一种高效广谱的抗冠状病毒多肽的鼻用制剂及其

本发明属于药物制剂，具体涉及一种高效广谱的抗冠状病毒多肽的鼻用制剂及其制备方法和用途。背景技术：1、新型冠状病毒(sars-cov-2)是一种传染性和致病性极强的病毒。目前虽有多种针对sars-coa-2的疫苗和抗体、及其小分子药物获得批准，但sars-coa-2在流行期间不断产生特别令人关注的变异株(voc)，如阿尔法(alpha/α)、贝塔(beta/β)、伽马(gamma/γ)、德尔塔(delta/δ)和奥密克戎(omicron/ο)等毒株，往往导致疫苗和药物的效果下降甚至失去活性，而本发明的的药物为具有高效且广谱的冠状病毒膜融合抑制剂，能一致多种不同类型，包括不同突变的冠状病毒，发明专利为cn111643656b及cn114736272b，为一种广谱抗冠状病毒脂肽，为多肽类药物。2、多肽类药物是由10～100个氨基酸通过肽键连接而成的化合物，多为亲水性的极性大分子，因其高活性低毒性，已越来越多地用于各种疾病的治疗。但蛋白多肽类药物经口服给药时，需要通过各种生物屏障(如肠上皮细胞膜、肠腔内消化液、消化道酶等)，由于胃液的破坏、消化道酶的降解以及难以透膜等问题，因而生物利用度极低，譬如2017年获批的首个口服多肽索马鲁肽的体内生物利用度不足1％。基于此，临床上多采用注射途径给药，但考虑到治疗周期长，患者频繁注射顺应性差，因此多肽类药物给药途径的研究热点仍聚焦于基于鼻黏膜、肺黏膜、直肠黏膜等的黏膜递送。鼻腔给药具有吸收迅速、起效快、可避免肝脏首过效应、生物利用度高、使用方便以及可绕开血脑屏障向脑内直接递送药物等优点。3、流感病毒具有与新冠病毒(尤其是奥密克戎变异株)高度重叠的从鼻腔开始的全呼吸道易感细胞解剖分布特点，因此本发明的广谱的冠状病毒膜融合抑制剂可通过鼻腔喷雾方式可以模拟病毒自然感染方式在呼吸道形成预防新冠病毒入侵的第一线免疫屏障。本发明的广谱的冠状病毒膜融合抑制剂的鼻用剂与当前新冠疫苗、口服和中和抗体等治疗性药物不同，属于新冠和流感兼具预防和治疗的新型药物，实现鼻用给药的使用方式，可提前抑制病毒。4、因此，开发出一种鼻腔给药途径的广谱的冠状病毒膜融合抑制剂非常必要。技术实现思路1、本发明提供了一种广谱的冠状病毒膜融合抑制剂的鼻用制剂，所述鼻用制剂的稳定性高(杂质含量低至1.08％，加速放置6个月杂质增长量仅为1.55％)；雾滴粒径小(d10～d90位于30μm～150μm)，有利于药物进入鼻腔粘膜沉积；喷雾效果良好(雾化面积大、椭圆度比分和喷雾角度良好)；透膜吸收率高(120min后的剩余药量低至12％)；生物利用度高。同时，与注射剂、吸入制剂需要医疗专业执业人员操作、操作复杂(需雾化器与面罩等)相比，本发明鼻用制剂操作方便、便于携带、给药方便、无污染，大大提高其顺应性，兼具预防和/或治疗冠状病毒所致疾病的功效。2、本发明提供一种鼻用制剂，其中，药物活性成分包括多肽。3、在一些优选地实施方案中，所述多肽包括20～60个氨基酸。4、在一些优选地实施方案中，所述多肽用于预防和/或治疗冠状病毒导致的感染。5、在一些优选地实施方案中，还包括溶剂、抑菌剂和/或渗透压调节剂。6、在一些更优选地实施方案中，还包括稳定剂和/或ph缓冲对。7、在一些优选地实施方案中，所述稳定剂选自β-环糊精、γ-环糊精及其二者的衍生物中的任意一种或多种；8、优选为羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、二甲基-β-环糊精、麦芽糖-β-环糊精、羧甲基-β-环糊精、磺乙基-β-环糊精、磺丙基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊精钠、甲基-β-环糊精、γ-环糊精、羟丙基-γ-环糊精的任意一种或多种；9、更优选为羟丙基-β-环糊精和/或磺丁基-β-环糊精钠。10、在一些优选地实施方案中，所述稳定剂占鼻用制剂总重量的2％～20％。