cGAMP在构建视网膜血管性疾病动物模型中的应用

本技术涉及生物医药领域，具体涉及一种cgamp在构建视网膜血管性疾病动物模型中的应用、动物模型及其模型构建方法。背景技术：1、视网膜血管性疾病(retinal vascular disease,rvd)是一类常见的眼底血管性病变，是眼科严重的致盲性疾病之一。视网膜血管性疾病引起的视网膜血管渗出，出血以及视网膜血管炎等严重影响患者视力，目前针对视网膜血管性疾病常用的治疗方法包括激光治疗，抗血管生成药物治疗以及手术治疗等。但是激光治疗可能引起视力减退、色觉异常等并发症，抗血管生成药物需要频繁眼内注射且治疗效果个体差异较大，所以目前针对视网膜血管性疾病缺乏相对有效的治疗措施。因此，寻找视网膜血管疾病治疗的新靶点在临床医学研究上有重要的意义。2、动物模型为寻找视网膜性血管疾病治疗的新靶点提供了便捷有效的手段，目前现有的比较成熟的模拟视网膜血管性疾病的动物模型有以下几种：链脲佐菌素(streptozotocin，stz)诱导的糖尿病小鼠模型，高氧诱导的早产婴儿视网膜病变(rop)等，但是这些方法普遍存在靶点不明确的问题。而且stz诱导的糖尿病小鼠模型造模周期较长(8-10周)；而rop模型是在小鼠出生后第七天开始造模，此时视网膜未发育完全，因此无法模拟成熟视网膜。本技术中，cgamp直接结合并激活下游sting信号，靶点明确；同时缩短造模时间，并可在新生和成年小鼠中进行。3、在经典cgas-sting信号转导过程中，异常暴露在细胞质的双链dna能够被cgas所识别，催化gtp和atp形成第二信使2’-3’-cgamp(简称cgamp)。cgamp进而结合位于内质网膜的受体蛋白二聚体即sting(stimulator of interferon genes，干扰素基因刺激蛋白)，从而启动sting二聚体构象变化并因此激活。随着sting蛋白沿内质网-内质网高尔基体中间体-高尔基体这个方向的转运，sting的羧基末端招募并激活tbk1(tank-binding kinase1,tank结合激酶)，使irf3(interferon regulatory factor 3，干扰素调节因子3)磷酸化，磷酸化的irf3二聚化并进入细胞核。sting也激活激酶ikk，使nf-κb(nuclear factor-kappa b，核因子κb)的抑制剂iκb家族磷酸化，磷酸化的iκb蛋白通过泛素-蛋白酶体途径被降解,此时nf-κb进入细胞核，与irf3等干扰素调节因子共同作用，诱导一型干扰素和炎性细胞因子如tnfβ、il-1β和il-6的表达。cgas-sting是一条关键的固有免疫信号通路，是响应组织损伤和病原体入侵的天然防线。但是在视网膜中，异常激活的cgas-sting信号可以引起炎性细胞因子的大量释放，免疫细胞的浸润，进而造成神经炎症。现已证实cgas-sting信号通路的异常激活与多种视网膜疾病如年龄相关性黄斑变性，糖尿病视网膜病变等相关。然而现有技术中并不知晓可以基于上述通路构建视网膜血管性疾病小鼠模型，更没有启示如何进行模型构建以及构建后的效果。4、有鉴于此，提出本技术。技术实现思路0、发明概述1、为解决上述技术问题，本技术发现cgamp眼内注射后视网膜出现明显的血液渗出、新生血管、淋巴细胞粘附血管以及强烈的血管炎等与视网膜血管性疾病发生、发展过程相似的病理现象，证实成功构建了视网膜血管性疾病动物模型，该模型可作为研究视网膜血管性疾病的工具。另外，该模型构建方法不仅缩短了造模时间，并可在成年动物中进行。因此，本技术至少包括了如下几个目的：2、本技术的第一目的是提供了一种视网膜血管性疾病动物模型的构建方法；3、本技术的第二目的是提供了一种视网膜血管性疾病动物模型；4、本技术的第三目的是提供了cgamp在构建视网膜血管性疾病动物模型中的应用。