包含用于治疗肌肉消耗障碍的治疗性核酸和靶向

本发明涉及治疗和预防肌肉消耗障碍，特别是涉及可以通过将治疗性核酸递送到肌肉细胞中来靶向的遗传因子的肌肉消耗障碍的领域。根据后一方面，本文披露了明显增强治疗性核酸向肌肉细胞的正确内部隔室诸如胞质溶胶和/或细胞核的有效递送和释放的药物组合物及其有利组分，在该隔室中该治疗性核酸可以到达并作用于其遗传靶标。如本文披露，这种明显增强的递送和释放是通过将通过与肌肉细胞上存在的内吞受体的配体共价缀合而特异性靶向到肌肉细胞的内体逃逸增强皂苷提供到包含治疗性核酸的药物组合物中来实现的。正如首次在本文中证明的那样，令人意外的是，这些皂苷类型在完全分化的肌肉细胞中保留了其内体逃逸增强特性。背景技术：1、肌肉消耗障碍是全世界人类疾病的主要病因。它们可能是由潜在的遗传条件引起的，诸如在各种类型的肌营养不良或先天性肌病中[cardamone,2008]，或者可能与老化有关，如与年龄相关的肌肉质量损失(被称为肌少症)，或由创伤性肌肉损伤等引起。2、遗传性和非遗传性肌肉消耗障碍两者主要表现为横纹肌组织的衰弱或丧失，横纹肌组织是主要负责全身氧气供应、代谢平衡和运动的组织。横纹肌组织由两种类型的横纹肌细胞构建，即骨骼肌细胞和心肌细胞[shadrin,2016]。骨骼肌占人体总质量的30％至40％，并且由于存在被称为卫星细胞(sc)的驻留肌肉干细胞，骨骼肌可以响应于运动或日常活动中发生的小肌肉撕裂而再生，卫星细胞在受伤时激活、增殖并融合以修复受损的肌肉纤维或形成新的肌肉纤维[dumont,2016]。相比之下，心肌不具有心肌样干细胞池，具有很少或没有再生能力，损伤会导致纤维疤痕形成并最终导致泵功能受损[uygur,2016]。3、这两种细胞类型都是终末分化的并在结构和功能上都高度专业化，并且这些特征通常与将有效载荷靶向到此类细胞的内部隔室中的难度增加有关。特别地，肌肉细胞被一种独特类型的细胞膜覆盖，该细胞膜被称为肌膜，就像神经元一样，是易兴奋的。此外，这些细胞是特别有弹性的，其特征在于收缩性、延展性和弹性，这是实现其在肌肉组织中的主要功能所需的关键特征，该主要功能是产生张力，从而产生收缩肌肉细胞的力，以便产生不同身体部位的自愿或不自愿运动。4、与此一致，尽管人们普遍认识到某些治疗性有效载荷在递送到肌肉细胞中时可以产生有益的作用，但还众所周知，靶向这些细胞已被证明是出了名地具有挑战性，如例如在wo 2021142227中认可的。对于心肌细胞而言尤其如此，其中药物的任何中靶和脱靶活性都会导致严重的安全性问题[slordalm 2006]。已知，即使是专门针对肌肉的治疗剂全身性递送到心脏中也只具有非常有限的功效，并且甚至直接肌肉内注射到心脏中也显示出受限的心脏暴露[ebner,2015]。5、除以上限制之外，对于患有后天性晚期或遗传性肌肉消耗障碍的个体，几乎没有可用的治疗选择和策略。实际上，对他们中的大多数人而言，没有可用的药物，姑息性治疗往往是减轻患病个体痛苦的唯一适用解决方案。6、特别地，到目前为止，已经描述了令人难以置信的一系列肌肉细胞相关遗传障碍(有时统称为遗传性肌病)，并且尽管由于发病率相对较低，其中大多数被归类为“罕见病”，但不同形式的总和使这些障碍成为一个相对常见的健康问题，影响着全球数百万患者的生活质量，产生衰弱性并发症，经常导致死亡[gonzález-jamett,2017]。7、肌肉细胞相关遗传障碍的一种常见分类是基于源自肌肉细胞的突变蛋白产物的位置。也就是说，先天性肌病被认为是由肌肉细胞内收缩器的遗传缺陷导致的，并通过肌肉活检上独特的静态组织化学或超微结构变化来定义。相比之下，肌营养不良被描述为肌肉膜或其支持性蛋白的疾病，并且其特征通常在于持续的肌肉退化和再生的病理学证据[cardamone,2008]。8、简而言之，该收缩器包括由肌动蛋白和肌球蛋白组成的肌原纤维，这些肌原纤维形成彼此滑过、从而产生改变肌肉细胞形状的张力的肌丝。收缩器的功能在很大程度上依赖于其与强化的肌肉细胞骨架以及肌膜内和肌膜周围高度专业化的结构的相互作用，与人体中的大多数细胞膜不同，肌膜被一种称为糖萼的多糖材料高度包衣，该多糖材料与肌肉细胞周围的基底膜接触。这种基底膜含有许多胶原原纤维和专门的细胞外基质蛋白，诸如层粘连蛋白。基质蛋白提供了肌肉纤维可以粘附的支架。通过肌膜中的跨膜蛋白，肌肉细胞内的肌动蛋白骨架与基底膜和细胞外部连接。此类锚定的大量肌肉细胞构成肌肉组织，并且通过同步和受控的张力产生，它们可以生成显著的力。9、肌肉细胞的这种结构和功能复杂性，包括其细胞内收缩器、强化和解释肌膜的特定功能和架构的蛋白质网络及其外部的多组分支架，是大型肌肉细胞特异性蛋白质组的产物。此蛋白质组的很大一部分是通过由纯肌肉细胞特异性转录物翻译而来的大结构蛋白产生的，这些转录物来源于经常经历广泛选择性剪接事件的往往非常大的多外显子基因[savarese,2020]。