11、在一些优选地实施方案中，所述鼻用制剂的ph＝3.0～6.0；优选地ph＝3.0～4.0；更优选地ph＝3.5。12、在一些优选地实施方案中，所述ph缓冲对选自酸性物质和碱性物质的组合；13、所述酸性物质选自以下中的一种或多种：枸橼酸、碳酸氢钠、磷酸二氢钠、醋酸、酒石酸、乳酸、谷氨酸、马来酸、琥珀酸、tris缓冲盐、盐酸、硫酸；14、所述碱性物质选自以下中的一种或多种：枸橼酸钠、碳酸钠、磷酸氢二钠、醋酸钠、酒石酸钠、乳酸钠、甘氨酸、tris缓冲盐、氢氧化钠、氢氧化钾。15、在一些更优选地实施方案中，所述ph缓冲对选自枸橼酸-枸橼酸钠缓冲对。16、在一些优选地实施方案中，所述ph缓冲对的加入顺序为：先加酸性物质，然后加碱性物质。17、在一些更优选地实施方案中，所述加入顺序依次为：酸性物质、药物活性成分、碱性物质。18、在一些更优选地实施方案中，还包括吸收促进剂。19、在一些优选地实施方案中，所述吸收促进剂选自：选自聚山梨酯类、十二烷基硫酸盐、卵磷脂类、胆盐类、edta及其盐、壳聚糖类中的任意一种或多种，优选edta-2na。20、在一些优选地实施方案中，所述吸收促进剂占鼻用制剂总重量的0.005％～10％。21、在一些优选地实施方案中，所述的鼻用制剂，其中，包括药物活性成分、稳定剂、ph缓冲对、吸收促进剂、抑菌剂、渗透压调节剂和溶剂，鼻用制剂的ph＝3.0～6.0。22、在一些更优选地实施方案中，所述的鼻用制剂，其中，还包括黏度调节剂。23、在一些优选地实施方案中，所述黏度调节剂选自甘油、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚维酮k30中的一种或多种。24、在一些优选地实施方案中，所述黏度调节剂占鼻用制剂总重量的0.1％～5％。25、在一些优选地实施方案中，药物活性成分占鼻用制剂的总重量的0.1％～10％，优选为0.2％～2％。26、在一些优选地实施方案中，所述渗透压调节剂选自氯化钠、甘油、无水葡萄糖、丙二醇、氯化钾、山梨糖醇、甘露醇中的一种或多种。27、在一些优选地实施方案中，所述抑菌剂选自苯酚、苯乙醇、苯扎氯铵、三氯叔丁醇、山梨酸钾、羟苯乙酯、羟苯甲酯中的一种或多种。28、在一些优选地实施方案中，所述溶剂选自注射用水、注射用葡萄糖、生理盐水中的一种。29、在一些优选地实施方案中，所述多肽为式(i)所示的化合物或其药用盐或其衍生物(seq id no.1)；30、31、x1为氨基端保护基团或不存在；优选地，氨基端保护基团为酰基；更优选地，酰基为乙酰基(ac-)；32、x2为多肽，氨基酸序列为(eaaak)n或a[(eaaak)n]a；n为5以下的自然数，表示eaaak序列的重复次数；优选地，x2为eaaak(seq id no.3)；33、x3为赖氨酸或半胱氨酸或2,3-二氨基丙酸或鸟氨酸或2,4-二氨基丁酸或2,7-二氨基庚酸；优选地，x3为赖氨酸；34、x4为修饰于x3的亲脂性化合物基团；优选地，亲脂性化合物为胆固醇琥珀酸单酯(chol)或硬脂酰氯；更优选地，亲脂性化合物为胆固醇琥珀酸单酯(chol)；35、x5为羧基端保护基团或不存在；优选地，羧基端保护基团为氨基(-nh2)。36、在一些优选地实施方案中，所述多肽包括ykyy017，其肽序列为：37、ac-svvniqkeidrlnevaknlneslidlqelgkyeqyikeaaakk(chol)-nh2(seq idno.2)。38、在一些更优选地实施方案中，所述多肽的合成方法如下：39、a)选用树脂从碳端到氮端依次按照顺序偶联所有氨基酸，固相合成全保护多肽；优选采用rink amide-mbha resin；40、b)选择性脱除lys的侧链保护基；优选采用肼作为催化剂，选择性脱除所述侧链保护基；41、c)在偶联剂存在条件下偶联侧链胆固醇琥珀酸单酯；42、d)在裂解剂存在条件下，将肽树脂裂解及侧链脱保护得到所述多肽。