蓝布正总酚酸的纯化方法及其在药物中的应用

本发明属于中药，具体涉及蓝布正总酚酸的纯化方法及其在药物中的应用。背景技术：1、蓝布正具有益气健脾、补血养阴、润肺化痰的功效，用于治疗气血不足，虚痨咳嗽，脾虚带下等症。蓝布正作为一种药材，含有三萜、黄酮、鞣质、木脂素、挥发油多种化学成分，其中，酚酸类化合物主要为鞣质类总酚酸，具有较强的抗氧化、血管新生等活性。2、中国发明专利cn108969580a公开了一种蓝布正总鞣质的制备方法及应用，其制备方法为：（1）取蓝布正药材，粉碎为粉末后用丙酮浸泡；（2）进行超声提取；（3）用2倍体积的水饱和乙酸乙酯萃取；（4）加入明胶溶液进行沉淀；（5）再用丙酮进行超声提取；（6）真空干燥，得到纯化蓝布正鞣质。该发明中，蓝布正总鞣质的制备方法包含超声提取、溶剂萃取、明胶沉淀、真空干燥等步骤，制备的纯化蓝布正鞣质用于补气血药物效果明显。而该制备方法使用了大量的有机溶剂，如丙酮、乙酸乙酯，具有一定的毒性。且纯化后的总鞣质的含量、转移率较低。3、目前，关于蓝布正鞣质类酚酸的制备和纯化技术的研究较少，其他药材关于对鞣质类酚酸的提取和纯化常用的方法，大都使用乙醇提取，然后借助大孔吸附树脂进行吸附、洗脱纯化。中国发明专利cn108338996a公开了一种制备诃子中鞣质类有效成分的方法，包括如下步骤：将诃子粉末用无水乙醇超声提取，提取液减压浓缩成浸膏；将浸膏用适量水溶解后用大孔吸附树脂柱色谱分离，依次用纯水、体积分数20%、40%、60%、80%、90%、95%的乙醇梯度洗脱，收集90%乙醇洗脱部位，再经硅胶柱色谱分离，依次用体积比65:1、55:1、45:1、35:1、25:1、10:1的氯仿-甲醇洗脱，收集25:1洗脱部分，浓缩即得。该技术所使用的大孔吸附树脂柱为d101型，且同样使用具有毒性的氯仿-甲醇进行洗脱，限制了鞣质类活性成分在药物制备中的应用。4、中国发明专利cn113332320a公开了一种诃子鞣质部位的纯化方法及诃子鞣质部位，该纯化方法包括如下步骤：将含诃子提取物的上样液上样于装有hpd-400大孔树脂的层析柱中，进行吸附；吸附完成后，用去离子水洗脱，洗脱流速为2.5-4.5bv/h；然后用60-80vol%乙醇洗脱，洗脱流速为5-7bv/h，收集乙醇洗脱液并浓缩，干燥，得到诃子鞣质部位纯化产物。该发明所得诃子鞣质部位的总鞣质的含量为60%以上，总鞣质的转移率为60%以上。该技术的总鞣质的转移率效果较低。5、基于上述技术问题，需要对蓝布正鞣质类总酚酸的提取和纯化进行进一步的研究，以提高蓝布正总酚酸的吸附率、含量和转移率，同时，进一步研究蓝布正鞣质类总酚酸的抗炎、抗菌、抗氧化等活性，拓宽其在药物应用中的巨大的应用潜力。技术实现思路1、本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种蓝布正总酚酸的纯化方法及其在药物中的应用。将乙醇提取后的蓝布正提取物使用大孔吸附树脂进行纯化，控制上样液浓度为4-8mg/ml，以2-4bv/h的流速通入树脂床径高比为1:4-12的大孔吸附树脂柱中，上样量≤3bv，用稀乙醇溶液进行洗脱除杂，除杂流速控制在2-4bv/h，除杂完成后，用高浓度的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速控制在2-6bv/h，最终得到纯化的蓝布正总酚酸；将得到的蓝布正总酚酸用于制备具有促进伤口愈合、抑制瘢痕形成的药物中，所制备的药物具有显著提高相对伤口愈合率、相对瘢痕抑制率的功效。2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：3、首先，本发明提供一种蓝布正总酚酸在制备具有促进伤口愈合、抑制瘢痕形成的药物中的应用；蓝布正总酚酸由包括以下步骤的纯化方法所得到：4、（1）将含蓝布正提取物的上样液，以2-4bv/h的流速，上样于树脂床径高比为1:4-12的大孔吸附树脂柱中，进行吸附；5、（2）除杂：使用体积浓度为5-20%的稀乙醇溶液进行除杂洗脱，除杂洗脱的流速为2-4bv/h，控制除杂洗脱的稀乙醇溶液用量为2-6bv；6、（3）洗脱：使用体积浓度为50-80%的浓乙醇溶液进行洗脱，控制洗脱流速为2-6bv/h，收集乙醇洗脱液，得到蓝布正总酚酸。7、优选地，步骤（1）中，所述上样液，为蓝布正提取物的水溶液，浓度为4-10mg/ml；该浓度包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如4mg/ml、4.5mg/ml、5mg/ml、5.5mg/ml、6mg/ml、6.5mg/ml、7mg/ml、7.5mg/ml、8mg/ml、8.5mg/ml、9mg/ml、9.5mg/ml、10mg/ml。8、进一步优选地，所述上样液的浓度为8mg/ml。9、优选地，步骤（1）中，所述流速为2-4bv/h，该流速包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如2bv/h、2.2bv/h、2.5bv/h、2.8bv/h、3bv/h、3.2bv/h、3.5bv/h、3.8bv/h、4bv/h。10、进一步优选地，所述流速为2bv/h。11、优选地，步骤（1）中，所述大孔吸附树脂，选自hpd-400大孔吸附树脂、hpd-600大孔吸附树脂、ab-8大孔吸附树脂、d101大孔吸附树脂中的一种。12、进一步优选地，所述大孔吸附树脂为hpd-400大孔吸附树脂。