美白复合蛋白肽酶解液的制备方法与流程

本发明涉及蛋白肽，具体为一种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法。背景技术：1、皮肤的肤色主要由皮肤黑色素细胞的多少和细胞黑色素含量决定。黑色素细胞占比少，黑色素含量低，则皮肤就会显得白。黑色素细胞占比多，黑色素含量高，则皮肤就显得黑。在黑色素细胞内，受到酪氨酸酶的催化作用，酪氨酸先后被氧化成多巴和多巴醌，多巴醌又进一步转化成多巴色素，在dhi酶、多巴色素互变酶和dhica氧化酶的分别催化作用下，多巴色素逐步形成黑色素。2、生物活性肽是指具有特殊生理功能的肽类物质，是指蛋白经过酶水解等手段制备的约含2~20个氨基酸长度且具有特定生物活性的肽段，可通过体内或体外酶解将其从母体蛋白质中释放出来而发挥特定的生理功能。与化学合成药物相比，食源性、植物性蛋白肽具有安全、无毒副作用等优点。现有有关藜麦肽、胶原蛋白肽制备方法的研究中，主要是通过单一酶解的方法，提取出活性肽，然而这种单一酶解的方法容易出现酶解不充分，得到的活性肽分子量大，美白活性低等缺点。技术实现思路1、本发明的目的在于提供一种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法，以解决现有技术中存在的问题。2、为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种美白复合蛋白肽酶解液，所述美白复合蛋白肽酶解液包括藜麦多肽酶解液、鱼皮胶原蛋白肽改性物。3、进一步的，所述藜麦多肽酶解液由藜麦麸皮、藜麦秸秆经过氧化氢预处理后，经分级酶解制得。4、进一步的，所述鱼皮胶原蛋白肽改性物由鱼皮经氯化钠溶液、柠檬酸提取出鱼皮蛋白，再通过分级酶解，得鱼皮胶原蛋白肽酶解液，然后与对苯二酚偶联制得。5、进一步的，所述鱼皮为皖鱼皮、罗非鱼鱼皮或鳕鱼鱼皮的一种或多种混合。6、进一步的，一种美白复合蛋白肽酶解液的制备方法，包括以下制备步骤：7、（1）将预处理藜麦和蒸馏水按料液比1:15混合，25khz超声40~50min后，4000rpm离心10min，取上清液，真空度0.084mpa、50℃、160rpm旋蒸10~16min得混合液，加入混合液体积3~4倍的无水乙醇，静置30min后，5000rpm离心25~35min，取沉淀，得藜麦蛋白；8、（2）将藜麦蛋白和蒸馏水按料液比1:10混合，搅拌均匀后，经分级酶解，得藜麦多肽酶解液；9、（3）将鱼皮用刀切成2×2cm的小块，用蒸馏水冲洗3~5次，浸泡于鱼皮质量20~34倍的蒸馏水中，浸泡24h后，取出鱼皮，按料液比1:10浸泡于氯化钠溶液，氯化钠溶液中氯化钠和蒸馏水的质量比为3:100，5℃、100rpm搅拌12h后，取出鱼皮，按料液比1:30浸泡于柠檬酸，溶胀24h，8000rpm均质处理3min后，过滤，盐析至氯化钠浓度为4mol/l，4℃下静置24h，6000rpm离心15min，取沉淀，得鱼皮蛋白；10、（4）将鱼皮蛋白和蒸馏水按料液比1:9混合，搅拌均匀后，经分级酶解，得鱼皮胶原蛋白肽酶解液；11、（5）将对苄氧基苯酚、鱼皮胶原蛋白肽酶解液、4-二甲氨基吡啶、二氯甲烷按质量比1:2:1.0:30~1:3:1.3:35混合，冷却至0℃，加入对苄氧基苯酚质量1.8~2.0倍的碳二亚胺、对苄氧基苯酚质量30~35倍的二氯甲烷，60rpm搅拌5~10min，升至室温，继续搅拌2~4h后，升温至40℃，加热3~5h后，萃取，用饱和氯化钠溶液洗涤5~7次得混液，加入混液质量0.1倍的无水硫酸镁，干燥8~12h后，过滤，层析，得中间物；12、（6）将中间物、无水乙醇、钯碳按质量比1:22:0.05~1:27:0.1混合，氢气气氛围下，70rpm搅拌6~8h后，过滤，取滤液，真空度0.085mpa、55℃下蒸馏1.5~3h，层析，得鱼皮胶原蛋白肽改性物；将藜麦多肽酶解液、鱼皮胶原蛋白肽改性物按质量比2:1混合，得美白复合蛋白肽酶解液。