一种增加免疫因子应答的多肽组合物以及制备方

本发明属于生物，具体涉及一种增加免疫因子应答的多肽组合物以及制备方法。背景技术：1、相比于大分子的蛋白质，较低分子量的小分子活性肽更容易被人体吸收消化，小分子肽在生命体内具有众多优异的生理活性，是活性较高的一类化合物。小分子肽在人体中作为营养物质的运输工具，将人所需的各种营养物质吸附在本体上后，运载输送到人体各个细胞、器官、组织，同本体一起被人体吸收，同时具备承载工具和材料的双重职责。植物肽(特别是小肽)在动物消化道内可被直接吸收，参与机体的生理代谢活动，从而提高其生产性能，促进动物生长。初汉平(2011)研究表明，日粮中添加植物小肽可以增强断奶至2月龄新西兰兔的生长发育和免疫性能，添加量以0.06％为宜。李绍章(2004)研究表明，由植物蛋白经生物发酵、特殊加工制成的植物小肽，作为早期断奶仔猪的蛋白营养源，能使断奶猪保持良好的生长发育速度与健康水平。干细胞疗法是一种革命性的医疗方法，在医疗保健的各个领域都具有巨大的前景。干细胞疗法有不同类型，每种疗法都有其独特的特点和应用,但是由于体质的差异,也有可能是因为注射过程中有疼痛,或者是皮肤过敏现象等副作用,注射后很少会引起免疫系统下降和血管栓塞的危害。而在目前的临床研究中，有大量的证据表明，间质干细胞主要通过旁分泌作用调节体内炎症环境，而旁分泌作用的实现除了通过分泌细胞因子之外，间质干细胞所分泌的外泌体等囊泡体也起到了重要的调节作用，外泌体疗法也是一种现代的医疗保健和再生医学方法，提取的外泌体中，外泌体表达的促进神经轴突再生的蛋白种类多，外泌体活性高，并具有良好的组织相容性和极低的免疫排斥反应，可以很大程度上发挥干细胞治疗所带来的治疗作用，同时也避免了干细胞移植所带来的相关不良反应，因此其再生能力而具有巨大的治疗潜力。2、现有技术对人自体基因干细胞衍生的外泌体在免疫调节以及和外源性融合蛋白、联用因子增效方面报道较少，因此，开展这方面的研究为明确的更好的新药选筛的药物靶点提供参考迫在眉睫。技术实现思路1、本发明的目的是制备一种增加免疫因子应答的多肽组合物以及制备方法以及用途。2、一种增加免疫因子应答的多肽组合物，所述组合物包含干细胞外泌体小分子肽提取液、植物源小分子肽提取液、小分子富氢水，所述各个组分重量份配比为干细胞外泌体小分子肽提取液30-55份、植物源小分子肽提取液35-45份、小分子富氢水20-25份。3、所述干细胞外泌体小分子肽提取液中原料来源于骨髓干细胞，包括以下氨基酸序列：seq id 1：glpwkvprqwvdkavgawrpvqpwllvgspwawsvkkkalw。4、所述干细胞外泌体小分子肽提取液中原料来源于脐带血干细胞，包括以下氨基酸序列：seq id 2：lkdwkdvddvgvkwpkasafdgviaivpkdwnlvkdwkl。5、所述所述干细胞外泌体小分子肽提取液来源于外周血干细胞，包括以下氨基酸序列：seq id 3：sgdlpskdislteqkdgpsgdgawkldgswvalgsdf。6、所述植物源小分子肽提取液来源于人参,包括以下氨基酸序列：seq id 4：7、pasqfakgikdarfqakswpfvaqdsrakqespkf。8、所述植物源小分子肽提取液于灵芝,包含以下氨基酸序列：9、seq id 5：gdgflpwisaspkfaliwqnspkfggpgpqigdpai。10、所述小分子富氢水包括h+浓度大于10-5mol/l。11、所述小分子水的制备方法为：用雾化器产生喷出的蒸汽供应到氢离子生成域，利用磁化电场将其中喷射到的蒸汽与被电离并形成带电的氢离子，随后在氢离子和蒸汽混合得到。12、本申请还提供了一种干细胞外泌体小分子肽的制备方法，包括以下步骤(1)将骨髓、脐带血、外周血原料干细胞在无血清培养基上培养2～3d，收集培养上清液，离心，收集上层液，得到干细胞外泌体粗液；13、(2)将所述步骤(1)中干细胞外泌体粗液经超滤浓缩离心，得到浓缩液；14、(3)将所述步骤(2)中浓缩液，得到干细胞外泌体小分子活性肽粗品；15、(4)将(3)中的干细胞外泌体小分子活性肽粗品加水溶解，分离纯化，浓缩后冷冻干燥得小分子活性肽，利用高效液相色谱-质谱测定结构序列。16、本申请还提供了一种植物源小分子肽的制备方法：17、(1)分别称取以下人参、灵芝原料；18、(2)分别将其低温超微粉碎，向超微粉中加小分子水，超声100min，离心，得提取液；19、(3)过滤，得到滤液和滤渣；向滤渣中继续加入混合物总质量5倍的水，超声提取1h，合并两次提取的滤液，得到植物提取液；20、(4)加入酶进行酶解，经灭酶、离心、收集上清液、干燥后得到酶解样品；21、(5)纳滤：将步骤(4)所得酶解样品溶解，经超滤、纳滤后分别得到所述植物小分子肽提取液；22、将上述小分子肽植物提取液，进一步使用uplc-ltq-orbitrap-velos pro质谱分析仪对其进行分析，将orbitrap质谱结果，对物质进行对库比对、解析鉴定，选筛出多种肽段。23、本发明取得的技术效果为：24、在5-200μg/ml浓度范围内，对巨噬细胞均无毒性；免疫因子成功应答、重建有效，可释放cd45因子；seq id 1-4连用有增效效果，最高达到48％，seq id 1-4、5联用有增效效果，最高达到59％，通过seqid 1-5与小分子富氢水的混合连用免疫因子成功应答增效明显，最高达到99％；人体外泌体小分子与植物小分子肽有增效，小分子富氢水可以促进多因子的增效发挥。技术特征：1.一种增加免疫因子应答的多肽组合物，其特征在于：所述组合物包含干细胞外泌体小分子肽提取液、植物源小分子肽提取液、小分子富氢水，所述各个组分重量份配比为干细胞外泌体小分子肽提取液30-55份、植物源小分子肽提取液35-45份、小分子富氢水20-25份；2.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于：所述小分子富氢水包括h+浓度大于10-5mol/l。3.根据权利要求1所述的干细胞外泌体小分子肽的制备方法，其特征在于：4.根据权利要求1所述的植物源小分子肽的制备方法，其特征在于：技术总结本发明属于生物技术领域，一种增加免疫因子应答的多肽组合物以及制备方法,所述组合物包含干细胞外泌体小分子肽、植物源小分子肽、小分子富氢水等；通过模型预测选择未报到过相关功能的小分子多肽序列，进行了相关免疫应答，结果表明该序列会引起特异性T细胞相关多因子应答，分泌细胞因子具有免疫调节等疗效，为目前临床免疫治疗打下基础。技术研发人员：杨晓晨受保护的技术使用者：北京圣美细胞生命科学工程研究院有限公司技术研发日：技术公布日：2024/8/15