阿克吐米定的抗心肌缺血作用及在制备抗心肌缺

本发明属于药物作用机制分析方法和应用领域，具体涉及天然产物中单体化合物阿克吐米定抗心肌缺血作用及在制备抗心肌缺血药物中的应用。背景技术：1、心肌缺血是指心脏中血液灌注量减少，导致心脏供氧减少，进而导致心肌细胞能量代谢异常，不能支持心脏正常工作的病理状态。人们致力于揭示心肌缺血的发病机制，但是具体的机制仍然不清楚。到目前为止，明确的发病机制包括微血管功能障碍、痉挛、狭窄，可能的发病机制包括内皮功能障碍、血小板功能障碍、微栓塞、氧转运、能量底物、线粒体功能障碍、异常起源等。2、这些机制可能以单一方式或组合方式诱发心肌缺血。在临床上，治疗心肌缺血的常规药物包括β受体阻滞剂、有机硝酸盐、钙通道阻滞剂、阿司匹林和他汀类药物等。在不同病因导致的心肌缺血中，各种药物发挥的疗效也不尽相同，且药物长期使用时易产生耐受和众多副作用而导致效果受到一定的限制。因此，寻找更有效、低毒的替代药物对患者具有重要意义。3、但发现药物的作用机制通常都是一个复杂而困难的过程，因为药物可以在病毒感染的不同阶段和靶向不同的靶点发挥抗病毒作用，如可以通过影响病毒的吸附阻止病毒的进入，干扰病毒基因的表达，抑制病毒的dna合成，或抑制病毒的释放等等机制达到抗病毒的效果。4、网络药理学是一种借助于数据库在分子水平上来预测药物作用机制的一种方法。网络药理学可以通过目标分子所延伸出的分子网络、网络靶点等信息揭示生物系统与药物之间复杂的关系为生物活性物质的发现、机理研究以及新药的研发等领域提供了新的思路。前期许多药物均通过网络药理学揭示了其内在关联。5、阿克吐米定是从中药北豆根中提取的生物碱类化合物，研究表明，阿克吐米定具有抗氧化应激、抗炎等作用。6、文献cheng p,ma y b,yao s y,et al.two new alkaloids and active anti-hepatitis b virus constituents from hypserpa nitida[j].bioorg med chem lett,2007,17(19):5316-5320(程，马，姚世勇，等。海绵子中两种新生物碱及抗乙型肝炎病毒活性成分[j]。bioorg med chem lett，2007,17(19)：5316-5320)。该文献研究表明阿克吐米定对乙型肝炎表面抗原的产生有抑制作用。在以前的研究中wei j,fangl,liangx,etal.asensitive and selective uplc-ms/ms method for simultaneousdetermination of 10alkaloids from rhizoma menispermiin rat plasma and itsapplication to a pharmacokinetic study[j].talanta,2015,144:662-670.，大鼠口服北豆根提取物后，利用uplcms/ms技术对包括阿克吐米定在内的10种生物碱进行药动学比较研究，尽管阿克吐米定的剂量较低(16.73mg/kg)，但其总暴露量(auc)最高，这表明它可能比其他生物碱具有更大的药理和/或毒理意义。7、为进一步阐明北豆根生物碱抗心脑缺血缺氧的药效物质基础，采用mtt法初步探究包括阿克吐米定在内的6种单体生物碱对缺氧损伤的血管内皮细胞(ea.hy926)活力的影响。结果表明，6种单体生物碱对缺氧损伤ea.hy926血管内皮细胞均具有一定的保护作用，阿克吐米定的抗缺氧活性较强。综上，阿克吐米定可能具有抗心肌缺血作用，但具体作用及机制仍不清楚。