递送支架-细胞复合物，其特征在于，当所述用于治疗的细胞为car-t细胞时，car分子的氨基酸序列如seq id no:2所示；10.如权利要求6～9任一项所述的递送支架-细胞复合物在制备抑制肿瘤的药物中的应用；技术总结本发明公开了一种治疗性细胞的递送支架及其制备方法。所述制备方法包括以下步骤：将淋巴结进行冷冻、干燥，即得所述递送支架。本发明中淋巴结作为递送支架保持了良好的生物相容性，且具有保持CAR‑T细胞活性以及使CAR‑T细胞更好的增殖的优点；载CAR‑T细胞的淋巴结可有效地抑制肿瘤的生长。技术研发人员：顾臻,李洪军,史佳齐,吴伟受保护的技术使用者：浙江大学技术研发日：技术公布日：2024/8/16