43、本发明还提供一种所述鼻用制剂的制备方法，包括如下步骤：44、1)配液：45、将ph缓冲对和药物活性成分溶于溶剂中，调节ph＝3.0～6.0，然后加入预选的成分溶解之后，再次调节至前述ph，加入溶剂至全量。46、在一些更优选地实施方案中，所述制备方法还包括步骤2)过滤；更优选地，药液经一道0.45μm聚醚砜滤芯，再经过一道0.22μm聚醚砜滤芯精滤；47、在一些更优选地实施方案中，所述制备方法还包括步骤3)灌装。48、在一些优选地实施方案中，其中，还包括在所述步骤1)中加入冻干赋形剂，灌装后制备成冻干制剂，复溶后使用。49、在一些更优选地实施方案中，在步骤1)配液中，将药物活性成分、稳定剂、ph缓冲对、冻干赋形剂和ph调节剂溶于溶剂中，配制溶液。50、在一些更优选地实施方案中，在步骤3)灌装之后，还包括步骤4)冻干。51、在一些优选地实施方案中，所述冻干制剂中冻干赋形剂选自：葡萄糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、山梨醇、甘露醇、木糖醇、氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙中的任意一种或多种，优选为甘露醇。52、在一些优选地实施方案中，所述制备方法还包括复溶溶剂的制备；所述复溶溶剂组分包括吸收促进剂、黏度调节剂、抑菌剂、渗透压调节剂和溶剂；53、所述复溶溶剂的制备包括以下步骤：54、i)将吸收促进剂、黏度调节剂、抑菌剂和渗透压调节剂溶于溶剂中。55、在一些更优选地实施方案中，所述制备方法还包括步骤ii)过滤；更优选地，药液经一道0.45μm聚醚砜滤芯，再经过一道0.22μm聚醚砜滤芯精滤。56、在一些更优选地实施方案中，所述制备方法还包括步骤3)灌装。57、在一些更优选地实施方案中，所述复溶制剂在制备冻干制剂之前、之中或之后制备。58、另外，本发明也提供一种所述鼻用制剂在制备用于预防和/或治疗冠状病毒感染药物中的用途。59、本发明的有益之处至少在于：60、i)制剂效果61、一、稳定剂62、1、相较于不加稳定剂(例如，实施例2)，加入稳定剂(例如，实施例1)对制备的鼻用制剂的稳定性大大增加，具体表现在：63、采用磺丁基-β-环糊精钠为稳定剂的样品0天的有关物质总杂为1.08％，加速6月之后的总杂为2.63％，未超过5.0％，增长量为1.55％，稳定性良好且显著。未添加稳定剂的样品0天的有关物质总杂为2.44％，加速6月之后的总杂为8.82％，超过5.0％，增长量为6.58％，杂质增长量减少5.03％；64、2、采用本发明的稳定剂种类(例如，磺丁基-β-环糊精钠、羟丙基-β-环糊精、β-环糊精、二甲基-β-环糊精、γ-环糊精)制备的鼻用制剂的稳定性良好，喷雾效果良好。具体表现在：65、加不同稳定剂的样品0天的有关物质总杂为1.23％～1.57％，放置加速6月后分别为3.03％～3.78％，未超过5.0％，增长量为1.69％～2.21％，稳定性良好且显著。66、加不同稳定剂的样品在30mm距离检测的雾滴粒径范围(d10～d90)为30.51～141.25μm，雾滴粒径位于约30μm～150μm之间，有利于药物进入鼻腔粘膜沉积。67、雾化面积约为283～296mm2，雾化面积为较大；椭圆度比分为1.13～1.17；喷雾角度分别约为：30～32°，椭圆度比符合1.00～1.20的要求，喷雾角度大于30°，喷雾效果良好。68、3、反之，采用本发明之外的其他稳定剂种类(例如，α-环糊精)制备的鼻用制剂的稳定性差，具体表现在：69、采用α-环糊精为稳定剂的样品0天的有关物质总杂为1.69％，放置加速6月为7.10％，超过5.0％的质量标准要求，杂质增长量为5.41％，稳定性差。