一种负载氯己定的PAMAM-多肽复合物及其制备方法

本发明涉及pamam复合物的，具体涉及一种负载氯己定的pamam-多肽复合物及其制备方法、应用。背景技术：1、聚酰胺-胺树枝状聚合物(pamam)由tomalia等首次通过发散法合成，由引发核向外逐步发生聚合反应，每循环一个反应在已形成的聚合物上增加1层(layer)或1代(generation,g)，从而形成不同代数的树枝状聚合物，记为g1、g2等。从g4开始分子呈现球形结构，内部出现疏水空腔。pamam表面基团易于改性，通常可以连接带正电荷的-nh2、带负电荷的-cooh和中性的-oh，结构精确可操控，因此被称为“人工蛋白”。在实际应用中，可通过调控合成条件制备出无毒、生物相容性好、易于结合牙本质胶原基质的聚合物分子。2、pamam可用于诱导脱矿牙本质的仿生矿化，在以往的研究中发现pamam树枝状大分子可以自组装成类似于釉原蛋白自组装过程中的微带状(micro-ribbon)结构，与暴露的胶原纤维紧密结合，然后吸引并稳定人工唾液中形成的acp，使acp以类似自然状态的有序方式形成羟基磷灰石，发生分级化纤维内矿化。进一步地，pamam树枝状大分子的空腔还提供了一个理想的药物载体。g4以上的pamam球形分子具备疏水性空腔，小分子量的药物，视其水溶性或解离特性，可被负载于内部空腔或树枝状基团间。如果在pamam分子上负载抗基质金属蛋白酶(mmp)的药物，可起到抑制牙本质胶原纤维酶解破坏的作用。但pamam分子与牙本质的结合力尚不理想，使得pamam分子上负载的药物并不能充分发挥其效用。技术实现思路1、有鉴于此，本发明提供了一种负载氯己定的pamam-多肽复合物及其制备方法、应用，所述复合物能够与牙本质紧密结合，通过诱导牙本质矿化，抑制基质金属蛋白酶对牙周及牙本质胶原纤维的破坏，从而达到防龋的效果。2、为解决背景技术中提出的技术问题，本发明采用以下技术方案：3、第一方面，本发明中提供了一种负载氯己定的pamam-多肽复合物，所述复合物中：4、pamam与多肽的结合方式为共价结合，所述多肽为c11，c11的氨基酸序列为seq idno:1；5、所述pamam为4代pamam或5代pamam，所述pamam的表面基团包括羧基；6、且所述复合物还负载了氯己定。7、进一步地，所述多肽c11的氨基酸序列为(n端到c端)stdktkreevd。8、进一步地，所述复合物负载所述氯己定的结合方式为物理结合，所述氯己定负载于所述复合物的疏水性空腔中。9、进一步地，所述pamam为4代pamam时，所述4代pamam与多肽c11的摩尔比为1:16～1:32；所述pamam为5代pamam时，所述5代pamam与多肽c11的摩尔比为1:64～1:96。10、进一步地，所述氯己定为醋酸氯己定或葡萄糖酸氯己定中的任意一种。11、第二方面，本发明提供了所述的复合物的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：12、提供所述pamam和所述多肽c11，将所述pamam和所述多肽c11配置成溶液，将pamam溶液和多肽c11溶液充分混合进行反应，反应结束后得到pamam-多肽复合物；13、将pamam-多肽复合物配制成pamam-多肽溶液，将氯己定加入所述pamam-多肽溶液中，充分混合进行反应，反应结束后得到负载氯己定的pamam-多肽复合物。14、进一步地，所述氯己定以醋酸氯己定或葡萄糖酸氯己定的形式加入到所述pamam-多肽溶液中。15、进一步地，所述pamam-多肽溶液的浓度为5mg/ml～20mg/ml。16、进一步地，将氯己定加入所述pamam-多肽溶液中后，震荡12～48h，然后离心，取上清液透析冷冻干燥，得到所述负载氯己定的pamam-多肽复合物。