用于特发性肺纤维化治疗的仿生纳米递送系统M

本发明涉及一种用于特发性肺纤维化治疗的仿生纳米递送系统m@rcpda纳米粒及其制备方法，属于生物医药。背景技术：1、特发性肺纤维化（ipf）致病因素复杂，中位生存期短。ca是一种有效的ctgf抑制剂，在肝纤维化中研究广泛。可在博来霉素诱导的成纤维细胞中抑制ctgf表达，但单一ca治疗效果不足以逆转ipf；雷帕霉素（rapa）是一种自噬激活剂和成熟的抗衰老药物，在动物模型中显示出逆转成纤维细胞异常衰老和减轻纤维化的潜力，在纤维化治疗研究中引起了极大的关注。但在ipf相关研究中，rapa的治疗出现了单靶点治疗的不足，尽管在动物模型中抑制了成纤维细胞活化增殖但未能实现中止ipf进程，同时还伴有长期应用导致全身免疫抑制等副作用。2、由于ipf致病原理涉及信号通路的复杂相互作用，联合给药治疗有希望突破rapa疗效不足的困境。由于肺部生理屏障与特发性肺纤维化的复杂病理环境，传统药物或非靶向制剂目标部位药物浓度低，现有方案仅能靶向心脏纤维化且无法实现响应性释放药物，单一药物无法有效治疗肺纤维化。因此实现肺纤维化灶靶向药物递送和控释仍是临床前研究的关键挑战。技术实现思路1、针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于特发性肺纤维化治疗的仿生纳米递送系统m@rcpda纳米粒及其制备方法，所述仿生纳米递送系统具体为一种新型巨噬细胞膜仿生聚多巴胺纳米递送系统巨噬细胞修饰的负载雷帕霉素与咖啡因的聚多巴胺纳米粒（m@rcpda），仿生纳米递送系统m@rcpda以在ipf富含氧化应激的微环境中携带和释放雷帕霉素（rapa）和（ca）。基于巨噬细胞固有的迁移特性和聚多巴胺（pda）的氧化应激响应性释放特征，使m@rcpda靶向蓄积于氧化应激主导的ipf微环境并响应性释放两种药物。m@rcpda对ipf治疗效果的实现是基于rapa和ca的联合治疗，这种双药联合治疗策略通过二者潜在的协同作用，最终提供能够逆转ipf，拓展ipf治疗中联合治疗药物。2、上述用于特发性肺纤维化治疗的仿生纳米递送系统m@rcpda纳米粒的制备方法，具体步骤如下：3、（1）通过碱性氧化法合成咖啡因纳米粒（cpda）：将盐酸多巴胺 （da·hcl）、咖啡因（ca）、去离子水混合后在室温下搅拌0.5 h，缓慢加入氢氧化钠溶液，25~50 ℃下搅拌4~6 h陈化，得到咖啡因纳米粒（cpda）；将咖啡因纳米粒（cpda）以15000 rpm转速离心10 min，沉淀加入去离子水重悬，重复离心直至上清无色，沉淀以4000 rpm离心5 min，取上清冻干保存；4、（2）雷帕霉素咖啡因聚多巴胺纳米粒（rcpda）合成：将cpda用去离子水溶解，在1000-1200 rpm下搅拌，缓慢滴入浓度为100-1000 μg/ml的雷帕霉素（rapa）甲醇溶液，室温下持续搅拌，直至甲醇挥发完全，随后离心除去游离rapa，得到rcpda溶液；5、（3）小鼠单核巨噬细胞白血病细胞（raw264.7）巨噬细胞膜囊泡溶液的制备：以差速离心法利用小鼠单核巨噬细胞白血病细胞制备巨噬细胞膜囊泡溶液；6、（4）m@rcpda制备：取步骤（2）中合成的rcpda溶液于离心管中，加入步骤（3）制备出的raw264.7巨噬细胞膜囊泡溶液，混匀后，依次用脂质体挤出机400 nm、200 nm聚碳酸酯微孔滤膜，反复挤出5-10次获得m@rcpda纳米粒。7、优选的，所述步骤（1）中盐酸多巴胺的添加量与咖啡因（ca）的添加量的质量比为：16-32:0.1-0.6；盐酸多巴胺的添加量与去离子水添加量的质量体积比为16-32:14，g/l；氢氧化钠浓度为64 μm，盐酸多巴胺的添加量与氢氧化钠溶液的添加量质量体积比为16-32:2，g/l。