13、进一步的，步骤（1）所述预处理藜麦的制备方法为：将藜麦原料和过氧化氢溶液按料液比1:10~1:18混合，过氧化氢溶液中过氧化氢和去离子水的质量比为4:100~8:100，加入氢氧化钠至溶液ph为7.0，75~85℃下浸泡1.5~2.5h后，6000rpm离心8min，取固体，50℃干燥6h。14、进一步的，所述藜麦原料为藜麦麸皮和藜麦秸秆按质量比1:1~1:3混合，使用粉碎机破碎至80~100目筛。15、进一步的，步骤（2）、（4）所述分级酶解为：加入氢氧化钠至溶液ph 为8，加入蛋白质量0.00075~0.001倍的碱性蛋白酶，50℃酶解2~4h后，升温至90℃，灭酶20~30min后，冷却至50℃，加入盐酸至溶液ph为6.5，加入蛋白质量0.0005~0.001倍的中性蛋白酶，酶解1~3h后，升温至90℃，灭酶20~30min后，冷却至45℃，加入盐酸至ph为2.8，加入蛋白质量0.0005~0.001倍的酸性蛋白酶，酶解1~2h后，升温至90℃，灭酶20~30min后，离心、脱色、过滤。16、进一步的，所述离心步骤为：4500~6000rpm离心20~30min，取上清液；所述脱色步骤为：加入上清液质量0.01~0.03倍的活性炭、上清液质量0.01~0.03倍的硅藻土，50~60℃、30~50rpm脱色40~60min；所述过滤步骤为：在压力为0.15mpa、搅拌速度为120rpm下，经过过滤面积为30cm2、3kd的膜。17、进一步的，步骤（5）所述对苄氧基苯酚的制备方法为：将无水乙醇、去离子水、氢氧化钠按质量比1:0.6:0.1混合，搅拌溶解后，加热至75℃，加入无水乙醇质量0.2~0.4倍的对苯二酚，80rpm搅拌10~15min后，加入无水乙醇质量0.2~0.3倍的氯化苄，继续反应50~70min后，真空度0.085mpa、55℃蒸馏2~3h后，冷却至室温，加入盐酸至固体完全析出，抽滤，取滤饼，将滤饼置于滤饼质量1~3倍的质量分数为17%的氢氧化钠溶液中，80rpm搅拌20~30min后，抽滤，取滤液，加入盐酸至固体不再析出，抽滤，取滤饼，用蒸馏水洗涤至洗液ph为7，40℃干燥8h得对苄氧基苯酚。18、与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：19、本发明制备的复合肽酶解液包含藜麦多肽酶解液、鱼皮胶原蛋白肽改性物，安全性高，制备得到的复合蛋白肽酶解液为天然物质，无化学试剂残留，安全无毒副作用，不会对人体起到有害作用，同时又能实现美白、高纯的效果。20、首先，本发明采用新鲜的藜麦麸皮和藜麦秸秆为原料，先进行预处理，过氧化氢与藜麦细胞壁中木质素侧链上的羰基和碳碳双键反应，使木质素快速水解，从而破坏细胞壁，有利于提取液的进入以及藜麦蛋白的溶出，然后采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶和酸性蛋白酶对藜麦蛋白进行第一次分级酶解处理，使得藜麦蛋白大分子能够充分酶解为小分子量的蛋白肽，减少低分子量氨基酸的生成，能够高效获得小分子藜麦肽，提高藜麦肽的得率和纯度，且获得的藜麦肽的美白性和抗氧化性更高，而且使废弃资源得到有效利用，还为各种药理活性物质的开发提供新思路。21、其次，鱼皮经过第二次分级酶解处理后，获得鱼皮胶原蛋白肽，具有补水保湿、舒缓的功效，能够带动藜麦多肽实现深层吸收，协同增效，提高复合蛋白肽酶解液的美白效果；然后对苯二酚一侧的酚羟基引入苄基保护基团，防止对苯二酚反应完全，失去美白活性，另一侧的酚羟基与鱼皮胶原蛋白肽进行偶联后，去掉保护基团，提高鱼皮胶原蛋白肽的美白效果，与藜麦多肽共同作用提高复合蛋白肽酶解液的美白效果，同时对皮肤没有刺激，毒副作用小。