17、进一步地，制备所述pamam-多肽复合物的方法包括以下步骤：18、将所述pamam溶于缓冲液中得到pamam溶液，按照摩尔比将n-羟基丁二酰亚胺加入所述pamam溶液中；再加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐，充分混合进行反应，然后过滤去除副产物，取上清液透析，冷冻干燥，得到pamam-nhs；19、将所述pamam-nhs溶于缓冲液中得到pamam-nhs溶液；将所述多肽c11溶于缓冲液中得到多肽c11溶液；20、将所述多肽c11溶液加入所述pamam-nhs溶液中充分混合进行反应，反应结束后透析、冷冻干燥，得到所述pamam-多肽复合物。21、第三方面，本发明中提供了如上所述的负载氯己定的pamam-多肽复合物或根据如上所述的制备方法而制得的负载氯己定的pamam-多肽复合物在制备用于预防龋病和/或减轻龋病的产品中的应用。22、第四方面，本发明中提供了一种用于预防龋病和/或减轻龋病的药物，所述药物中包括如上所述的负载氯己定的pamam-多肽复合物；以及药学上可接受的载体。23、本发明的上述技术方案的有益效果如下：24、本发明提供了一种负载氯己定的pamam-多肽复合物，所述复合物中pamam与多肽的结合方式为共价结合，所述多肽为c11，c11的氨基酸序列为seq id no:1；所述pamam为4代pamam或5代pamam，所述pamam的表面基团包括羧基；且所述复合物还负载了氯己定。25、本发明中提供了一种包括多肽c11、pamam和氯己定的复合物，并首次将所述复合物应用在牙本质领域，用于预防龋病和/或减轻龋病。进一步地，本发明所述复合物中，多肽与pamam的结合方式为共价连接，相比于将多肽是包覆在pamam的空腔中(会经透析释放)，本发明中的多肽不会经透析去除，能够保持复合物与牙本质的结合力；而氯己定与pamam的结合方式是包覆在空腔中，静电结合，会逐渐释放发挥作用。技术特征：1.一种负载氯己定的pamam-多肽复合物，其特征在于，所述复合物中：2.根据权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述复合物负载所述氯己定的结合方式为物理结合，所述氯己定负载于所述复合物的疏水性空腔中。3.根据权利要求1所述的复合物，其特征在于，所述pamam为4代pamam时，所述4代pamam与多肽c11的摩尔比为1:16～1:32；4.根据权利要求2所述的复合物，其特征在于，所述氯己定为醋酸氯己定或葡萄糖酸氯己定中的任意一种。5.权利要求1～4中任一项所述的复合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述氯己定以醋酸氯己定或葡萄糖酸氯己定的形式加入到所述pamam-多肽溶液中；和/或7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，制备所述pamam-多肽复合物的方法包括以下步骤：8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，将所述pamam溶于ph 5～6的缓冲液中得到pamam溶液，所述pamam溶液的浓度为0.5～10mmol/l；和/或9.根据权利要求1至4任一项所述的负载氯己定的pamam-多肽复合物或根据权利要求5至8任一项所述的制备方法而制得的负载氯己定的pamam-多肽复合物在制备用于预防龋病和/或减轻龋病的产品中的应用。10.一种用于预防龋病和/或减轻龋病的药物，其特征在于，所述药物中包括权利要求1至4任一项所述的负载氯己定的pamam-多肽复合物；以及药学上可接受的载体。技术总结本发明提供一种负载氯己定的PAMAM‑多肽复合物及其制备方法、应用，所述复合物中PAMAM与多肽的结合方式为共价结合，所述多肽为C11，C11的氨基酸序列为SEQ ID NO:1；所述PAMAM为4代PAMAM或5代PAMAM，所述PAMAM的表面基团包括羧基；且所述复合物还负载了氯己定。本发明中提供了一种包括多肽C11、PAMAM和氯己定的复合物，并首次将所述复合物应用于牙本质，用于预防龋病和/或减轻龋病。技术研发人员：蔡雪,王晓燕受保护的技术使用者：北京大学口腔医学院技术研发日：技术公布日：2024/8/15