一种富含细胞因子的血小板裂解物生物凝胶的制

本发明涉及生物制剂，具体涉及一种富含高浓度细胞因子的血小板裂解物（hpl）生物凝胶的制备方法及其应用。背景技术：1、血小板是一种存在于血液中的无细胞核结构的细胞，具有复杂的生物学行为和功能。血小板不仅参与止血、血栓性疾病和出血性疾病，还参与宿主防御、移植排斥、伤口愈合以及动脉粥样硬化的发病机制。血小板制剂在临床应用中非常广泛，如prp注射、干细胞添加剂和制备血小板凝胶等。这些制剂可以封闭创面、加速凝血止血、缩短手术时间、缓和炎症、减轻疼痛、促进组织再生修复。血小板中含有大量细胞因子，如血小板原性生长因子(pdgf)、转化生长因子(tgf)、血管内皮生长因子(vegf)、胰岛素样生长因子(igf)、表皮生长因子(egf)和成纤维细胞生长因子(fgf)和脑源性神经营养因子(bdnf)、趋化因子、白介素类因子等。2、当前血小板裂解物的制备和临床应用存在个体差异大、制备过程缺乏标准化、细胞因子含量和活性低、产能和功能均具有局限性、临床应用效果存在差异性等缺陷。技术实现思路1、本发明目的在于：提供一种富含细胞因子的血小板裂解物凝胶的制备方法，采用透明质酸钠、胶原蛋白i型和外周血为原材料，以实现标准化制备、提高细胞因子浓度，达到临床应用的高质量生物制剂的要求。本发明同时提供上述制备方法所获得的富含细胞因子的血小板裂解物的凝胶制剂的应用方法。2、本发明是这样实现的：一种富含细胞因子的血小板裂解物的凝胶制剂的制备方法，包括以下步骤：3、s1制备富血小板血浆：抽取患者本人外周血的抗凝血40-50ml，加入含有与其等量的淋巴细胞分离液的离心管内，1500g离心15分钟，形成血浆和血小板层、淋巴细胞层、淋巴细胞分离液层、红细胞层5层梯度；取出血浆和血小板层、淋巴细胞层，400g离心10~15分钟，进一步浓缩富血小板血浆prp和分离血小板血浆组分，同时去除剩余红细胞，获得最佳浓度的富血小板血浆prp并放入超低温冰箱保存；4、s2制备人血小板裂解物：将步骤s1制备的prp从冰箱中取出，放入37℃水浴箱中解冻；完全解冻后，将prp放入液氮中冷冻1-2分钟，再投入37℃水浴箱中解冻；重复上述水浴完全解冻、液氮冷冻4~5个循环，使血小板激活和碎裂，释放出大量细胞因子和生长因子；将浓度为10%氯化钙溶液和制备的人血小板裂解物混装，室温条件下孵育10～15min，然后采用0.22μm过滤去除碎片和纤维蛋白成分，获得血小板裂解液，4～8℃保存；5、s3制备凝胶基质：称取1g透明质酸粉末，溶于80ml生理盐水中，使用转子进行搅拌，待透明质酸完全溶解后，用量筒定容至100ml，-4℃保存；称取1g胶原蛋白ⅰ型，溶于80ml生理盐水中，使用转子进行搅拌，待透明质酸完全溶解后，用量筒定容至100ml，-4℃保存；将定容透明质酸钠和定容胶原蛋白i型按照等比例混合，制备成凝胶基质；6、s4 生成生物凝胶：将前述制备好的凝胶基质与血小板裂解物混匀，进行冷冻干燥、钴60辐射灭菌，得到富含细胞因子的血小板裂解物的生物凝胶，其中血小板裂解物与定容透明质酸钠、定容胶原蛋白i型的重量比为1~5:1:1。7、优选地，步骤s4人血小板裂解物与定容透明质酸钠、定容胶原蛋白i型的重量比为5:1:1。8、优选地，本发明制备方法获得的富含细胞因子的血小板裂解物的凝胶制剂应用于prp注射。9、优选地，本发明制备方法获得的富含细胞因子的人血小板裂解物的凝胶制剂作为干细胞添加剂的应用。10、本发明的血小板裂解物生物凝胶制备方法具有以下优点：1. 采用透明质酸钠和胶原蛋白i型作为凝胶基质，具有良好的生物相容性和生物降解性，有利于细胞因子的释放、伤口愈合和组织再生。2. 利用患者本人外周血制备血小板裂解物，安全性高，制备成本低。3. 通过对人血小板裂解物（hpl）的制备方法进行优化，提高细胞因子浓度，有利于提高临床应用的效果。4. 整个制备过程标准化，有利于实现大规模生产和高品质生物制剂的要求。本发明适用于制备富含细胞因子的血小板裂解物生物凝胶，广泛应用于临床治疗领域，如改善薄型子宫内膜、创伤修复、组织再生、抗炎和疼痛缓解等。技术特征：1.一种富含细胞因子的血小板裂解物的凝胶制剂的制备方法，包括以下步骤：2.根据权利要求1所述的富含细胞因子的血小板裂解物的凝胶制剂的制备方法，其特征在于：步骤s4人血小板裂解物与定容透明质酸钠、定容胶原蛋白i型的重量比为5:1:1。3.权利要求1或2所述的制备方法获得的富含细胞因子的人血小板裂解物的凝胶制剂应用于prp注射。4.权利要求1或2所述的制备方法获得的富含细胞因子的人血小板裂解物的凝胶制剂作为干细胞添加剂的应用。技术总结本发明涉及一种富含细胞因子的血小板裂解物凝胶的制备方法及其应用。包括以下步骤：S1制备富血小板血浆；S2制备人血小板裂解物；S3制备凝胶基质；S4生成生物凝胶。本发明采用透明质酸钠、胶原蛋白I型和外周血为原材料，以实现标准化制备、提高细胞因子浓度，达到临床应用的高质量生物制剂的要求。所获得的富含细胞因子的血小板裂解物的凝胶制剂应用于PRP注射和做为干细胞添加剂。本发明制备的血小板裂解物生物凝胶具有良好的生物相容性和生物降解性，有利于细胞因子的释放、伤口愈合和组织再生；利用患者本人外周血制备血小板裂解物，安全性高，制备成本低，细胞因子浓度高；整个制备过程标准化有利于实现大规模生产。技术研发人员：孙铁成,王慧萍,杨丽雅,廉雪受保护的技术使用者：国家卫生健康委科学技术研究所技术研发日：技术公布日：2024/8/16