70、4、采用本发明的稳定剂用量2％～20％(例如，6％、2％、12％、20％)制备的鼻用制剂的稳定性良好，具体表现在：71、稳定剂不同用量(2％～20％)的样品0天的有关物质总杂为1.09％～1.32％与实施例1的1.08％无显著差异，放置加速6月后分别为2.92％～3.52％，未超过5.0％，增长量分别为1.70％～2.43％，稳定性良好且显著。72、稳定剂不同用量(2％～20％)的样品在30mm距离检测的雾滴粒径范围(d10～d90)为31.12～145.23μm，滴粒径位于约30μm～150μm之间，有利于药物进入鼻腔粘膜沉积。雾化面积约为264～300mm2，椭圆度比为1.15～1.16；喷雾角度分别约为：30～31，喷雾面积较大，椭圆度比符合1.00～1.20的要求，喷雾角度均大于30°，喷雾效果良好。73、5、采用本发明之外的稳定剂用量＜2％或＞20％(例如，1％或25％)制备的鼻用制剂的稳定性较差，具体表现在：74、稳定剂用量＜2％时，(例如，1％)样品放置加速6月后为5.76％，超过5.0％的质量标准要求，杂质增长量为4.61％，稳定性较差。75、稳定剂用量＞20％时，(例如，25％)样品在30mm距离检测的雾滴粒径范围(d10～d90)为40.79～198.24μm。粒度超过30μm～150μm，不利于药物进入鼻腔粘膜沉积。雾化面积为256mm2，显著减少；喷雾角度为：28°，小于30°，喷雾效果较差。76、二、ph缓冲对77、1、相较于不加ph缓冲对，加入ph缓冲对制备的鼻用制剂的稳定性大大增加，具体表现在：78、加ph缓冲对的样品0天的有关物质总杂为1.08％，加速6月之后的总杂为2.63％，未超过5.0％，增长量为1.55％，稳定性良好且显著。相对于未添加ph缓冲对的样品0天的有关物质总杂为3.25％，加速6月之后的总杂为10.55％，超过5.0％，增长量为7.30％，杂质增长量减少5.75％；79、2、采用本发明的ph缓冲对(例如，枸橼酸-枸橼酸钠、醋酸-醋酸钠、酒石酸-酒石酸钠、磷酸二氢钠-磷酸氢二钠)制备的鼻用制剂的稳定性良好，80、采用本发明的ph缓冲对的样品加速6月之后的总杂为2.63％～3.56％，显著低于杂质含量限度标准(≤5.0％)，且加速放置后杂质增长量控制在1.55％～1.96％，稳定性良好且显著。81、3、采用本发明之外的其他缓冲对(例如，硼酸-硼酸钠)的样品制备过程中ykyy017无法溶解完全、出现絮状沉淀，无法制备鼻用制剂药品。82、4、采用枸橼酸-枸橼酸钠作为ph缓冲对制备的鼻用制剂的稳定性最优，具体表现在：83、加速6月之后的总杂为2.63％，显著低于杂质含量限度标准(≤5.0％)，且未超过3.0％；且加速放置后杂质增长量仅为1.55％，稳定性最好。84、三、ph缓冲对的加入顺序85、1、采用本发明的ph缓冲对加入顺序，即ph缓冲对中酸性物质-在碱性物质之前添加(例如，ph缓冲对中酸性物质-药物活性成分-ph缓冲对中碱性物质)，制备的鼻用制剂的稳定性最优，具体表现在：86、药物活性成分溶解完全，溶液澄清，无絮状物析出；并且加速后的总杂为2.63％，显著低于杂质含量限度标准(≤5.0％)，且未超过3.0％；且加速放置后杂质增长量仅为1.55％，稳定性良好；87、2、采用其他ph缓冲对的加入顺序，药物活性成分均不能完全溶解，溶液不澄清，絮状物析出，无法进行后续的冻干制备过程。88、四、药液ph值89、1、调节ph为3.0～6.0，制备的鼻用制剂的稳定性良好，具体表现在：90、新鲜制备的样品有关物质总杂为1.22～1.56％，加速后的总杂为2.79～3.65％，显著低于杂质含量限度标准(≤5.0％)；且加速放置后杂质增长量控制在1.57～2.09％，稳定性良好；91、2、调节ph为3.5时制备的鼻用制剂的稳定性最佳，具体表现在：92、加速后的总杂为2.63％，显著低于杂质含量限度标准(≤5.0％)，且未超过3.0％；且加速放置后杂质增长量仅为1.55％，稳定性最好。