实际上，分布在人类基因组中一些最大基因上的各种突变，特别是包括dmd、ttn、neb、ryr1，被认为是最具特征的肌肉细胞相关遗传障碍的潜在原因。10、也许，也可以说，研究最多的遗传性肌肉细胞相关障碍是迪谢内肌营养不良(dmd)，它是由编码肌营养不良蛋白的dmd基因突变引起的，该突变阻止了抗肌萎缩蛋白(dp427m)的肌肉同种型的产生。dmd是一种特别严重的疾病，其特征在于骨骼肌逐渐萎缩，并被纤维、骨或脂肪组织替代，最终通常由于心肌或呼吸衰竭而导致死亡。dmd是隐性和x染色体连锁(x连锁)。因此，大多数患者是男性。平均而言，他们在2–3岁左右出现最早症状，在10–12岁左右依赖轮椅，并且即使在最佳护理下，也会在20岁与40岁之间死亡。不同的范围可以通过以下事实解释，即dmd不是由dmd基因中精确定义的位点特异性或单个热点突变引起的。相反，dmd与许多其他由大型多外显子基因的不同突变引起的肌肉细胞相关遗传障碍一样，可以被视为一系列障碍，其表型的严重程度取决于转录物的阅读框受到影响的程度。dmd病例通常含有移码或无义突变，导致过早截短，从而产生非功能性和不稳定的抗肌萎缩蛋白。与此相反，一种被称为贝克肌营养不良(bmd)的较轻的抗肌萎缩蛋白病是由dmd基因的框内突变(即，维持阅读框并导致产生仅内部截短的抗肌萎缩蛋白突变体蛋白的突变)引起的。11、基于大多数框外突变会导致严重dmd，而绝大多数框内突变会导致较轻bmd的观察结果，已经测试并开发了不同的基于反义寡核苷酸(aso)的dmd治疗剂，目的是恢复抗肌萎缩蛋白转录物的阅读框，从而产生至少部分功能性的蛋白质。这些aso较短(20–30个核苷酸)，经常是经化学修饰的核酸或核酸类似物，在pre-mrna剪接过程中与靶外显子特异性结合，导致缺陷外显子的所谓跳跃，即阻止其包含在mrna中。外显子跳跃aso方法是突变特异性的，因为根据突变位置需要跳过不同的外显子。然而，某些外显子的跳跃适用于较大的患者组，包括51号外显子(14％)、45号外显子(8％)、53号外隐子(8％)和44号外显子(6％)的跳跃[bladen,2013]。到目前为止，四种不同的吗啉代型aso被设计为跳过51号外显子(依特立生(eteplirsen))、53号外显子(戈洛迪森(golodirsen)和维托拉生(viltolarsen))或45号外显子(卡西默森(casimersen))，它们已经在小患者队列中显示出诱导抗肌萎缩蛋白恢复的一些证据，尽管表现出某些全身性副作用，但还是获得了fda的批准。在安慰剂对照试验中评价了另一种具有2’-o-甲基硫代磷酸酯修饰的51号外显子跳跃aso(曲萨珀森(drisapersen))，但最终例如由于发生注射部位反应、蛋白尿以及一部分患者的血小板减少症而未获得fda的批准[goemans,2018]。用于诱导外显子跳跃的替代性组合物可以在wo2018129384中找到。12、dmd的其他基于核酸的方法包括尝试以高载体剂量递送微小抗肌萎缩蛋白cdna，其临床试验正在进行中，一些已经报告了微小抗肌萎缩蛋白成功表达，但也在一部分患者中观察到严重的不良作用，包括可能由于先天免疫应答引起的短暂性肾衰竭[mendell,2020]。可替代地，目前也在努力递送编码可以改善肌肉质量，诸如卵泡抑素[mendell,2020]或靶向疾病机制，诸如serca2a[wasala,2020]的蛋白质的基因的cdna。进一步的考虑涉及单独使用微小rna、mirna模拟产物、antimir、antagomir和该系列，或与其他基于核酸的疗法共施用，以刺激唤醒的肌肉细胞的生长和/或再生[aránega,2021]。例如，wo2018080658披露了mir-128-1作为用于治疗dmd的基于lna的aso治疗剂。提出了又另一种替代性方法，该方法基于crispr/cas9技术和被设计用于例如通过外显子缺失或废除剪接位点来恢复阅读框的向导rna，其概念验证已在dmd细胞系和动物模型中进行了尝试[chemello,2020；nelson 2017]。然而，所有的基因组编辑工作仍处于临床前阶段，必须克服多重挑战才能在人类中系统性应用，包括基因组编辑组分的最佳递送。13、在dmd或bmd患者中发现了数千种不同的dmd突变[blanden,2015]。类似的情况也存在于许多其他遗传性肌肉细胞相关障碍中，在其中鉴定到基因突变靶标。这些包括但不限于其他肌营养不良，包括面肩肱型肌营养不良(受影响基因：dux4/双同源盒4)、强直性肌营养不良(dmpk)、埃默里–德赖弗斯肌营养不良(受影响基因：emd/伊默菌素和lmna/核纤层蛋白a/c)、肢带型肌营养不良1(受影响基因：myot/肌收缩蛋白、lmna/核纤层蛋白a/c等)、先天性肌营养不良(受影响基因：lama2/分区蛋白或层粘连蛋白-α2链/编码胶原6a的任何col6a基因)；或扩张型家族性心肌病(受影响基因：lmna/核纤层蛋白a/c)，以及先天性肌病，尤其包括杆状体肌病(受影响基因：neb/伴肌动蛋白、acta/骨骼肌α-肌动蛋白、tpm3/α-原肌球蛋白-3、tpm2/β-原肌球蛋白-2、tnnt1/肌钙蛋白t1、lmod3/平滑肌蛋白-3、mypn/肌钯蛋白等)或先天性纤维型比例失调肌病(受影响基因：tpm3/α-原肌球蛋白-3、cta/骨骼肌α-肌动蛋白、ryr1/兰尼碱受体通道)、以及任何涉及例如ttn基因(肌连蛋白)中的突变的综合征。