信使RNA疫苗及其用途的制作方法

背景技术：1、疫苗是治疗或预防各种疾病的最重要药物之一。疫苗是一种诱导针对特定疾病的主动获得性免疫的生物学组合物。传统上，疫苗通常含有类似于致病性微生物的试剂，并且通常由病毒或其他微生物或者它们的表面蛋白的弱化或杀死形式制成。所述试剂刺激人体的免疫系统，以产生抗体或细胞因子，所述抗体或细胞因子识别和破坏将来可能遇到的与该试剂相关联的任何微生物。疫苗可以是预防性的或治疗性的。技术实现思路1、本发明提供了一种基于信使rna递送的改进的和非常规形式的疫苗，所述疫苗有望成为用于治疗和预防各种疾病的更安全、更有效和更具成本效益的疫苗。2、在一个方面，本发明提供了一种用于诱导体内免疫应答的方法，所述方法以足以诱导抗原特异性t细胞应答和/或抗原特异性抗体应答的给药方案，通过将包含编码抗原的mrna的信使rna(mrna)组合物施用于受试者来进行。在一些实施方案中，mrna被包封于脂质纳米颗粒(lnp)中。在一些实施方案中，组合物是疫苗组合物。3、在一些实施方案中，组合物是皮下施用的。在一些实施方案中，组合物是皮内施用的。在一些实施方案中，组合物是肌肉内施用的。在一些实施方案中，组合物是静脉内施用的。在一些实施方案中，组合物不是静脉内施用的。4、在另一个方面，本发明提供了一种在体内递送疫苗的方法，所述方法包括将包封于lnp中的包含编码抗原的mrna的疫苗组合物施用于受试者，并且其中所述疫苗组合物通过肌肉内或皮下施用。在多个实施方案中，疫苗组合物以足以诱导抗原特异性t细胞应答和/或抗原特异性抗体应答的给药方案施用。5、在一些实施方案中，由mrna编码的抗原是蛋白质或肽。6、在一些实施方案中，包含编码一种或多种多肽的一种或多于一种mrna的组合物得以递送。7、在一些实施方案中，合适的给药方案包括注射单剂量。在一些实施方案中，合适的给药方案包括定期施用多剂量。8、在一些实施方案中，单剂量或多剂量(单独或共同)的范围为约0.1μg-100mgmrna。在一些实施方案中，单剂量或多剂量(单独或共同)的范围为约0.1μg-50mg mrna、约0.1μg-25mg mrna、约0.1μg-10mg mrna、约0.1μg-5mg mrna、约0.1μg-1mg mrna或约0.1μg-100μgmrna。在一些实施方案中，单剂量为或者多剂量(单独或共同)选自0.1μg、0.3μg、0.5μg、1μg、5μg、10μg、25μg、50μg或100μg。9、在一些实施方案中，单剂量或多剂量(单独或共同)的范围为约0.01μg/kg-10mg/kg(mrna/体重)。在一些实施方案中，单剂量或多剂量(单独或共同)的范围为约0.01μg/kg-8mg/kg、约0.01μg/kg-6mg/kg、约0.01μg/kg-5mg/kg、约0.1μg/kg-5mg/kg、约0.1μg/kg-1mg/kg或约0.1μg/kg-0.5mg/kg(mrna/体重)。10、在一些实施方案中，多剂量包含相同的单独剂量的mrna。在一些实施方案中，多剂量包含不同的单独剂量的mrna。11、在一些实施方案中，多剂量中的每剂间隔1-3周注射一次。在一些实施方案中，多剂量中的每剂每周注射一次。在一些实施方案中，多剂量中的至少两剂在3周内注射。在一些实施方案中，多剂量按以下排程注射：在第0周施用第1剂，在第3周施用第2剂，以及在第5周施用第3剂。12、在一些实施方案中，mrna的长度为或大于约0.5kb、1kb、1.5kb、2kb、2.5kb、3kb、3.5kb、4kb、4.5kb、5kb、6kb、7kb、8kb、9kb、10kb、11kb、12kb、13kb、14kb或15kb。在一些实施方案中，mrna包含未经修饰的核苷酸。在一些实施方案中，mrna包含一种或多种经修饰的核苷酸。在一些实施方案中，一种或多种经修饰的核苷酸包含假尿苷、n-1-甲基-假尿苷、2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷、c-5丙炔基-胞苷、c-5丙炔基-尿苷、2-氨基腺苷、c5-溴尿苷、c5-氟尿苷、c5-碘尿苷、c5-丙炔基-尿苷、c5-丙炔基-胞苷、c5-甲基胞苷、2-氨基腺苷、7-脱氮腺苷、7-脱氮鸟苷、8-氧代腺苷、8-氧代鸟苷、o(6)-甲基鸟嘌呤、4’-硫代尿苷、4’-硫胞苷和/或2-硫代胞苷。13、在一些实施方案中，mrna包含5’非翻译区(5’utr)和/或3’非翻译区(3’utr)。14、在一些实施方案中，纳米颗粒是基于脂质的或基于聚合物的纳米颗粒。在一些实施方案中，基于脂质的纳米颗粒是脂质体。在一些实施方案中，脂质纳米颗粒包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种辅助脂质和/或一种或多种peg化的脂质。在一些实施方案中，脂质纳米颗粒包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种辅助脂质和一种或多种peg化的脂质。在一些实施方案中，脂质纳米颗粒包含一种或多种阳离子脂质、一种或多种辅助脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质和一种或多种peg化的脂质。如本文所用，术语“peg化的脂质”和“peg修饰的脂质”可互换使用。15、在一些实施方案中，脂质纳米颗粒包含一种或多种peg化的脂质。