5、为实现上述目的，本技术具体采用如下技术方案：6、根据本说明书的一个方面,本技术首先提供一种视网膜血管性疾病动物模型的构建方法，所述构建方法包括对动物体内给予cgamp的步骤。7、在一些实施方式中，所述体内给予为体内注射。8、在一些实施方式中，所述体内注射为眼内注射。9、在一些实施方式中，所述眼内注射为眼内玻璃体腔注射。10、在一些实施方式中，所述眼内玻璃体腔注射包括：动物麻醉后，将动物瞳孔散开，沿角膜缘开口处向眼内玻璃体腔注射cgamp溶液。11、在另一些实施方式中，所述眼内玻璃体腔注射包括：动物麻醉后，将动物瞳孔散开，角膜缘处戳出开口，沿角膜缘开口处斜向向眼内玻璃体腔注射cgamp溶液。12、在另一些更为具体的实施方式中，所述眼内玻璃体腔注射包括：动物麻醉后，使用托吡卡酰胺苯肾上腺素将瞳孔散开，使用凝胶润滑角膜；使用针在角膜缘处戳开一小口，以不出血为宜，使用注射器沿角膜缘开口处斜向45度左右缓慢进针，以不刺破视网膜和不划伤晶状体深度为宜；缓缓推进药物后，针头在玻璃体腔停留约5秒。13、在一些实施方式中，所述动物为鼠；优选为小鼠或大鼠；更优选为新生鼠或成年鼠；14、在一些实施方式中，所述成年鼠比如为5-8周龄成年小鼠。15、在一些实施方式中，所述cgamp溶液的浓度可以为1-25mm；16、在一些实施方式中，所述溶液的溶剂可以包括水、pbs或生理盐水。17、根据本说明书的另一个方面,本技术进一步提供所述动物模型在治疗视网膜血管性疾病药物评价或筛选中的应用；优选的，所述药物包含sting抑制剂类药物。18、根据本说明书的另一个方面,本技术还提供一种视网膜血管性疾病动物模型，是由上述任一所述方法构建而得。19、根据本说明书的一个方面，所述动物模型的视网膜具备出现明显血液渗出、新生血管及强烈血管炎等与视网膜血管性疾病发生相关的特征。20、在一些实施方式中，所述动物为鼠；优选为小鼠或大鼠；更优选为新生鼠或成年鼠。21、在一些实施方式中，所述成年鼠比如为5-8周龄成年小鼠。22、根据本说明书的一个方面,本技术进一步提供所述动物模型在治疗视网膜血管性疾病药物筛选中的应用；优选的，所述药物包括sting抑制剂类药物。23、根据本说明书的一个方面，本技术还涉及cgamp在视网膜血管性疾病动物模型构建中的应用，所述构建方法包括对动物体内给予cgamp的步骤。24、在一些实施方式中，所述体内给予为体内注射。25、在一些实施方式中，所述体内注射为眼内注射。26、在一些实施方式中，所述眼内注射为眼内玻璃体腔注射。27、在一些实施方式中，所述玻璃体腔注射为：动物麻醉后，将动物瞳孔散开，沿角膜缘开口处向眼内玻璃体腔注射cgamp溶液。28、在一些实施方式中，所述玻璃体腔注射为：动物麻醉后，将动物瞳孔散开，角膜缘处戳出开口，沿角膜缘开口处斜向向眼内玻璃体腔注射cgamp溶液。29、在一些实施方式中，所述动物为鼠，优选为小鼠或大鼠，更优选为新生鼠或成年鼠；在一些实施方式中，所述成年鼠比如为5-8周龄成年小鼠。30、在一些实施方式中，所述cgamp溶液的浓度可以为1-25mm；31、在一些实施方式中，所述溶液的溶剂可以包括水、pbs或生理盐水。32、相比于现有技术，本技术至少具有如下技术优势：33、1)cgamp是cgas-sting免疫信号通路的关键激活分子，以往未有靶向cgas-sting激活的分子直接用于建立视网膜血管性疾病鼠模型。本技术首次提出了基于cgamp建立视网膜血管性疾病鼠模型的手段，并首次提出通过眼内玻璃体腔注射cgamp溶液来实现模型构建。34、2)本技术通过单次玻璃体腔注射，3天后即可观察到视网膜明显的血细胞渗出、新生血管以及强烈的血管炎，极大缩短造模时间。35、3)本技术的眼内注射在新生和成年鼠中均可进行，可作为研究发育和成熟视网膜血管性疾病的工具。