因此，由于许多不同肌肉消耗障碍背后的甚至已限定的遗传靶标的突变可变性，使用治疗性核酸，诸如aso或antagomir[cerro-herreros,2020]，似乎是开发治疗各种肌肉消耗障碍的新疗法的一种合乎逻辑和实用的方法。14、然而，如以上所解释，尽管具有相当大的优点，但即使当与各种递送系统结合时，也难以有效地将这种基于核酸的治疗剂引入肌肉细胞内的适当隔室中，例如引入用于反义疗法的肌肉细胞胞质溶胶中，或从中引入用于直接基因编辑的细胞核中。肌肉细胞转染和体内的这种低效率自然导致基于核酸的治疗剂在其靶位点的浓度太低，无法实现有效和持续的结局。这进而导致需要增加施用剂量，从而导致脱靶作用。最常见的此类副作用包括补体级联的激活、凝血级联的抑制和toll样受体介导的免疫系统刺激。这些作用自然是非常不希望的，并有可能诱导威胁患者健康或甚至生命的副作用，包括器官衰竭。此类和类似不良事件的发生导致许多基于核酸的治疗剂(如dmd外显子跳跃aso曲萨珀森)在临床试验中失败。15、因此，强烈希望提供用于治疗肌肉细胞消耗障碍的新型基于核酸的药物配制品，该药物配制品特别地将显示出有效的核酸在体内递送到肌肉细胞中的速率。因此，需要配制品，其中治疗性核酸的作用(1)对涉及或导致肌肉细胞消耗障碍的遗传靶标高度特异，(2)足够安全，(3)有效，(4)特异性地针对肌肉细胞，对其他细胞具有很少或没有脱靶活性，(5)具有足够及时的作用模式(例如，所施用的药物应当在一定的时间范围内到达人患者中的靶向位点，并且应当在靶向位点保持一定的时间范围)，和/或(6)在患者体内具有足够长的持续治疗活性，等等。16、对进入横纹肌细胞中的不同药物递送方法的全面综述可以在以下中找到：dcebner等人,2015,curr pharm des[当代药物设计],21(10):1327-36.doi:10.2174/1381612820666140929095755，该文献提及肌肉靶向肽、微泡、纳米颗粒、基于病毒、转运蛋白和抗体的靶向技术，并且强调了细胞摄取大体上仍然是肌肉细胞中的一个主要问题的事实。关于基于转运蛋白和抗体的靶向技术，通过肌肉细胞表面上的内吞(或内化)受体的配体介导靶向来递送核酸例如在wo 2018129384或wo 2020028857中示出。17、然而，根据本发明人的知识和经验，没有一种已知的肌肉特异性递送方法实现以上概述的有益特征(1)-(6)的全部或至少相当一部分。因此，尽管进行了长期深入的研究并在该领域的几个方面分别取得了进展，但仍然迫切需要提高将基于核酸的治疗剂递送到患有肌肉消耗障碍的患者的肌肉细胞中的效率。技术实现思路1、为了满足这一需求，本发明人已经开发并特此描述了新型药物组合物，这些药物组合物包含治疗性核酸与肌肉细胞靶向的12,13-脱氢齐墩果烷型三萜皂苷的组合。这些特定皂苷类型在例如wo 2020126620中被表征和报告为在几种癌症细胞类型中对各种抗体-药物缀合物(adc)具有内体逃逸增强活性。2、在肿瘤细胞的上下文中，这些皂苷进一步披露于wo 2020126627、wo 2020126064、wo 2020126604、wo 2020126600和wo 2020126609中，这些文献描述了用针对肿瘤细胞标志物的单克隆抗体的第一缀合物和皂苷以及针对肿瘤细胞标志物的单克隆抗体的第二缀合物和用于使hsp27沉默的bna的组合来使肿瘤模型中的hsp27基因沉默。3、然而，终末分化的肌肉细胞，特别是心肌细胞，在代谢以及细胞膜架构和内吞活性方面与遗传上不稳定且不断分裂的肿瘤细胞有很大不同。此外，由于细胞信号传导途径的扰动和混乱的增殖活性，已知肿瘤是由可渗透和渗漏的血管形成提供的[hanahan和weinberg,2011]，这与提供肌肉组织的健康且富含紧密连接的血管非常不同。4、尽管存在这些差异，但在将肌肉内吞受体配体缀合的12,13-脱氢齐墩果烷型三萜皂苷与外显子跳跃治疗性aso组合时，本发明人观察到对人和鼠dmd转录物的外显子跳跃效率的令人意外且稳健的影响。不希望受任何理论的约束，本发明人假设这些发现指示，所述特定组的内体逃逸增强皂苷不仅能够刺激治疗性核酸从肌肉细胞的内体有效地退出到适当的肌肉细胞内部隔室中(在对于治疗剂非常希望但尚未被完全理解的现象中，被称为内体逃逸)，而且令人意外地，当与aso一起配制并且被肌肉细胞内吞受体特异性配体靶向时，它们甚至在非常低的aso剂量下也成功地增强了外显子跳跃事件。