构建肝细胞癌根治切除模型的外科系统的制作方

本发明属于肝细胞癌根治切除模型构建外科系统制造产业，特别涉及用于肝细胞癌根治切除模型、外科系统、构建方法及应用和mhcc-97h的用途。背景技术：1、肝细胞癌（以下简称“肝癌”）是世界范围内常见的恶性肿瘤之一，根治性手术治疗仍然是目前肝癌最有效的治愈性措施，但术后高复发、高转移制约整体疗效。研究肝癌根治术后复发转移的机制、治疗策略需要可靠的实验动物模型。2、目前，常用的肝癌动物模型制备方法主要包括诱癌剂诱导大鼠肝癌模型（如二乙基亚硝胺诱导肝癌模型、黄曲霉素 b1诱发大鼠肝癌模型）[1-2]和移植性小鼠肝癌模型（如人源性肿瘤异种移植模型）。然而，缺乏与临床“肝癌根治切除术”相应的动物实验模型，以用于术后复发转移、抗复发治疗决策等相关研究。3、1. 吴清洪，顾为望，程天明，等. 二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型的建立及其应用[j]. 动物医学进展，2001，22(3):50-51.4、2.段小娴，覃柳亮，覃国忠等.单剂量黄曲霉毒素b_1致大鼠肝癌作用的短期实验模型[j].癌症，1996，15(1):21-23.5、cn114403095a授权专利提供一种小鼠乳腺癌自发性淋巴结转移模型的建模方法，是以裸鼠作为建模动物，麻醉后暴露第4对乳头外侧髂下淋巴结，注入小鼠乳腺癌4t1细胞，接种后正常饲养2～3周，建模成功得到小鼠乳腺癌自发性淋巴结转移模型。但是于该发明为淋巴瘤模型无法用于肝癌的根治研究中。6、cn115299405a授权专利提供一种制作裸鼠移植瘤模型的方法，包括如下步骤：选择4～6周龄的裸鼠，在无菌条件下向其接种肿瘤细胞；种瘤后采用免疫抑制剂加速瘤体生长，其中免疫抑制剂的添加量为(1～2)mg/天/只；继续培养至少5天，即得裸鼠移植瘤模型。该发明方法需要使用免疫抑制剂方法复杂使用免疫抑制剂，干扰因素多模型实用性差。技术实现思路1、针对现有技术存在的问题本发明提供肝细胞癌根治切除模型构建的外科系统及其构建方法和应用。2、根据本发明技术的一方面，提供了一种用于肝细胞癌根治切除模型构建的外科系统，该肝细胞癌根治切除模型为裸鼠肝细胞癌根治切除模型，上述系统包含人肝癌细胞系mhcc-97h，上述肝细胞癌根治切除模型使用balb/c 雄性裸鼠。3、根据本发明技术的一方面，提供了一种肝细胞癌根治切除模型构建外科系统，在该系统中上述mhcc-97h细胞密度为5.0×107/ml。4、根据本发明技术的一方面，提供了一种肝细胞癌根治切除模型构建外科系统包含电凝刀。5、根据本发明技术的一方面，提供了一种肝细胞癌根治切除模型构建外科系统还包含显微外科镊、显微外科持针器、组织剪、1.0ml和2.5 ml规格的无菌注射器、灌胃针、无菌干棉球、无菌纱布、无菌外科手套、无菌换药碗，5-0/6-0无菌缝线。6、根据本发明技术的一方面，提供了一种人肝癌细胞系mhcc-97h的用途，其上述人肝癌细胞系mhcc-97h用于构建裸鼠肝细胞癌根治切除模型。7、根据本发明技术的一方面，提供了一种裸鼠肝细胞癌根治切除模型的构建方法，该裸鼠肝细胞癌根治切除模型使用选用4-6周龄balb/c 雄性裸鼠，使用人肝癌细胞系mhcc-97h，本方法步骤包括皮下成瘤、肝原位移植瘤种植和肝肿瘤根治切除。