一种基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法与

本发明属于医用生物材料，特别涉及一种基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法。背景技术：1、生物补片自身是基于生物基质加工制备而成的，相比于传统高分子补片，较好地保留了生物基质的特性，植入机体后最终被完全吸收，不侵蚀临近组织器官，不增加术后感染的风险。生物补片植入机体后会引导内源性组织再生，不仅可快速再血管化，同时循环中的干细胞进入并分化、填充、产生新的细胞外基质，从而修复组织缺损。其中，生物补片的多孔结构便于上述干细胞的生长和贴附。2、生物基质需要经过严格的除菌灭活及脱细胞处理后，才能用作合格的补片产品，而在除菌灭活及脱细胞处理过程中，容易破坏基质的多孔胶原结构，从而影响干细胞在补片上的贴附生长，因此在对基质进行除菌、脱细胞前处理时，需要格外注意对其多孔胶原结构的保护，这往往导致前处理工序较为复杂。技术实现思路1、为解决上述技术问题，本发明提供了一种基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，包括如下步骤：2、(1)基质材料的前处理3、取哺乳动物(猪、牛、羊等)的小肠组织，通过筛选柔软光滑、无破损溃烂、无病变的小肠后，将小肠壁组织部分用生理盐水清洗，滤干，再将该组织部分的浆膜层、肌肉层以及粘膜层去除，然后用生理盐水对保留下来的小肠粘膜下层冲洗至无多余组织和污渍，滤干；4、(2)细菌和病毒的灭活5、对步骤(1)中得到的小肠粘膜下层先用紫外光常温(25℃，下同)照射，然后用抗生素溶液进行常温孵育处理一段时间后，经过清洗再用过氧乙酸进行常温孵育处理，然后清洗，滤干；6、(3)溶胀和冻融处理7、将经过步骤(2)处理的小肠粘膜下层浸入溶胀液中并于摇床中25℃～40℃下孵育2～5小时，之后常温下用生理盐水清洗3次，每次5分钟，再将小肠粘膜下层在-80℃～-20℃下孵育8～24小时，之后常温浸泡在生理盐水中融化，反复3～5次；8、(4)脱细胞处理9、将经过步骤(3)处理的小肠粘膜下层浸入含锌离子的表面活性剂溶液中并于摇床中25℃～40℃下孵育1～3小时，小肠粘膜下层与含锌离子的表面活性剂溶液的体积比为1：80～1：150，之后常温下用生理盐水清洗3次，每次5分钟，而后在超声环境中清洗，10、其中，含锌离子的表面活性剂溶液为十二烷基苯磺酸锌溶液，十二烷基苯磺酸锌溶液的浓度为10～12mmol/l；11、(5)对经过步骤(4)处理的小肠粘膜下层进行真空冷冻干燥。12、作为优选：步骤(2)中的紫外光常温照射为，将小肠粘膜下层浸泡在生理盐水中，小肠粘膜下层与生理盐水的体积比为1：50～1：200，并于常温下采用紫外光照射10～20分钟。13、作为优选：步骤(2)中，抗生素包括庆大霉素、万古霉素、青霉素、链霉素、头孢西丁、氯霉素中的一种或几种的组合，抗生素溶液的浓度为10～100mg/l，将小肠粘膜下层浸泡在抗生素溶液中孵育12～24小时后，用无菌水清洗小肠粘膜下层3次，每次10分钟，小肠粘膜下层与抗生素溶液的体积比为1：50～1：100。14、作为优选：步骤(2)中，将小肠粘膜下层浸泡在过氧乙酸溶液中孵育1～4小时后，在超声环境下使用超纯水清洗小肠粘膜下层3次，每次10分钟，小肠粘膜下层与过氧乙酸溶液的体积比为1：50～1：100。15、作为优选：步骤(3)中，小肠粘膜下层与溶胀液的体积比为1：50～1：200，溶胀液为氯化钠水溶液、氯化锌水溶液等。16、作为优选：步骤(3)中，按照小肠粘膜下层与生理盐水的体积比为1：50～1：200，将小肠粘膜下层浸泡在生理盐水中融化。17、作为优选：步骤(5)中的真空冷冻干燥为，先于-45℃～-25℃下保温1～2小时；然后开启真空泵调节腔室内的压强为20pa～25pa，并调节温度至-25℃～-15℃，保温5～7小时；最后调节温度至0℃，保温4～6小时。18、本发明的有益效果在于：19、本申请通过含锌离子的表面活性剂溶液进行脱细胞，主要是通过表面活性离子(十二烷基苯磺酸根离子，下同)对基质上的细胞结合后，再通过清洗实现脱细胞，为了尽可能脱细胞充分，表面活性离子需要过量加入，但表面活性离子的过量会导致对基质胶原结构的破坏。