8、优选的，所述步骤（2）中cpda与去离子水的质量体积比为1：1，mg/ml。9、优选的，所述步骤（2）中cpda溶液与rapa甲醇溶液体积比为2：1，离心转速为4000rpm。10、优选的，所述步骤（4）中rcpda溶液与raw264.7巨噬细胞膜囊泡溶液体积比为1~9：1。11、相较于现有技术，本发明的有益效果如下：12、（1）本发明构建的仿生纳米递送系统m@rcpda纳米粒实现了更高效的ipf靶向递药，降解已沉积的胶原，恢复被破坏的肺组织结构，从而展现出ipf治愈潜力。13、（2）ca通过抑制rapa治疗导致的ctgf过表达从而降低关键纤维化因子tgf-β1水平，且rapa与ca联合给药应用于ipf治疗并验证二者联合应用疗效与潜在的协同作用。14、（3）开发共同负载rapa与ca 的巨噬细胞仿生聚多巴胺纳米粒m@rcpda，创造性的应用cxcr4+巨噬细胞固有的迁移特性和聚多巴胺（pda）的氧化应激响应性释放特征，并在此过程中改进了聚多巴胺传统合成方法实现ca与rapa的包载、ipf靶向与响应性释放。最终进一步提高了rapa与ca联合给药治疗ipf的效果。技术特征：1.一种用于特发性肺纤维化治疗的仿生纳米递送系统m@rcpda纳米粒的制备方法，其特征在于，所述制备方法的步骤如下：2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中盐酸多巴胺的添加量与咖啡因（ca）的添加量的质量比为：16-32:0.1-0.6。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，盐酸多巴胺的添加量与去离子水添加量的质量体积比为16-32:14，g/l。4. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，氢氧化钠浓度为64 μm，盐酸多巴胺的添加量与氢氧化钠溶液的添加量质量体积比为16-32:2，g/l。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中cpda与去离子水质量体积比为1：1，mg/ml。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中cpda溶液与rapa甲醇溶液体积比为2：1。7. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中离心转速为4000rpm。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中rcpda溶液与raw264.7巨噬细胞膜囊泡溶液体积比为1~9：1。9.如权利要求1-8任一项所述制备方法获得的用于特发性肺纤维化治疗的仿生纳米递送系统m@rcpda纳米粒。技术总结本发明涉及一种用于特发性肺纤维化治疗的仿生纳米递送系统M@RCPDA纳米粒及其制备方法，属于生物医药技术领域。本发明通过碱性氧化法合成咖啡因纳米粒，滴入雷帕霉素甲醇溶液合成雷帕霉素咖啡因聚多巴胺纳米粒，加入巨噬细胞膜囊泡溶液混匀，用脂质体挤出机反复挤出获得M@RCPDA纳米粒。本发明构建的仿生纳米递送系统M@RCPDA纳米粒实现了更高效的IPF靶向递药，降解已沉积的胶原，恢复被破坏的肺组织结构；开发共同负载RAPA与CA的巨噬细胞仿生聚多巴胺纳米粒M@RCPDA，RAPA与CA联合给药应用于IPF治疗并验证二者联合应用疗效与潜在的协同作用，提高了RAPA与CA联合给药治疗IPF的效果。技术研发人员：林贵梅,莫凡阳受保护的技术使用者：山东大学技术研发日：技术公布日：2024/8/16