8、根据本发明技术的一方面，提供了裸鼠肝细胞癌根治切除模型的构建方法，上述皮下成瘤步包含如下步骤：9、步骤1，选取人mhcc-97h作为瘤源，调整mhcc-97h细胞密度为：5.0×107/ml肿瘤细胞悬液；10、步骤2，选取4-6周龄大的balb/c裸鼠用于构建皮下瘤模型，裸鼠部皮下注射200μl准备好的上述肿瘤细胞悬液。11、根据本发明技术的一方面，提供了裸鼠肝细胞癌根治切除模型的构建方法，上述肝原位移植瘤种植包含如下步骤：12、步骤1，裸鼠皮下瘤接种3-4周，待肿瘤生长至1.0-1.5cm时，将肿瘤组织从裸鼠皮下剥离，并去除皮下瘤表面的结缔组织；13、步骤2，将剥离好的肿瘤组织，修剪成大小为1.0×1.0×1.0 mm3大小的瘤块，作为肝原位移植瘤瘤源；14、步骤3，在裸鼠肝脏右叶做一长约0.8cm的窦道，上述瘤块置入窦道深处；15、步骤4，置入瘤块后，自然闭合或使用电凝刀或6-0 无菌丝线加固闭合窦道口。16、据本发明技术的一方面，提供了一种肝细胞癌根治切除模型，该根治切除模型使用上述裸鼠肝细胞癌根治切除模型的构建方法构建。17、据本发明技术的一方面，提供了一种肝细胞癌根治切除模型的应用，该肝细胞癌根治切除模型用于肝细胞癌根治切除术鉴定。可以用于研究肝癌术后复发转移、抗复发治疗决策、药物干预等方面。18、本发明利用人mhcc-97h肝癌细胞系，构建了“裸鼠肝细胞癌根治切除模型”，该模型术后8周肝脏复发率约为40.0%，可用于肝癌术后复发转移机制、药物干预相关研究。由于肝癌根治切除后，肝脏创面大，出血和胆漏等术后并发症多，围手术期裸鼠死亡率高。通过创新手术方式，实现无出血切肝、无胆漏切肝，手术时长大幅度缩短，术后并发症发生率和围手术期死亡率大幅降低。技术特征：1.用于肝细胞癌根治切除模型构建的外科系统，其特征在于，所述肝细胞癌根治切除模型为裸鼠肝细胞癌根治切除模型，所述系统包含人肝癌细胞系mhcc-97h，所述肝细胞癌根治切除模型使用balb/c 雄性裸鼠。2.根据权利要求1所述的肝细胞癌根治切除模型构建外科系统，其特征在于，所述mhcc-97h细胞密度为5.0×107/ml。3.根据权利要求2所述的肝细胞癌根治切除模型构建外科系统，其特征在于，所述外科系统包含电凝刀。4.根据权利要求3所述的肝细胞癌根治切除模型构建外科系统，其特征在于，所述外科系统还包含显微外科镊、显微外科持针器、组织剪、1.0ml和2.5 ml规格的无菌注射器、灌胃针、无菌干棉球、无菌纱布、无菌外科手套、无菌换药碗，5-0/6-0无菌缝线。5.一种人肝癌细胞系mhcc-97h的用途，其特征在于，所述人肝癌细胞系mhcc-97h用于构建裸鼠肝细胞癌根治切除模型。6.一种裸鼠肝细胞癌根治切除模型的构建方法，其特征在于，所述裸鼠肝细胞癌根治切除模型选用4-6周龄balb/c 雄性裸鼠，使用人肝癌细胞系mhcc-97h，所述方法步骤包括皮下成瘤、肝原位移植瘤种植和肝肿瘤根治切除。7.根据权利要求6所述的裸鼠肝细胞癌根治切除模型的构建方法，其特征在于，所述皮下成瘤步包含如下步骤：8.根据权利要求7所述的裸鼠肝细胞癌根治切除模型的构建方法，其特征在于，所述肝原位移植瘤种植包含如下步骤：9.一种肝细胞癌根治切除模型，其特征在于，所述肝细胞癌根治切除模型使用权利要求8所述方法构建。10.权利要求9所述肝细胞癌根治切除模型的应用，其特征在于，所述肝细胞癌根治切除模型用于肝细胞癌根治切除术鉴定。技术总结本发明技术提供了用于肝细胞癌根治切除模型构建的外科系统，该肝细胞癌根治切除模型为裸鼠肝细胞癌根治切除模型，系统包含人肝癌细胞系MHCC‑97H，使用的MHCC‑97H细胞密度为5.0×10