一些初步数据甚至表明，当静脉内施用时，此类肌肉细胞靶向皂苷甚至可以在体内进行从血液到肌肉细胞外部环境的内皮细胞胞吞转运，意外地没有经由内体逃逸而导致含有有效载荷的货物进入内皮细胞的内部隔室中的任何明显损失。5、据本发明人所知，将皂苷与核酸组合用于治疗肌肉细胞消耗障碍的唯一实例是由wang等人尝试[wang,2018,molecular therapy:nucleic acids[分子疗法：核酸]；wang,2018-drug design,development and therapy[药物设计、开发和疗法]]。然而，在这些报告中，作者集中研究了非共价结合和非靶向核酸复合物与主要甾体皂苷(诸如已知的体外转染剂毛地黄皂苷)的膜穿透转染活性。然而，wang等人研究的皂苷中没有一种是12,13-脱氢齐墩果烷型的内体逃逸增强皂苷，也没有一种复合物是经由内吞受体配体特异性靶向肌肉细胞的。因此，由wang等人用于在其dmd模型系统中诱导外显子跳跃活性的皂苷和核酸浓度均大大超过了如在本文下文中呈现的新型组合物中对应组分的浓度。6、总之，为了解决现有技术的缺点，本文呈现了用于在治疗或预防肌肉消耗障碍，特别是肌肉细胞相关遗传性障碍中使用的新型药物组合物，以及具有12,13-脱氢齐墩果烷型内体逃逸增强皂苷的新型肌肉特异性内吞受体靶向缀合物，该缀合物用于将治疗性核酸递送到肌肉细胞中，本发明人观察到该缀合物具有在体外将治疗性核酸有效地递送到横纹肌细胞中的独特能力，这可能是通过促进特定在靶肌肉细胞中的内体逃逸来进行的。本文呈现的发现为患有肌肉消耗障碍的患者开发了新型低治疗有效载荷且因此更安全的治疗方法。7、这些优点和其他优点将在下文中进一步呈现。本文呈现的创新概念将关于特别实施例进行描述，这些实施例应被视为描述性的并且不限于权利要求中所描述的内容。除非另外说明，否则如本文所述的这些实施例可以组合和协同操作。8、本披露的实施例的若干目标中的一个是为在向患有肌肉消耗障碍并且需要基于核酸的治疗剂的人类患者施用此类治疗剂时遇到的非特异性问题提供解决方案。9、这些实施例的若干目标中的另一个是为特别地在诱导副作用的过量剂量下向有需要的人类患者施用时当前基于核酸的药物的安全性特征不足的问题提供解决方案。10、本发明的实施例的若干目标中的又一个是为在向有需要的人类患者施用时当前基于核酸的疗法没有达到希望的有效性的问题提供解决方案，没有达到希望的有效性是由于在向有需要的人类患者施用时不足以到达和/或进入患病的肌肉细胞中，同时对非患病细胞具有很少或没有脱靶活性。11、以上目标中的至少一个通过提供用于在治疗或预防肌肉消耗障碍中使用的药物组合物来实现，该肌肉消耗障碍特别地是肌肉细胞相关遗传性障碍，诸如先天性肌病或肌营养不良，尤其包括迪谢内肌营养不良，该组合物包含12、治疗性核酸，有利地是寡核苷酸，诸如对肌肉细胞特异性转录物中的突变具有特异性的反义寡核苷酸，和13、共价连接的第一缀合物，该第一缀合物包含皂苷和在肌肉细胞上的内吞受体的第一配体，14、其中该皂苷是内体逃逸增强12,13-脱氢齐墩果烷型三萜皂苷。15、在另一方面，以上目标中的至少一个通过提供用于治疗或预防肌肉细胞相关遗传性障碍的治疗性组合来实现，该治疗性组合包含16、(a)对肌肉细胞特异性转录物中的突变具有特异性的反义寡核苷酸；17、(b)第三缀合物，该第三缀合物包含与肌肉细胞上的内吞受体的第四配体共价连接的皂苷，该皂苷是12,13-脱氢齐墩果烷型三萜皂苷。18、在另一方面，提供了用于本文披露的治疗性或预防性用途的组合物和/或治疗性组合和/或根据本披露的皂苷的肌肉靶向共价缀合物的另外的实施例，这些实施例进一步解决了上述目标中的一个或多个。19、在特别有利的方面中，提供了本披露的不同实施例，这些实施例包括具有以下的有利肌肉靶向缀合物：各种内体逃逸增强皂苷；用于靶向肌肉细胞上的内吞受体的有利配体或其组合；例如被配置来诱导肌肉细胞消耗障碍相关基因转录物的缺陷外显子的跳跃的不同治疗性核酸，诸如反义寡核苷酸；以及用于至少将皂苷与配体连接在一起的有利共价接头，这些共价接头还可能被配置用于在人类内体中存在的条件下可切割。20、本披露的这些和其他方面在下文中详细呈现。21、定义22、术语“皂苷”具有其常规的既定含义并且在本文中是指一组两亲性糖苷，这些两亲性糖苷包含一个或多个与亲脂性苷元核心(其被称为皂苷元)组合的亲水性糖链。皂苷可以是天然存在的或合成的(即非天然存在的)。术语“皂苷”包括天然存在的皂苷、天然存在的皂苷的功能性衍生物以及通过化学和/或生物技术合成途径从头合成的皂苷。根据本发明的缀合物的皂苷具有三萜骨架，它是五环c30萜骨架，也被称为皂苷元或苷元。在本发明的缀合物中，皂苷不被认为是效应分子，也不被认为是根据本发明的缀合物中的效应子部分。因此，在包含皂苷和效应子部分的缀合物中，效应子部分是与缀合的皂苷不同的分子。