技术实现思路1、根据以上技术问题，本发明提供阿克吐米定的抗心肌缺血作用及在制备抗心肌缺血药物中的应用，其特征在于所述阿克吐米定在制备心肌缺血药物中的作用；2、所述阿克吐米定为天然产物中单体化合物阿克吐米定；3、所述阿克吐米定在治疗心肌缺血功能及其并发症的药物应用。4、所述阿克吐米定在抗心肌缺血中的应用；5、所述阿克吐米定在抗心肌缺血药物中的应用；6、所述阿克吐米定在抗心肌缺血功能及其并发症的药物应用。7、所述阿克吐米定在治疗脑缺血及其并发症中的应用。8、所述阿克吐米定在抗心肌缺血中的作用机制为：阿克吐米定能够改善ogd诱导的h9c2心肌细胞凋亡情况，阿克吐米定对ogd诱导h9c2心肌细胞损伤具有保护作用。9、阿克吐米定在实验条件下对ogd(氧糖剥夺)诱导的h9c2心肌细胞凋亡具有显著的改善作用，其效果甚至超过了阳性对照药物维拉帕米。这表明阿克吐米定在保护心肌细胞免受损伤方面具有较高的潜力。10、ogd诱导的心肌细胞凋亡是心肌缺血的一个关键病理过程。阿克吐米定能够有效抑制这一过程，说明它在抗心肌缺血治疗中具有重要作用。11、所述阿克吐米定在抗心肌缺血中的机制为：阿克吐米定通过调节pi3k-akt、hif-1、ras信号通路，抑制氧化应激和细胞凋亡。12、调节pi3k-akt信号通路：阿克吐米定可以通过激活pi3k-akt信号通路，促进抗凋亡蛋白的表达，如bcl-2家族蛋白，从而抑制细胞凋亡。同时，pi3k-akt信号通路的激活还可以增加抗氧化酶的表达，减轻氧化应激。13、调节hif-1信号通路：缺氧是心肌缺血的一个关键特征。阿克吐米定可以通过激活hif-1信号通路，促使细胞产生适应性反应，如增加血管生成、提高能量代谢等，从而改善缺氧状态下的心肌功能。14、调节ras信号通路：阿克吐米定可以通过激活ras信号通路，进一步激活erk1/2和mek1/2，从而抑制氧化应激和细胞凋亡。15、所述阿克吐米定是存在于青风藤、夜花藤、北豆根等植物中的一种天然化合物，首次发现在不同植物中含有的本化合物的抗心肌缺血作用。16、所述药物为阿克吐米定及其同系物为有效成分制成的片剂、针剂、胶囊剂、缓释剂、控释剂、滴丸、颗粒剂等各种剂型中应用。17、阿克吐米定来源于天然产物，抗心肌缺血能力比常规临床使用抗心肌缺血的药物高，但毒副作用尚未发现，使用更加安全。18、所述阿克吐米定在抗心肌缺血中的机制分析方法为：19、s1、建立h9c2细胞氧糖剥夺(ogd)模型，测定阿克吐米定作用下的乳酸脱氢酶(ldh)外漏量和肌酸激酶(ck)释放量，测定氧化应激指标超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽(gsh)、丙二醛(mda)含量，形态学及流式细胞术观察细胞凋亡情况；20、s2、在数据库中获取阿克吐米定结构、心肌缺血疾病相关靶点，筛选主要靶点；21、s3、构建蛋白质-蛋白质相互作用(ppi)网络，获取关键靶点信息；22、s4、借助metascape数据库进行go富集分析和kegg功能富集分析，用cytoscape软件构建成分-靶点-通路网络；23、s5、对ppi网络中的关键靶点与阿克吐米定结构进行分子对接；24、s6、细胞实验表明，阿克吐米定能够显著升高sod和gsh活性，显著降低ldh、ck、mda含量，显著降低ogd细胞凋亡率；25、s7、网络药理学表明，阿克吐米定对心肌细胞缺血的保护作用与pi3k-akt、hif-1、ras信号通路有关，分子对接表明，阿克吐米定对mapk1、igf1、il2等靶标具有很高的结合力，最后得到结论，阿克吐米定通过调节pi3k-akt、hif-1、ras信号通路，抑制氧化应激和细胞凋亡，是治疗心肌缺血有前途的候选药物。