用于治疗CD1a阳性癌症的CART细胞的制作方法

本发明提供用于治疗cd1a阳性癌症例如t细胞急性淋巴母细胞白血病和t细胞淋巴母细胞性淋巴瘤的疗法。特别地，本发明提供了可以靶向cd1a的嵌合抗原受体(chimericantigen receptor，car)t细胞。背景技术：1、t细胞系急性淋巴母细胞白血病(t-cell lineage acute lymphoblasticleukemia，t-all)是一种由胸腺t细胞前体的白血病性转化引起的恶性疾病1。t-all具有表型和遗传异质性，并且通常与涉及造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitorcell，hspc)稳态和t细胞发育的主要调节因子的转录因子的遗传改变/突变相关2。t-all在儿童和成人中诊断出的所有急性白血病中分别占10％至15％和20％至25％3,4，中位诊断年龄为9岁5-7。强化化疗方案提高了t-all患者的生存率。然而，无事件生存率(event-freesurvival，efs)和总生存率(overall survival，os)仍然＜70％，并且复发性/难治性(relapsed/refractory，r/r)t-all的结局特别差。除了造血细胞移植和常规化疗之外，目前没有潜在的治疗选择，这与对毒性的巨大权衡相关4,8，从而强化了对新型靶向治疗的需求。t细胞淋巴母细胞性淋巴瘤(t-cell lymphoblastic lymphoma，tcl)在病因和致病性上与t-all不同，但在表型上非常相似。主要区别在于tcl存在于髓外，而t-all是一种骨髓疾病。2、免疫疗法在癌症治疗中产生了前所未有的期望，并依赖作为对抗癌症的有力武器的免疫系统。近年来，基于嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，car)的过继细胞免疫治疗显示出巨大的潜力。car疗法将转基因t细胞重新定向，以独立于主要组织相容性复合物的方式特异性识别和消除表达特定抗原的肿瘤细胞9,10。现在car t细胞(car t-cell，cart)重新定向于cd19或cd22的成功对于b细胞恶性肿瘤(主要是b-all)来说是无可争议的11-14。但是，由于cart和t系肿瘤细胞之间靶抗原的共同表达，使用cart靶向t细胞恶性肿瘤的策略仍然具有挑战性。在这方面，针对泛t细胞抗原的cart具有两个主要缺点：i)cart自我靶向/相残(fratricide)，和ii)t细胞发育不全，导致危及生命的免疫缺陷15-17。3、最近的研究表明，用表达最多的泛t细胞抗原cd7、cd3、cd5或tcr car转导的t细胞在体外有效消除t-all原始细胞(blast)，并能够在体内控制疾病15-20。然而，在car转导之前，还需要使用诸如crispr/cas9基因组编辑或蛋白质表达阻断剂等离临床还很远的方法来破坏t细胞中的靶抗原，以避免广泛的自身抗原驱动的相残15-17,19。4、因此，仍然需要能够成功治疗t-all的疗法。本发明旨在提供一种治疗cd1a阳性t-all的疗法。技术实现思路1、对我们希望重定向t细胞所针对的抗原的选择代表了解决与正常和恶性t细胞之间t细胞标志物的共同表达相关的问题的重大进步。我们证明了脂质呈递分子cd1a是治疗t-all一大亚类(即皮质t-all)的合适靶点。2、我们开发并在功能上表征了cd1a特异性cart，其在异种移植模型中在体外和体内均对t-all细胞系和原发性皮质cd1a+t-all细胞显示出强大的细胞毒性。cd1a cart持续扩增200倍，类似于空白t细胞，从而验证了将cart重定向到cd1a抗原不会诱导t细胞相残。此外，将cd1a cart用于皮质t-all绕过了作为避免自身抗原驱动的相残的策略的在car转导之前对t细胞中靶抗原进行复杂的基于基因组编辑的破坏的需要15-17,19。我们进一步证明，在稳态造血中，cd1a仅在皮质cd34+cd7+胸腺t祖细胞的一个亚类中表达，而早期的cd34高cd7高t祖细胞缺乏cd1a。此外，在个体发育过程中，来自多种组织的正常cd34+hspc和成熟t细胞都不表达cd1a，从而最大限度地降低了中靶/脱瘤(on-target/off-tumor)的毒性的风险。事实上，当人类胎儿胸腺衍生的cd7+胸腺细胞暴露于cd1a cart时，只有cd1a+皮质胸腺细胞被cd1a cart消除，而发育较早和较晚的胸腺t系群体(cd34+和cd34-)不被靶向，这将中靶/脱瘤效应限制在皮质胸腺细胞的发育瞬态胸腺群，并进一步证实了cd1a cart的抗相残性。3、皮质胸腺细胞独特的胸腺定位，以及在生理上/不断成熟为功能性t细胞的cd34+cd7+cd1a-t细胞祖细胞的胸腺亚群位于cd1a+皮质胸腺细胞的上游这一事实，为在r/r t-all患者中使用cd1a cart提供了额外的安全水平。