在本发明的缀合物的上下文中，术语皂苷是指当存在于哺乳动物细胞(诸如人细胞)的内体和/或溶酶体中时，对由本发明的缀合物所包含的并且与皂苷一起存在于所述内体/溶酶体中的效应子部分施加内体/溶酶体逃逸增强活性的那些皂苷。23、如本文所用，术语“皂苷衍生物”(也称为“经修饰的皂苷”)应理解为是指通过一种或多种化学修饰(诸如官能团的氧化、官能团的还原和/或与另一分子形成共价键(也称为“缀合”或“共价缀合”)衍生的对应于天然存在的皂苷的化合物(优选为当一起存在于哺乳动物细胞的内体或溶酶体中时，对治疗性分子诸如核酸的内体/溶酶体逃逸增强活性)。优选的修饰包括苷元核心的醛基团的衍生化；糖链的羧基基团的衍生化或糖链的乙酰氧基基团的衍生化。典型地，皂苷衍生物不具有天然对应物，即皂苷衍生物不是由例如植物或树木天然产生的。术语“皂苷衍生物”包括通过天然存在的皂苷的衍生化获得的衍生物，以及通过化学和/或生物技术合成途径从头合成的衍生物，该合成产生与天然存在的皂苷对应的已通过一种或多种化学修饰衍生化的化合物。本发明上下文中的皂苷衍生物应理解为皂苷功能性衍生物。皂苷衍生物上下文中的“功能性”被理解为皂苷或皂苷衍生物增强与皂苷或皂苷衍生物一起接触细胞的效应分子的内体逃逸的能力或活性。24、术语“苷元核心结构”应理解为是指皂苷的苷元核心，其不具有与其结合的碳水化合物触角或糖链(聚糖)。例如，皂皮酸是so1861、qs-7和qs21的苷元核心结构。典型地，皂苷的聚糖是单糖或寡糖，诸如直链或支链聚糖。25、术语“糖链”具有其常规的科学含义并且是指聚糖、碳水化合物触角、单个糖部分(单糖)或包含多个糖部分(寡糖、多糖)的链中的任何。糖链可以仅由糖部分组成，或者还可以包含另外的部分，诸如以下中的任一种：4e-甲氧基肉桂酸、4z-甲氧基肉桂酸、和5-o-[5-o-ara/api-3,5-二羟基-6-甲基-辛酰基]-3,5-二羟基-6-甲基-辛酸，例如像存在于qs-21中。26、糖链名称上下文中的术语“api/xyl-”或“api-或xyl-”具有其常规的科学含义并且此处是指包含芹菜糖(api)部分或包含木糖(xyl)部分的糖链。27、如本文所用，术语“核酸”和“多核苷酸”彼此同义，并且应被解释为涵盖任何由单元构成的聚合物分子，其中单元包括核碱基(或简称“碱基”，例如为经典核碱基如腺嘌呤(a)、胞嘧啶(c)、鸟嘌呤(g)、胸腺嘧啶(t)或尿嘧啶(u)，或任何已知的非经典、经修饰或合成的核碱基如5-甲基胞嘧啶、5-羟甲基胞嘧啶、黄嘌呤、次黄嘌呤、7-甲基鸟嘌呤；5,6-二氢尿嘧啶等)或其功能等效物，其使得所述聚合物分子能够在适当的杂交条件下与天然存在的核酸诸如脱氧核糖核酸(dna)或核糖核酸(rna)进行基于氢键的核碱基配对(诸如watson–crick碱基配对)，这些天然存在的核酸应理解为由核苷酸单元构成的聚合物分子。28、因此，从化学角度来看，本定义下的术语核酸可以被解释为涵盖化学上为dna或rna的聚合物分子，以及作为核酸类似物的聚合物分子(也称为异种核酸(xna)或人工核酸)，其是聚合物分子，其中一个或多个(或所有)单元是经修饰的核苷酸或是核苷酸的功能等效物。核酸类似物在本领域中是众所周知的，并且由于各种特性，诸如改善的特异性和/或亲和力、对其靶标的更高结合强度和/或增加的体内稳定性，它们被广泛用于研究和医学。核酸类似物的典型实例包括但不限于锁核酸(lna)(也称为桥接核酸(bna))、磷酰二胺吗啉代寡聚物(pmo，也称为吗啉代)、肽核酸(pna)、乙二醇核酸(gna)、苏糖核酸(tna)、己糖醇核酸(hna)、2’-脱氧-2’-氟阿拉伯糖核酸(fana或fna)、2’-脱氧-2’-氟核糖核酸(2’-frna或frna)；阿卓糖醇核酸(ana)、环己烯核酸(cena)等。29、根据标准，核酸的长度在本文中表示为构建核酸单链的单元数。因为每个单元正好对应于一个能够参与一个碱基配对事件的核碱基，所以无论所讨论的核酸是单链(ss)核酸还是双链(ds)核酸，长度都经常以所谓的“碱基对”或“bp”表示。在天然存在的核酸中，1bp对应于1个核苷酸，缩写为1nt。例如，由1000个核苷酸构成的单链核酸(或由两条互补链构成的双链核酸，每条互补链由1000个核苷酸构成)被描述为具有1000个碱基对或1000bp的长度，该长度也可以表示为1000nt或缩写为1kb的1千碱基。2千碱基或2kb等于2000个碱基对的长度，其等于单链rna或dna的2000个核苷酸。然而，为了避免混淆，鉴于如本文所定义的核酸可以包含不仅在化学上为核苷酸而且是其功能等效物的单元或由其组成，核酸的长度在本文中优选地以“bp”或“kb”表示，而不是以本领域中同样常见的指称“nt”表示。30、在如本文披露的有利实施例中，核酸不长于1kb，优选地不长于500bp，最优选地不长于250bp。