新表位疫苗递送载体及其制备方法与流程

背景技术：1、为了改善药物的定位和生物利用度，已经在胶体药物载剂的设计上投入了大量的努力。理想情况下，主动靶向颗粒药物载剂将通过递送到患病部位来增加药物的治疗效果，同时减少药物相关的副作用。在全身施用的治疗剂的毒性作用可能超过其益处的情况下，这一目标的实现将极大地促进疾病(例如癌症)的治疗。迄今为止，针对体外和体内药物递送应用，已经探索了许多类型的递送载体，包括无机纳米颗粒、聚电解质复合物、脂质体、嵌段共聚物胶束和聚合物纳米颗粒。2、正在开发几个纳米颗粒疫苗递送平台，其中正寻求尽可能快的初次剂量递送。合成的纳米级载体提供了许多优势，诸如自下而上的功能设计、对敏感性生物活性货物(如肽)的体内保护等，并允许可扩展及可重复生产。3、本文披露了新的纳米凝胶疫苗平台，其通过多糖甘露聚糖的诱导自组装制成。将凝胶纳米颗粒用甘露聚糖链(以将颗粒吸引到cd206受体)和可切割的新表位肽进行修饰。这些纳米颗粒可以根据本文披露的方法快速制造。技术实现思路1、本文披露了制备用于体内递送治疗剂的自组装甘露聚糖纳米凝胶的方法，该方法包括：用高碘酸盐(naio4)氧化甘露聚糖；纯化该氧化的甘露聚糖；将苯胺添加到该纯化的氧化的甘露聚糖中，以产生甘露聚糖衍生物，该甘露聚糖衍生物具有与该甘露聚糖共价附接的疏水性苯基亚胺基团；以及对该甘露聚糖衍生物进行超声处理。2、在一个方面，将二酰肼(dh)交联剂引入到该自组装甘露聚糖纳米凝胶中，该方法包括使该甘露聚糖纳米凝胶与琥珀酸二酰肼(succinate dihydrazide，sdh)和3,3'-二硫代双(丙酸二酰肼)(dpdh)反应。3、在一个方面，制备二酰肼交联的甘露聚糖纳米凝胶用于装载含硫醇的货物，该方法包括用(三(2-羧乙基)膦)(tcep)还原纳米凝胶二硫化物交联物，用硼氢化物(nabh4)还原纳米凝胶亚胺和残留醛，以及用2,2-二硫代吡啶(dtp)活化纳米凝胶硫醇。4、在仍另一方面，将该含有硫醇的货物装载到经dtp活化的纳米凝胶上，其中该货物由一种或多种肽及任选地谷胱甘肽(gsh)组成。5、在又另一方面，将二酰肼交联的纳米凝胶用naio4氧化的甘露聚糖进行涂覆。6、在一个方面，将二胺(da)交联剂引入到该甘露聚糖纳米凝胶中，该方法包括使该甘露聚糖纳米凝胶依次与胱胺和乙二胺二盐酸盐(eda)反应，并且然后与氰基硼氢化钠(nacnbh3)反应。7、在一个方面，制备二胺交联的甘露聚糖纳米凝胶用于装载含硫醇的货物，该方法包括用(三(2-羧乙基)膦)(tcep)还原纳米凝胶二硫化物交联物，以及用2,2-二硫代吡啶(dtp)活化纳米凝胶硫醇。8、在一个方面，将该含有硫醇的货物装载到经dtp活化的纳米凝胶上，其中该货物由一种或多种肽及任选地谷胱甘肽(gsh)组成。9、在一个方面，将二胺交联的纳米凝胶用naio4氧化的甘露聚糖进行涂覆，并且然后使其与氰基硼氢化钠(nacnbh3)反应。10、本文还披露了将硫醇修饰的rna装载到经dtp活化的二酰肼交联的或二胺交联的甘露聚糖纳米凝胶上的方法，该方法包括1)对氧化的rna进行还原胺化，其中使氧化的rna依次与胱胺和tcep反应；2)纯化；以及3)添加到经dtp活化的纳米凝胶中。11、本文还披露了将rna装载到经dtp活化的二胺交联的甘露聚糖纳米凝胶上的方法，该方法包括向经dtp活化的纳米凝胶中添加未修饰的rna。12、本文还披露了包含表达cd206的293t细胞的组合物，其中这些293t细胞经基因工程化以稳定表达具有seq id no:1序列的基因。13、本文进一步披露了定量甘露聚糖纳米凝胶或装载货物的甘露聚糖纳米凝胶的细胞摄取的方法，该方法包括用甘露聚糖纳米凝胶处理表达cd206的293t细胞，其中这些293t细胞经基因工程化以稳定表达具有seq id no:1序列的基因，并且其中定量该纳米凝胶的细胞摄取或该货物的细胞表达。