20、对此，本申请的表面活性剂溶液中阳离子为锌离子，其不同于常见表面活性剂物质的是：由于阳离子锌离子带有二价正电荷，且锌离子粒径相对较小，导致锌离子自身具有相比于其他一些阳离子更高的正电荷密度，表面活性离子通过正负电荷结合于锌离子上一同靠近进入小肠粘膜下层基质后，锌离子始终保持对带负电荷的表面活性离子较强的电荷吸引，使其中未能与细胞结合的表面活性离子更多还是停留在锌离子上，从而减少了自由表面活性离子向小肠粘膜下层基质的蛋白上结合所引起的“蛋白的去折叠聚集变质，从而破坏到小肠粘膜下层基质的胶原结构稳定性”。技术特征：1.一种基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤，2.如权利要求1所述的基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的哺乳动物为猪、牛、羊中的一种。3.如权利要求1所述的基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，其特征在于：步骤(1)中，取所述哺乳动物的所述小肠组织时，选用柔软光滑、无破损溃烂、无病变的小肠。4.如权利要求1所述的基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的紫外光常温照射为，将所述小肠粘膜下层浸泡在生理盐水中，所述小肠粘膜下层与所述生理盐水的体积比为1：50～1：200，并于常温下采用紫外光照射10～20分钟。5.如权利要求1所述的基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述抗生素包括庆大霉素、万古霉素、青霉素、链霉素、头孢西丁、氯霉素中的一种或几种的组合。6.如权利要求1所述的基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述小肠粘膜下层与所述抗生素溶液的体积比为1：50～1：100。7.如权利要求1所述的基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，其特征在于：步骤(2)中，将所述小肠粘膜下层浸泡在所述低浓度过氧乙酸中孵育1～4小时，所述小肠粘膜下层与所述低浓度过氧乙酸的体积比为1：50～1：100。8.如权利要求1所述的基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述小肠粘膜下层与所述溶胀液的体积比为1：50～1：200，所述溶胀液包括氯化钠水溶液、氯化锌水溶液。9.如权利要求1所述的基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，其特征在于：步骤(3)中，按所述小肠粘膜下层与所述生理盐水的体积比为1：50～1：200，将所述小肠粘膜下层浸泡在所述生理盐水中融化。10.如权利要求1所述的基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，其特征在于：步骤(5)中所述的真空冷冻干燥为，先于-45℃～-25℃下保温1～2小时；然后调节压强为20pa～25pa，并调节温度至-25℃～-15℃，保温5～7小时；最后调节温度至0℃，保温4～6小时。技术总结本发明属于医用生物材料技术领域，特别涉及一种基于生物基质脱细胞制备生物补片的方法，取小肠粘膜下层清洗，滤干后，使用抗生素和过氧乙酸进行细菌和病毒的灭活处理，再进行溶胀和冻融处理，然后通过含锌离子的表面活性剂溶液对小肠粘膜下层进行脱细胞处理，不仅具有较高的脱细胞效率，并且较好地避免了表面活性物质对基质的胶原多孔结构的损伤，而且由于无需专门对小肠粘膜下层基质进行保护性处理，也使生物补片的整个制备工序更为简单。技术研发人员：张金童,张鹏,刘鹏飞受保护的技术使用者：江苏博朗森思医疗器械有限公司技术研发日：技术公布日：2024/8/16