31、在特别有利的实施例中，核酸是寡核苷酸(或简称为寡聚物)，其被定义为不长于150bp的核酸，即根据以上提供的定义，是由不多于150个单元构成的任何聚合物分子，其中每个单元包括核碱基或其功能等效物，这使得所述寡核苷酸能够在适当的杂交条件下与dna或rna进行基于氢键的核碱基配对。在所述定义的范围内，将立即认识到，本文披露的寡核苷酸可以包含不仅是核苷酸而且是其合成等效物的单元或由其组成。换言之，从化学角度来看，如本文所用，术语寡核苷酸将被解释为可能包含以下或由以下组成：rna、dna或核酸类似物，诸如但不限于lna(bna)、pmo(吗啉代)、pna、gna、tna、hna、fana、frna、ana、cena等。32、如本文所用，术语“肌肉细胞上的内吞受体”应理解为是指表面分子、可能的受体或转运蛋白，其可从肌肉细胞肌膜的外侧或表面到达其特异性配体，并且能够经由内吞途径，例如在外部刺激(诸如配体与受体结合)下进行内化。在一些实施例中，肌肉细胞上的内吞受体通过网格蛋白介导的内吞作用而内化，但也可以通过网格蛋白非依赖性途径内化，例如像吞噬作用、大型胞饮作用、小窝和筏介导的摄取或组成性网格蛋白非依赖性内吞作用。在一些实施例中，肌肉细胞上的内吞受体包括细胞内结构域、跨膜结构域和/或(例如，和)细胞外结构域，其可以任选地进一步包括配体结合结构域。在一些实施例中，肌肉细胞上的内吞受体在配体结合之后被肌肉细胞内化。在一些实施例中，配体可以是肌肉靶向剂或肌肉靶向抗体。在一些实施例中，内化的细胞表面受体是转铁蛋白受体(cd71)，或者例如属于四次跨膜蛋白家族的cd63(也称为lamp-3)。33、术语“抗体-寡核苷酸缀合物”或“aoc”具有其常规的科学含义并且此处是指抗体(诸如igg、fab、scfv、免疫球蛋白、免疫球蛋白片段、一个或多个vh结构域、单结构域抗体、vhh、骆驼vh等)和当与受试者诸如人患者的细胞接触时可以发挥治疗作用的任何多核苷酸(寡核苷酸)分子(诸如选自天然或合成的核酸串的寡核苷酸，包括dna、经修饰的dna、rna、mrna、经修饰的rna、合成的核酸，呈现为单链分子或双链分子，诸如bna、反义寡核苷酸(aso，aon)、短或小干扰rna(sirna；沉默rna)、反义dna、反义rna等)的任何缀合物。34、如本文所用，术语“抗体或其结合片段”是指包含至少一个免疫球蛋白可变结构域或至少一个抗原决定簇，例如与抗原特异性结合的互补位的多肽。在一些实施例中，抗体是全长抗体。在一些实施例中，抗体是嵌合抗体。在一些实施例中，抗体是人源化抗体。然而，在一些实施例中，抗体是fab片段、f(ab’)片段、f(ab')2片段、fv片段或scfv片段。在一些实施例中，抗体是衍生自骆驼抗体的纳米抗体或衍生自鲨鱼抗体的纳米抗体。在一些实施例中，抗体是双特异抗体。在一些实施例中，抗体包含具有人类种系序列的框架。在另一个实施例中，抗体包含重链恒定结构域，其选自下组，该组由以下组成：igg、iggl、igg2、igg2a、igg2b、igg2c、igg3、igg4、igal、iga2、igd、igm和ige恒定结构域。在一些实施例中，抗体包含重(h)链可变区(在本文中缩写为vh)和/或(例如，和)轻(l)链可变区域(在本文中缩写为vl)。在一些实施例中，抗体包含恒定结构域，例如fc区。免疫球蛋白恒定结构域是指重链或轻链恒定结构域。人igg重链和轻链恒定结构域氨基酸序列及其功能性变异是已知的。关于重链，在一些实施例中，本文所述的抗体的重链可以是α(a)、δ(d)、ε(e)、γ(g)或μ(m)重链。在一些实施例中，本文所述的抗体的重链可以包括人α(a)、δ(d)、ε(e)、γ(g)或μ(m)重链。在一个特别实施例中，本文所述的抗体包含人γ1chi、ch2和/或(例如，和)ch3结构域。在一些实施例中，vh结构域的氨基酸序列包括人γ(g)重链恒定区的氨基酸序列，诸如本领域已知的任何氨基酸序列。本领域已经描述了人恒定区序列的非限制性实例，例如参见美国专利号5,693,780和kabat e a等人,(1991)同上。在一些实施例中，vh结构域包含与本文提供的任何可变链恒定区具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或至少99％同一性的氨基酸序列。在一些实施例中，抗体是经修饰的，例如经由糖基化、磷酸化、类泛素化和/或(例如，和)甲基化进行修饰。在一些实施例中，抗体是与一种或多种糖或碳水化合物分子缀合的糖基化抗体。在一些实施例中，一种或多种糖或碳水化合物分子经由n-糖基化、o-糖基化、c-糖基化、糖基磷脂酰肌醇化(gpi锚附接)和/或(例如，和)磷酸糖基化与抗体缀合。在一些实施例中，一种或多种糖或碳水化合物分子是单糖、二糖、低聚糖或聚糖。在一些实施例中，一种或多种糖或碳水化合物分子是支链寡糖或支链聚糖。在一些实施例中，一种或多种糖或碳水化合物分子包括甘露糖单元、葡萄糖单元、n-乙酰葡糖胺单元、n-乙酰半乳糖胺单元、半乳糖单元、岩藻糖单元或磷脂单元。