14、在定量细胞摄取的方法的一个方面，通过荧光、发光、活力、凋亡、细胞大小、细胞增殖、球体形成、细胞表面表达或亚细胞定位进行定量。15、在定量细胞摄取的方法的一个方面，该甘露聚糖纳米凝胶掺杂有荧光标记的葡聚糖。在一个方面，该荧光标记是异硫氰酸荧光素(fitc)。技术特征：1.一种制备用于体内递送治疗剂的自组装甘露聚糖纳米凝胶的方法，该方法包括：2.如权利要求1所述的方法，其中将二酰肼(dh)交联剂引入到该自组装甘露聚糖纳米凝胶中，该方法包括使该甘露聚糖纳米凝胶与琥珀酸二酰肼(sdh)和3,3'-二硫代双(丙酸二酰肼)(dpdh)反应。3.如权利要求2所述的方法，其中制备二酰肼交联的甘露聚糖纳米凝胶用于装载含硫醇的货物，该方法包括用(三(2-羧乙基)膦)(tcep)还原纳米凝胶二硫化物交联物，用硼氢化物(nabh4)还原纳米凝胶亚胺和残留醛，以及用2,2-二硫代吡啶(dtp)活化纳米凝胶硫醇。4.如权利要求3所述的方法，其中将该含有硫醇的货物装载到该经dtp活化的纳米凝胶上，其中该货物由一种或多种肽及任选地谷胱甘肽(gsh)组成。5.如权利要求2所述的方法，其中将二酰肼交联的纳米凝胶用naio4氧化的甘露聚糖进行涂覆。6.如权利要求1所述的方法，其中将二胺(da)交联剂引入到该甘露聚糖纳米凝胶中，该方法包括使该甘露聚糖纳米凝胶依次与胱胺和乙二胺二盐酸盐(eda)反应，并且然后与氰基硼氢化钠(nacnbh3)反应。7.如权利要求6所述的方法，其中制备二胺交联的甘露聚糖纳米凝胶用于装载含硫醇的货物，该方法包括用(三(2-羧乙基)膦)(tcep)还原纳米凝胶二硫化物交联物，以及用2,2-二硫代吡啶(dtp)活化纳米凝胶硫醇。8.如权利要求7所述的方法，其中将该含有硫醇的货物装载到该经dtp活化的纳米凝胶上，其中该货物由一种或多种肽及任选地谷胱甘肽(gsh)组成。9.如权利要求6所述的方法，其中将二胺交联的纳米凝胶用naio4氧化的甘露聚糖进行涂覆，并且然后使其与氰基硼氢化钠(nacnbh3)反应。10.一种将硫醇修饰的rna装载到如权利要求3所述的经dtp活化的甘露聚糖纳米凝胶上的方法，该方法包括：11.一种将硫醇修饰的rna装载到如权利要求7所述的经dtp活化的甘露聚糖纳米凝胶上的方法，该方法包括：12.一种将rna装载到如权利要求7所述的经dtp活化的甘露聚糖纳米凝胶上的方法，该方法包括向该经dtp活化的纳米凝胶中添加未修饰的rna。13.一种包含表达cd206的293t细胞的组合物，其中这些293t细胞经基因工程化以稳定表达具有seq id no:1序列的基因。14.一种定量甘露聚糖纳米凝胶或装载货物的甘露聚糖纳米凝胶的细胞摄取的方法，该方法包括用甘露聚糖纳米凝胶处理表达cd206的293t细胞，其中这些293t细胞经基因工程化以稳定表达具有seq id no:1序列的基因，并且其中定量该纳米凝胶的细胞摄取或该货物的细胞表达。15.如权利要求14所述的方法，其中通过荧光、发光、活力、凋亡、细胞大小、细胞增殖、球体形成、细胞表面表达或亚细胞定位进行定量。16.如权利要求14所述的方法，其中该甘露聚糖纳米凝胶掺杂有荧光标记的葡聚糖。17.如权利要求16所述的方法，其中该荧光标记是异硫氰酸荧光素(fitc)。技术总结本文披露了作为新的疫苗递送平台的甘露聚糖纳米凝胶，以及制备用于体内递送治疗剂的自组装甘露聚糖纳米凝胶的新方法。技术研发人员：P·T·刘,C·A·奥尔森,W·N·理查德森,W·希嘉施德受保护的技术使用者：免疫生物公司技术研发日：技术公布日：2024/8/16