在一些实施方案中，peg化的脂质占脂质纳米颗粒中的总脂质的至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少7％、至少8％、至少9％或至少10％。在一些实施方案中，peg化的脂质占脂质纳米颗粒中的总脂质的至少5％。在一些实施方案中，peg化的脂质占脂质纳米颗粒中的总脂质的约5％。在一些实施方案中，peg化的脂质占脂质纳米颗粒中的总脂质的10％或更少、9％或更少、8％或更少、7％或更少、6％或更少、5％或更少、4％或更少或者3％或更少。在一些实施方案中，peg化的脂质占脂质纳米颗粒中的总脂质的5％或更少。16、在一些实施方案中，脂质纳米颗粒包含一种或多种阳离子脂质。在一些实施方案中，一种或多种阳离子脂质选自由以下各项组成的组：ckk-e12、of-02、c12-200、mc3、dlindma、dlinkc2dma、ice(基于咪唑)、hgt5000、hgt5001、hgt4003、dodac、ddab、dmrie、dospa、dogs、dodap、dodma和dmdma、dodac、dlendma、dmrie、clindma、cplindma、dmoba、docarbdap、dlindap、dlincarbdap、dlincdap、klin-k-dma、dlin-k-xtc2-dma、3-(4-(双(2-羟基十二烷基)氨基)丁基)-6-(4-((2-羟基十二烷基)(2-羟基十一烷基)氨基)丁基)-1,4-二噁烷-2,5-二酮(靶标23)、3-(5-(双(2-羟基十二烷基)氨基)戊-2-基)-6-(5-((2-羟基十二烷基)(2-羟基十一烷基)氨基)戊-2-基)-1,4-二噁烷-2,5-二酮(靶标24)以及它们的组合。在一些实施方案中、至少一种阳离子脂质选自ccbene、ice、ml-2、c12-200或dlin-ss-dma。在一些实施方案中，一种或多种阳离子脂质包括ice。在一些实施方案中，一种或多种阳离子脂质包括ml-2。在一些实施方案中，一种或多种阳离子脂质包括ccbene。17、在一些实施方案中，脂质纳米颗粒包含一种或多种辅助脂质。在一些实施方案中，辅助脂质选自dspc(1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)、dppc(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)、dope(1,2-二油烯基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、dopc(1,2-二油烯基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱)、dppe(1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、dmpe(1,2-二豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、dopg(1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1'-rac-甘油))。18、在一些实施方案中，脂质纳米颗粒包含一种或多种基于胆固醇的脂质。在一些实施方案中，基于胆固醇的脂质选自dc-choi(n,n-二甲基-n-乙基羧酰胺基胆固醇)、1,4-双(3-n-油烯基氨基-丙基)哌嗪(gao,等人.biochem.biophys.res.comm.179,280(1991)；wolf等人.biotechniques23,139(1997)；美国专利号5,744,335)或ice。19、在一些实施方案中，组合物的施用引起由mrna编码的抗原在受试者的淋巴结中表达。在一些实施方案中，组合物的施用引起由mrna编码的抗原在受试者的淋巴细胞中表达。20、在一些实施方案中，组合物的施用引起抗原特异性抗体应答。在一些实施方案中，抗原特异性抗体应答通过抗原特异性抗体在血清中的存在来测量。21、在一些实施方案中，组合物的施用引起抗原特异性t细胞应答。在一些实施方案中，抗原特异性t细胞应答通过细胞因子应答来测量。在一些实施方案中，抗原特异性t细胞应答通过脾细胞中的ifn-γelispot来测量。22、在一些实施方案中，抗原特异性抗体应答和/或抗原特异性t细胞应答在施用后至少24小时、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、4周或1个月可检测。23、本发明的一个方面提供了一种治疗疾病、障碍或病症的方法，所述方法包括根据上文所述的方法将信使rna(mrna)递送至需要治疗的受试者。24、在本技术中，除非另有说明，否则“或”的使用意指“和/或”。如本公开中所用，术语“包括”以及该术语的变化形式，诸如“包含”(“comprising”和“comprises”)，并不旨在排除其他添加物、组分、整数或步骤。如本专利申请中使用的，术语“约”和“大约”作为等价物使用。这两个术语均旨在涵盖相关领域的普通技术人员所理解的任何正常波动。25、在下述详细描述、附图和权利要求书中，本发明的其他特征、目的和优点是显而易见的。然而，应理解，详细描述、附图和权利要求书虽然指出了本发明的实施方案，但仅以说明性方式而非限制性方式给出。在本发明的范围内的各种变化和修改对于所属领域的技术人员将变得显而易见。