26、所述步骤s3具体方法为：将所得的共同靶点导入数据库构建蛋白互作ppi网络，物种设为“homo sapiens”，并运用数据可视化软件，计算节点连接度，作为反映药理学网络中节点重要性的关键参数，“度”被用于筛选关键靶点；27、所述步骤s3通过构建ppi网络，运用数据库和数据可视化软件分析共同靶点的连接度，以筛选出关键药理学靶点，有助于进一步研究药物作用机制和潜在靶点，为药物研发提供重要参考。28、本发明旨在探讨阿克吐米定在治疗心肌缺血损伤中的作用及其分子机制。通过建立h9c2细胞氧糖剥夺(ogd)模型，测定阿克吐米定作用下的乳酸脱氢酶(ldh)外漏量和肌酸激酶(ck)释放量，测定氧化应激指标超氧化物歧化酶(sod)、谷胱甘肽(gsh)、丙二醛(mda)含量，形态学及流式细胞术观察细胞凋亡情况。29、结果表明，阿克吐米定能够显著升高sod和gsh活性，显著降低ldh、ck、mda含量，显著降低ogd细胞凋亡率。网络药理学分析显示，阿克吐米定对心肌细胞缺血的保护作用与pi3k-akt、hif-1、ras信号通路有关，分子对接表明，阿克吐米定对mapk1、igf1、il2等靶标具有很高的结合力。30、因此，阿克吐米定通过调节pi3k-akt、hif-1、ras信号通路，抑制氧化应激和细胞凋亡，是治疗心肌缺血有前途的候选药物。31、一、建立h9c2细胞ogd模型及阿克吐米定的作用32、1.1细胞培养：h9c2细胞培养于含有10％胎牛血清的dmem培养基中，37℃、5％co2条件下孵育。33、1.2氧糖剥夺(ogd)模型：细胞置于含有1％o2和5％co2的混合气体中培养，模拟心肌缺血状态。34、1.3实验分组及药物处理：将细胞分为对照组、ogd组和阿克吐米定处理组。阿克吐米定处理组细胞在ogd诱导前30分钟加入适量阿克吐米定，对照组和ogd组细胞加入等量生理盐水。35、1.4检测指标：测定ldh外漏量和ck释放量，以及sod、gsh、mda含量。流式细胞术观察细胞凋亡情况。36、二、网络药理学分析37、2.1获取阿克吐米定结构、心肌缺血疾病相关靶点，筛选主要靶点。38、2.2构建蛋白质-蛋白质相互作用(ppi)网络，获取关键靶点信息。39、2.3借助metascape数据库进行go富集分析和kegg功能富集分析，用cytoscape软件构建成分-靶点-通路网络。40、三、分子对接及关键靶点筛选41、3.1ppi网络中的关键靶点与阿克吐米定结构进行分子对接。42、3.2评估阿克吐米定与mapk1、igf1、il2等靶标的结合力。43、四、实验验证44、4.1细胞实验：验证阿克吐米定对ogd诱导的心肌细胞损伤的保护作用，包括ldh、ck、mda含量变化及细胞凋亡情况。45、五、通过上述实验得到结论46、通过实验验证及网络药理学分析，证实阿克吐米定通过调节pi3k-akt、hif-1、ras信号通路，抑制氧化应激和细胞凋亡，是治疗心肌缺血有前途的候选药物。本研究为临床治疗心肌缺血提供了新的药物选择和研究思路。47、阿克吐米定是存在于青风藤、夜花藤、北豆根等植物中的一种天然化合物，首次发现在不同植物中含有的本化合物的抗心肌缺血作用。相较于常规的抗心肌缺血药物，阿克吐米定的抗心肌缺血能力比常规临床使用抗心肌缺血的药物高，但毒副作用尚未发现，使用更加安全。48、阿克吐米定的发现，为我们提供了一种新的治疗心肌缺血的途径。这种天然化合物的存在，使得植物的药效得以科学验证，也为我国的中医药研究提供了新的科研方向。与此同时，阿克吐米定及其同系物也被广泛应用于各种剂型中，如片剂、针剂、胶囊剂、缓释剂、控释剂、滴丸、颗粒剂等。