在一些实施例中，抗体是包含多肽的构建体，该多肽包含与接头多肽或免疫球蛋白恒定结构域连接的一个或多个本披露的抗原结合片段。接头多肽包含通过肽键接合的两个或更多个氨基酸残基，并且用于连接一个或多个子抗原结合部分。已经报告了接头多肽的实例(参见例如holliger,p等人(1993)proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院研究期刊]90:6444-6448；poljak,r.j.等人(1994)structure[结构]2:1121-1123)。更进一步，抗体可以是更大的免疫粘附分子的一部分，其通过抗体或抗体部分与一种或多种其他蛋白质或肽的共价或非共价缔合而形成。此类免疫粘附分子的实例包括使用链霉亲和素核心区来制备四聚体scfv分子(kipriyanov,s.m.等人(1995)human antibodies and hybridomas[人类抗体与杂交瘤]6:93-101)和使用半胱氨酸残基、标记肽和c-末端多组氨酸标签来制备二价和生物素化scfv分子(kipriyanov,s.m.等人(1994)mol.immunol.[分子免疫学]31:1047-1058)。35、术语“单结构域抗体”或“sdab”或简称“纳米抗体”具有其常规的科学含义并且此处是指由单个单体可变抗体结构域组成的抗体片段，除非被称为超过一个单体可变抗体结构域，例如像在二价sdab的上下文中，其包含两个串联的此类单体变抗体结构域。二价纳米抗体是包含两种单结构域抗体的分子，其靶向存在于细胞的胞外侧的分子上的表位，诸如存在于细胞上的细胞表面分子的胞外结构域上的表位。优选地，细胞表面分子是细胞表面受体。二价纳米抗体也被称为二价单结构域抗体。优选地，两种不同的单结构域抗体直接共价结合或通过与两种不同的单结构域抗体共价结合的中间体分子共价结合。优选地，二价纳米抗体的中间体分子具有小于10,000道尔顿、更优选地小于5000道尔顿、甚至更优选地小于2000道尔顿、最优选地小于1500道尔顿的分子量。36、如本文所用，术语“共价连接的”是指两个或更多个分子经由至少一个共价键连接在一起的特征，即直接连接，或经由共价键链连接，即经由包含至少一个或多个原子的接头连接。37、如本文所用，术语“缀合物”应解释为已经且现在共价结合的两个或更多个不同分子的组合。例如，形成如本文披露的缀合物的不同分子可以包括一种或多种皂苷或皂苷分子以及与肌肉细胞表面上存在的内吞受体结合的一种或多种配体，优选地其中该配体是抗体或其结合片段，诸如igg、单克隆抗体(mab)、vhh结构域或另一种纳米抗体类型、包含两种单结构域抗体的二价纳米抗体分子等。在一些方面，本文披露的缀合物可以通过经由一个或多个中间体分子诸如接头(例如像经由连接到中心或另一个接头)共价连接不同的分子来制备。在缀合物中，并非所有的两个或更多个(诸如三个)不同的分子都需要彼此直接共价结合。缀合物中的不同分子也可以通过两者共价结合到相同的中间体分子诸如接头来共价结合，或者各自通过共价结合到中间体分子诸如另一个接头或中心接头来共价结合，其中这两个中间体分子诸如两个(不同的)接头彼此共价结合。根据这个定义，甚至更多中间体分子(诸如接头)可以存在于缀合物中的两个不同分子之间，只要它们之间存在共价结合的原子链即可。38、如本文所用，术语“施用(administering)”或“施用(administration)”意指以生理学上和/或(例如，和)药理学上有用的方式(例如，治疗受试者的病症)向受试者提供复合物39、如本文所用，术语“大约”或“约”在应用于一个或多个所感兴趣的值时，是指与所说明的参考值类似的值。在某些实施例中，术语“大约”或“约”是指在所说明的参考值的任一方向上的(大于或小于)15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％或更小范围内的值范围，除非另外说明或以另外的方式从上下文显而易见(除了这样的数值将超过可能值的100％)。40、说明书和权利要求书中的术语第一、第二、第三等用于区分例如相似要素、组合物、组合物中的成分、或分开的方法步骤，而不一定用于描述顺序或时间次序。除非另外说明，否则术语在适当的情况下是可互换的，并且本发明的实施例可以以本文所描述或展示的顺序外的其他顺序操作。41、除非另外说明，否则如本文所述的实施例可以组合和协同操作。此外，尽管各种实施例被称为“优选的”或“例如”或“举例”或“特别地”等，但是这些实施例应被解释为可以实施本文披露的概念的示例性方式，而不是限制的。42、权利要求中使用的术语“包含”不应被解释为限于例如要素或方法步骤或其后列出的组合物的成分；它不排除其他要素或方法步骤或某一组合物中的成分。