13、优选地，步骤（1）中，树脂床径高比为1:4-12；该比值包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如1:4、1:4.5、1:5、1:5.5、1:6、1:6.5、1:7、1:7.5、1:8、1:8.5、1:9、1:9.5、1:10、1:10.5、1:11、1:11.5、1:12。14、进一步优选地，所述树脂床径高比为1:6-12；该比值包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如1:6、1:6.5、1:7、1:7.5、1:7.7、1:7.8、1:7.9、1:8、1:8.1、1:8.2、1:8.3、1:8.5、1:9、1:9.5、1:10、1:10.5、1:11、1:11.5、1:12。15、更进一步优选地，所述树脂床径高比为1:8。16、本发明中，所述树脂床径高比的含义为：填装好后的大孔树脂柱，柱内直径与填料高度的比值。17、优选地，步骤（1）中，所述上样液，其上样量为0.5-3bv；该上样量包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如0.5bv、1bv、1.2bv、1.5bv、2bv、2.5bv、3bv，在本发明的一个具体实施例中，所述上样量为3bv。18、优选地，步骤（2）中，所述稀乙醇溶液，其体积浓度为10-20%；该体积浓度包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如10%、10.2%、10.5%、10.7%、11%、11.5%、12%。19、进一步优选地，所述稀乙醇溶液的体积浓度为10%。20、优选地，步骤（2）中，所述稀乙醇溶液，其用量为2-6bv；该用量包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如2bv、2.5bv、3bv、3.5bv、4bv、4.5bv、5bv、5.5bv、6bv。21、进一步优选地，所述稀乙醇溶液，其用量为2-4bv；该用量包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如2bv、2.5bv、3bv、3.5bv、4bv。22、进一步优选地，所述稀乙醇溶液，其用量为4bv。23、优选地，步骤（2）中，所述除杂洗脱的流速为2-4bv/h；该流速包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如2bv/h、2.5bv/h、3bv/h、3.5bv/h、4bv/h。24、进一步优选地，所述除杂洗脱的流速为3bv/h。25、优选地的，步骤（3）中，所述浓乙醇溶液，其体积浓度为50-80%，该体积浓度包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%。26、进一步优选地，所述浓乙醇溶液，其体积浓度为50-70%；该体积浓度包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如50%、52%、55%、58%、60%、63%、65%、67%、70%。27、更进一步优选地，所述浓乙醇溶液，其体积浓度为50%。28、优选地，步骤（3）中，所述洗脱流速为2-4bv/h；该流速包括数值范围内的任意实数和端点值，举例如2bv/h、2.5bv/h、3bv/h、3.5bv/h、4bv/h。29、进一步优选地，所述洗脱流速为4bv/h。30、优选地，所述浓乙醇溶液，其用量为≥4bv；进一步优选为≥5bv；更进一步优选为5-10bv；最优选为5bv。31、优选地，所述的药物为具有促进极性伤口愈合、抑制瘢痕形成的药物。32、进一步优选地，所述的药物为能够提高相对伤口愈合率和相对瘢痕抑制率的药物。33、进一步优选地，所述的药物为能够提高新生毛细血管数量、表皮再生率、新生皮肤附属器数量、胶原纤维比例、iii型胶原/i型胶原，且降低成纤维细胞数量的药物。34、进一步优选地，所述的药物为能够降低受伤组织中il-6、tnf-α水平，提高受伤组织中vegf-a水平，提高mmp3蛋白含量的药物。35、然后，本发明提供一种药物制剂，包含上述应用所述的纯化方法所得到的蓝布正总酚酸。36、优选地，所述药物制剂的类型包括凝胶剂、乳液剂、软膏剂、乳膏剂、贴膏剂。37、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：38、1、本发明所述应用中的蓝布正总酚酸，采用特定的纯化方法所制备得到，通过采用特定型号的大孔吸附树脂进行吸附，控制树脂床的径高比、上样液的浓度、上样液的流速、上样量，控制除杂的溶剂种类、溶剂浓度、溶剂流速和溶剂用量，进一步控制洗脱的溶剂种类、溶剂浓度、溶剂流速和溶剂用量，提高对蓝布正总酚酸的吸附率、解吸率和转移率，提高蓝布正总酚酸的质量分数（含量）。并且该纯化方法稳定性高，重复性良好。39、2、本发明采用纯化方法所得到的蓝布正总酚酸，将其应用于制备具有促进极性伤口愈合、抑制瘢痕形成的药物中，对全皮层切除模型小鼠能够促进伤口愈合、抑制瘢痕形成；蓝布正总酚酸可提高相对伤口愈合率和相对瘢痕抑制率，胶原纤维明显增加，促进伤口愈合；同时使炎症因子il-6、tnf-α水平显著降低，可以减少炎症反应；并使vegf-a水平显著升高，为皮肤生长创造了更有利的环境；在30天时，蓝布正总酚酸可显著提高mmp3的含量，防止基质过度沉积，抑制瘢痕形成。