49、这些剂型的研发，旨在让阿克吐米定的疗效得到更好的发挥，同时也为患者提供了更多的治疗选择。片剂、针剂、胶囊剂等常规剂型，使得阿克吐米定的抗心肌缺血作用能够在短时间内得到发挥；而缓释剂、控释剂、滴丸、颗粒剂等新型剂型，则能让药物在体内的作用更加持久，降低了患者的用药频率，提高了用药的便利性。50、总的来说，阿克吐米定作为一种天然抗心肌缺血药物，其疗效显著、安全性高，具有广泛的应用前景。随着科研的深入，我们有理由相信，未来阿克吐米定及其同系物在心血管疾病的治疗中，将会发挥更大的作用。51、抗心肌缺血药物是指用于预防和减轻心肌缺血的药物，它们通过扩张冠状动脉、增加心肌血流、减少心肌耗氧量或调节心脏功能等途径来减轻心肌缺血的症状；治疗心肌缺血药物是指用于治疗已经发生的心肌缺血的药物，它们主要通过改善心肌供血、增加氧供、减少心肌损伤等途径来治疗心肌缺血引起的症状和病理变化；52、阿克吐米定在治疗心肌缺血和抗心肌缺血方面均表现出显著的功效，因此，该化合物既可以应用于治疗心肌缺血的药物中，也可以应用于抗心肌缺血的药物中。53、阿克吐米定具有以下作用：54、扩张冠状动脉：阿克吐米定能够通过扩张冠状动脉，增加心肌的氧供量，从而缓解心肌缺血。55、抗心肌缺氧：阿克吐米定具有抗缺氧作用，能够降低心肌对氧的需求，提高心肌对缺氧的耐受性。56、抗心肌细胞凋亡：阿克吐米定可以抑制心肌细胞的凋亡，减少心肌损伤。57、抗氧化作用：阿克吐米定具有清除自由基的作用，减轻心肌氧化应激。58、抗炎作用：阿克吐米定可以抑制炎症因子的释放，减轻心肌炎症反应。59、本发明的有益效果为：本发明提出并证实了阿克吐米定可通过抗氧化应激和抗凋亡减轻心肌缺血损伤。阿克吐米定可能通过调节pi3k-akt、hif-1、ras信号通路来保护心脏功能，是治疗心肌缺血的有前途的候选药物。阿克吐米定能够显著升高sod和gsh活性，显著降低mda含量。阿克吐米定对ogd诱导心肌缺血损伤的保护作用是通过抗氧化应激和抗凋亡介导的。阿克吐米定来源于天然产物，抗心肌缺血能力比常规临床使用抗心肌缺血的药物高，但毒副作用尚未发现，使用更加安全。60、通过本发明得知阿克吐米定在心肌缺血治疗中的作用与其对细胞内信号通路的调控密切相关。pi3k-akt、hif-1和ras信号通路在心肌细胞生存、增殖和分化中起着关键作用。阿克吐米定可能通过激活这些信号通路，从而减轻心肌细胞的氧化应激和凋亡，达到保护心脏功能的目的。61、此外，阿克吐米定的抗氧化应激和抗凋亡作用在体内外实验中得到了广泛证实。实验结果显示，阿克吐米定能够显著提高超氧化物歧化酶(sod)和谷胱甘肽(gsh)的活性，降低丙二醛(mda)的含量。这些生物化学指标的变化表明，阿克吐米定具有显著的抗氧化作用，能够有效减轻心肌细胞的氧化应激。62、阿克吐米定对ogd诱导的心肌缺血损伤具有显著的保护作用。ogd是一种常见的诱导心肌缺血的实验模型，通过模拟缺氧和能量代谢障碍等生理条件，诱导心肌细胞发生损伤。阿克吐米定在这种模型中表现出良好的抗氧化应激和抗凋亡作用，从而减轻心肌细胞的损伤程度。63、本发明的研究成果为心肌缺血的治疗提供了新的思路。阿克吐米定作为一种具有心脏保护作用的候选药物，有望在未来临床试验中取得良好效果。同时，本研究还为相关领域的研究者提供了有益的启示，即通过调控信号通路和抗氧化应激途径来开发新型心肌缺血治疗药物。64、总之，本发明揭示了阿克吐米定在治疗心肌缺血方面的潜力，为临床研究和药物开发提供了重要依据。在未来，更多关于阿克吐米定的研究将有助于拓展心肌缺血、脑缺血治疗领域的研究视野，为患者提供更有效的治疗手段。