它应被解释为明确说明存在提及的所述特征、整数、(方法)步骤或组分的存在，但不排除一个或多个其他特征、整数、步骤或组分、或其组的存在或添加。因此，“包含步骤a和b的方法”的表达的范围不应限于仅由步骤a和b组成的方法，而是相对于本发明，仅列举出该方法的步骤是a和b，并且权利要求应进一步解释为包括那些方法步骤的等同物。因此，“包含组分a和b的组合物”的表达的范围不应限于仅由组分a和b组成的组合物，而是相对于本发明，仅列举出该组合物的组分是a和b，并且权利要求应进一步解释为包括那些组分的等同物。43、另外，通过不定冠词“一个/一种”(“a”或“an”)指代要素或组分并不排除存在多于一个/一种要素或组分的可能性，除非上下文明确要求存在一个/一种并且仅一个/一种要素或组分。因此，不定冠词“一个/一种”通常意指“至少一个/一种”。44、术语“皂苷集(saponinum album)”具有其正常含义并且此处是指merck kgaa(达姆施塔特，德国)生产的皂苷混合物，其中含有来自满天星(gypsophila paniculata)和gypsophila arostii的皂苷，其含有sa1657，主要是sa1641。45、术语“皂树皂苷”具有其正常含义并且此处是指皂树的皂苷级分，因此是所有其他qs皂苷的来源，主要含有qs-18和qs-21。46、“qs-21”或“qs21”具有其常规的科学含义并且此处是指qs-21a-apio(约63％)、qs-21a-xylo(约32％)、qs-21b-apio(约3.3％)和qs-21b-xylo(约1.7％)的混合物。47、同样，“qs-21a”具有其常规的科学含义并且此处是指qs-21a-apio(约65％)和qs-21a-xylo(约35％)的混合物。48、同样，“qs-21b”具有其常规的科学含义并且此处是指qs-21b-apio(约65％)和qs-21b-xylo(约35％)的混合物。49、术语“quil-a”是指一种市售的皂树半纯化提取物并且含有数量不定的50多种不同的皂苷，其中许多在qs-7、qs-17、qs-18和qs-21的c-3β-oh基团处掺入了三萜-三糖亚结构gal-(1→2)-[xyl-(1→3)]-glca-。quil-a中发现的皂苷列于van setten(1995)，表2[dirk c.van setten,gerrit van de werken,gijsbert zomer和gideon f.a.kersten,glycosyl compositions and structural characteristics of the potential immuno-adjuvant active saponins in the quillaja saponaria molina extract quil a[皂树提取物quil a中潜在免疫佐剂活性皂苷的糖基组成和结构特征],rapid communicationsin mass spectrometry[质谱分析快讯],第9卷,660-666(1995)]。quil-a和皂树皂苷是来自皂树的皂苷的级分，两者都含有大量不同的皂苷，且含量大体上是重叠的。这两个级分的具体组成不同，因为这两个级分是通过不同的纯化程序获得的。50、术语“qs1861”和术语“qs1862”指的是qs-7和qs-7api。qs1861的分子量为1861道尔顿，qs1862的分子量为1862道尔顿。qs1862在以下中有描述：fleck等人(2019)表1中,第28行[juliane deise fleck,andresa heemann betti,francini pereira da silva,eduardo artur troian,cristina olivaro,fernando ferreira and simone gasparinverza,saponins from quillaja saponaria和quillaja brasiliensis:particularchemical characteristics and biological activities[特定的化学特征和生物活性],molecules[分子]2019,24,171；doi:10.3390/molecules24010171]。所描述的结构是qs-7的api-变体qs1862。分子量为1862道尔顿，因为该质量是包括葡糖醛酸处的质子在内的形式质量。在中性ph下，分子去质子化。在负离子模式下进行质谱测量时，测量质量为1861道尔顿。51、术语“so1861”和“so1862”是指肥皂草(saponaria officinalis)的相同皂苷，但是分别为去质子化形式或api形式。分子量为1862道尔顿，因为该质量是包括葡糖醛酸处的质子在内的形式质量。在中性ph下，分子去质子化。在负离子模式下使用质谱法测量质量时，测量质量为1861道尔顿。