我们预计cd1a cart不会导致不可逆的毒性或严重的t细胞发育不全，原因如下：i)cd1a+胸腺细胞群是短暂的胸腺t细胞部分，最终由上游cd1a-t细胞祖细胞再生；ii)cd1a cart本身对病毒抗原有正常反应，因此可能针对病原体具有保护性；iii)针对cd5或cd7的特异性抗体的临床使用42没有显示出严重或不可逆的毒性；iv)有多项研究验证了t细胞的胸腺外成熟以及先天免疫系统和适应性免疫系统之间的平衡，这至少可以部分保证了经历过部分或全部胸腺切除术的患者的免疫保护45-47。4、因此，一方面，本发明提供了一种嵌合抗原受体(car)，其包含含有cd1a靶向部分的胞外结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。5、本发明还提供了编码本发明的car的核酸。此外，本发明提供了包含本发明的核酸和/或car的细胞。并且，本发明提供了包含多个根据本发明的细胞和药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。6、提供了本发明的细胞或本发明的药物组合物用作药物。特别地，本发明提供了一种治疗cd1a阳性癌症的方法，该方法包括向有需要的患者施用本发明的细胞或本发明的药物组合物。技术特征：1.cd1a阴性同种异体耐受t细胞在制备用于治疗cd1a阳性癌症的药物中的用途，所述cd1a阴性同种异体耐受t细胞包含编码嵌合抗原受体(car)的核酸，所述嵌合抗原受体(car)包含：2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述跨膜结构域包含cd28、cd3、cd45、cd4、cd8、cd9、cd16、cd22、cd33、cd37、cd64、cd80、cd86、cd134、cd137或cd154的跨膜结构域。3.根据权利要求2所述的用途，其中，所述跨膜结构域包含cd8的跨膜结构域。4.根据权利要求1所述的用途，其中，所述胞内信号传导结构域包含cd3ζ、fcrγ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b或cd66b的胞内结构域。5.根据权利要求4所述的用途，其中，所述胞内信号传导结构域包含cd3ζ的胞内结构域。6.根据权利要求1所述的用途，其中，所述car进一步包含共刺激信号传导结构域。7.根据权利要求6所述的用途，其中，所述共刺激信号传导结构域包含cd27、cd28、cd137、cd134、cd30、cd40、淋巴细胞功能相关抗原-1(lfa-1)、cd2、cd7、light、nkg2c、cd278或cd276的胞内结构域。8.根据权利要求7所述的用途，其中，所述共刺激信号传导结构域包含cd137的胞内结构域。9.根据权利要求1-8中任一项所述的用途，其中，所述cd1a阳性癌症是皮质t细胞急性淋巴母细胞白血病。10.根据权利要求9所述的用途，其中，所述cd1a阳性癌症是复发性/难治性皮质t细胞急性淋巴母细胞白血病。11.根据权利要求1-8中任一项所述的用途，其中，所述cd1a阳性癌症是cd1a+t细胞淋巴母细胞性淋巴瘤。12.根据权利要求11所述的用途，其中，所述cd1a阳性癌症是复发性/难治性cd1a+t细胞淋巴母细胞性淋巴瘤。13.药物组合物在制备用于治疗cd1a阳性癌症的药物中的用途，所述药物组合物包含多个如前述权利要求中任一项所定义的cd1a阴性同种异体耐受t细胞和药学上可接受的载体或稀释剂。14.根据权利要求13所述的用途，其中，所述cd1a阳性癌症是皮质t细胞急性淋巴母细胞白血病。15.根据权利要求14所述的用途，其中，所述cd1a阳性癌症是复发性/难治性皮质t细胞急性淋巴母细胞白血病。16.根据权利要求13所述的用途，其中，所述cd1a阳性癌症是cd1a+t细胞淋巴母细胞性淋巴瘤。17.根据权利要求16所述的用途，其中，所述cd1a阳性癌症是复发性/难治性cd1a+t细胞淋巴母细胞性淋巴瘤。技术总结复发性/难治性T细胞急性淋巴母细胞白血病(T‑ALL)具有令人沮丧的结局，并且没有针对T‑ALL的有效的靶向免疫疗法。嵌合抗原受体T细胞(CART)向T‑ALL的拓展仍然具有挑战性，因为CART和T‑ALL原始细胞之间靶抗原的共同表达导致CART相残。CD1a仅在T‑ALL的一个主要亚类皮质T‑ALL中表达。CD1a的表达仅限于皮质胸腺细胞，CD34+祖细胞和T细胞在个体发育过程中都不表达CD1a，从而限制了靶向/非肿瘤毒性的风险。本发明提供包含可被转导或转化到T细胞中的CD1a靶向部分的CAR。由此产生的CART适用于皮质T‑ALL的治疗。技术研发人员：巴布罗·梅内德斯·布扬,迭戈·桑切斯·马丁内斯,克拉拉·布埃诺·乌鲁兹,弗朗西斯科·古铁雷斯·阿古埃拉,海莉亚·洛卡-霍受保护的技术使用者：约瑟夫卡雷拉斯白血病研究基金会（IJC）技术研发日：技术公布日：2024/8/15