93、3、采用本发明范围外的ph，无法制备稳定性合格的鼻用制剂产品；具体表现在：94、新鲜制备样品的有关物质总杂、加速6月之后的有关物质总杂及增长量，均显著增加，并且远高于总杂含量限定标准(≤5.0％)。95、五、吸收促进剂96、1、相较于不加吸收促进剂的样品，加入吸收促进剂制备的鼻用制剂的渗透性、生物利用度更高，具体表现在：97、加入吸收促进剂制备的样品透膜吸收率高，120min后的剩余药量为12％。相较于未加入吸收促进剂的120min药物剩余量还有42％，剩余量相对减少了30％，具有显著性差异。同样加入吸收促进剂制备的样品生物利用度高，auclast为614.0±125.7μg/l·h。相较于未加入吸收促进剂的auclast为114.8±38.2μg/l·h，增加了4.3倍，具有显著性差异。98、2、采用不同吸收促进剂(例如，edta-2na、聚山梨酯80、十二烷基磷酸胆碱、二油酰基卵磷脂、脱氧甘胆酸钠、壳聚糖)制备的鼻用制剂的渗透性高，具体表现在：99、加入不同吸收促进剂的实施例10方法1～5的样品120min渗透后的剩余药量分别为12％～28％，渗透性较高。100、3、采用本技术0.005％～10％用量的吸收促进剂(例如，0.005％、0.1％、1％、5％、10％)制备的鼻用制剂的渗透性高，具体表现在：101、不同吸收促进剂用量制备的样品120min渗透后的剩余药量为12％～25％，渗透性较高。102、六、黏度调节剂103、1、采用本发明黏度调节剂(例如，聚维酮k30、甘油、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素)，能进一步提高鼻用制剂的平均雾滴粒径、喷雾特性，具体表现在：104、不加黏度调节剂的鼻用制剂的雾滴粒径范围(d10～d90)为32.41μm～121.84μm，雾化面积约为306mm2，椭圆度比为1.17，喷雾角度为33°；雾滴粒径位于30μm～150μm之间，有利于药物进入鼻腔粘膜沉积。雾化面积为较大，椭圆度比符合1.00～1.20的要求，喷雾角度大于30°，喷雾效果良好。105、添加不同种类的黏度调节剂制备的鼻用制剂的雾滴粒径范围(d10～d90)为31.44～138.25μm，雾化面积为255～288mm2，椭圆度比为1.10～1.13，喷雾角度为34～37°；雾滴粒径位于30μm～150μm之间，有利于药物进入鼻腔粘膜沉积。雾化面积为较大，喷雾角度大于30°，喷雾效果良好。106、二者相比，椭圆度比相比加入黏度调节剂的样品稍大，实施例12方法1～4加入黏度调节剂能进一步调节降低雾化的椭圆度比，同时通过加入黏度调节剂可以调节喷雾角度，使雾化效果进一步提高。107、3、采用本发明黏度调节剂的用量0.1％～5％(例如，实施例12方法1 1％、实施例13的方法1～4 0.1％、2％、3％、5％)制备的鼻用制剂的平均雾滴粒径适宜、喷雾特性良好，具体表现在：108、不同黏度调节剂制备的鼻用制剂的雾滴粒径范围(d10～d90)为30.69～152.35μm，雾化面积约为255～287mm2，椭圆度比为1.12～1.17，喷雾角度为33～36°；雾滴粒径位于30μm～150μm之间，有利于药物进入鼻腔粘膜沉积。雾化面积较大，椭圆度比符合1.00～1.20的要求，喷雾角度大于30°，喷雾效果良好。109、七、冻干制剂110、将鼻用液制备成冻干制剂的样品0天的有关物质总杂为1.21％，与液体制剂的1.08％无显著性差异；加速6月之后的有关物质总杂为2.12％，增长量为0.91％，证明冻干制剂和液体制剂均具有良好的稳定性。111、ii)药理效果112、本发明一种高效广谱的抗冠状病毒多肽的鼻用制剂，通过鼻腔吸收快速、直接的作用在上、下呼吸道，在呼吸道形成预防新冠病毒或其他冠状病毒入侵的第一线免疫屏障，用于预防和/或治疗冠状病毒(例如，sars-cov-2病毒)导致的感染。113、iii)工艺效果114、本发明工艺简单、能耗低、对设备要求不高、物美价廉。适于大规模工艺化生产和应用。