雾化吸入人脐带间充质干细胞源外泌体在治疗急

本发明涉及生物医药领域，具体涉及雾化吸入人脐带间充质干细胞源外泌体在治疗急性肺损伤中的应用。背景技术：1、急性肺损伤（ali）/急性呼吸窘迫综合征（ards）是一种危及生命的呼吸衰竭形式，在重症患者中具有较高的发病率和死亡率，这种危及生命的情况是由于休克、严重感染或创伤等各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及肺微血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质和肺泡水肿，以及肺泡腔内炎症细胞的增加。尽管经过了几十年的研究，但目前治疗方法仍以机械通气为主，尚无有效的药物治疗。2、外泌体是指直径范围为40-160nm的细胞外囊泡，含有多种成分，包括dna、rna、蛋白质、脂质和代谢产物。外泌体是细胞间通讯的重要手段，是损伤后组织修复和再生的一种很有前途的介质。而干细胞源外泌体不仅可以促进受损组织的修复和再生，也在一系列炎症性疾病中发挥保护作用，包括脓毒症、急性呼吸窘迫综合征等。3、不能通过肺屏障一直是急性肺损伤治疗的一个主要问题，新兴的纳米药物，包括基于外泌体的治疗，提供了一种跨越气血屏障、肺泡上皮-内皮屏障和其他生物屏障的治疗策略。雾化吸入可以让外泌体活化因子直接作用于呼吸道，使得局部药物浓度很高，直接作用于患处起效快、使用方便且全身副作用最低。有研究表明，雾化吸入外泌体到达小鼠肺组织的效果优于尾静脉注射到达小鼠肺组织，表现出更强大的抗炎和抗氧化活性。4、人脐带间充质干细胞源外泌体（hucmscs-exo）被证明是一种很有前途的急性肺损伤的无细胞治疗来源，然而，其在急性肺损伤治疗中的作用及其机制仍不完全清楚，因此，探究雾化吸入人脐带间充质干细胞源外泌体对急性肺损伤的治疗机制将有助于推进人脐带间充质干细胞源外泌体的临床治疗应用转化。技术实现思路1、本发明的目的是探究雾化吸入人脐带间充质干细胞源外泌体在雾化吸入lps诱导的急性肺损伤治疗中的作用及其机制，而提出的雾化吸入人脐带间充质干细胞源外泌体在治疗急性肺损伤中的应用。2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案。3、本发明公开了一种间充质干细胞源外泌体在制备用于治疗急性肺损伤的药物中的应用。4、进一步地，所述间充质干细胞源外泌体为人脐带间充质干细胞源外泌体。5、更进一步地，所述间充质干细胞源外泌体的制备方法具体包括以下步骤：6、s1脐带间充质干细胞的制备及细胞培养液的收集：提供新生儿的脐带组织，用无菌pbs冲洗干净，剥离血管和华通氏胶，将组织剪碎至2mm小块，将组织均匀铺在培养皿中，添加间充质干细胞培养基后，转移至培养箱中，培养条件为5％co2，37℃，待培养皿中贴壁细胞铺满80%~90%时，消化后收集1000rpm离心5分钟后弃上清，使用新鲜间充质干细胞培养基重悬后得到原代间充质干细胞，即p0，继续传代培养，当间充质干细胞长满至80%时，用pbs洗***细胞，并换上新间充质干细胞培养基，置于培养箱中培养48小时后，收集细胞上清；7、s2超速离心法提取外泌体：将s1中收集的细胞培养液加入离心管中，第一次离心为在4℃条件下以300g的离心力离心10分钟，然后取上清以2000g的离心力离心15分钟；然后取上清以10000g的离心力离心30分钟，再用0.22μm滤膜过滤上清液，第二次离心为在4℃条件下以100000g的离心力离心70分钟，得到人脐带间充质干细胞源外泌体；8、s3外泌体的鉴定：s2收集得到的人脐带间充质干细胞源外泌体，通过透射电镜；纳米粒径示踪分析；特异性蛋白cd9，cd63和cd81对外泌体进行鉴定。9、进一步地，所述药物的剂型为雾化剂。10、本发明还提供了一种用于治疗急性肺损伤的药物，其特征在于，所述药物包含唯一活性成分间充质干细胞源外泌体。11、进一步地，所述间充质干细胞源外泌体为人脐带间充质干细胞源外泌体。12、更进一步地，所述间充质干细胞源外泌体的制备方法具体包括以下步骤：13、s1脐带间充质干细胞的制备及细胞培养液的收集：提供新生儿的脐带组织，用无菌pbs冲洗干净，剥离血管和华通氏胶，将组织剪碎至2mm小块，将组织均匀铺在培养皿中，添加间充质干细胞培养基后，转移至培养箱中，培养条件为5％co2，37℃，待培养皿中贴壁细胞铺满80%~90%时，消化后收集1000rpm离心5分钟后弃上清，使用新鲜间充质干细胞培养基重悬后得到原代间充质干细胞，即p0，继续传代培养，当间充质干细胞长满至80%时，用pbs洗***细胞，并换上新间充质干细胞培养基，置于培养箱中培养48小时后，收集细胞上清；14、s2超速离心法提取外泌体：将s1中收集的细胞培养液加入离心管中，第一次离心为在4℃条件下以300g的离心力离心10分钟，然后取上清以2000g的离心力离心15分钟；然后取上清以10000g的离心力离心30分钟，再用0.22μm滤膜过滤上清液，第二次离心为在4℃条件下以100000g的离心力离心70分钟，得到人脐带间充质干细胞源外泌体；15、s3外泌体的鉴定：s2收集得到的人脐带间充质干细胞源外泌体，通过透射电镜；纳米粒径示踪分析；特异性蛋白cd9，cd63和cd81对外泌体进行鉴定。16、进一步地，所述药物的剂型为雾化剂。17、与现有技术比，本发明的有益效果如下。18、本发明公开的雾化吸入人脐带间充质干细胞源外泌体在治疗急性肺损伤中的应用，所述人脐带间充质干细胞源外泌体通过抑制铁死亡以减轻急性肺损伤。19、本发明通过体内和体外实验确定了人脐带间充质干细胞源外泌体能够通过抑制铁死亡以减轻急性肺损伤，有利于人脐带间充质干细胞源外泌体的临床应用，具有重要的临床意义和广阔的应用前景。技术特征：1.一种间充质干细胞源外泌体在制备用于治疗急性肺损伤的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述间充质干细胞源外泌体为人脐带间充质干细胞源外泌体。3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述间充质干细胞源外泌体的制备方法具体包括以下步骤：4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为雾化剂。5.一种用于治疗急性肺损伤的药物，其特征在于，所述药物包含唯一活性成分间充质干细胞源外泌体。6.如权利要求5所述的药物，其特征在于，所述间充质干细胞源外泌体为人脐带间充质干细胞源外泌体。7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述间充质干细胞源外泌体的制备方法具体包括以下步骤：8.如权利要求5所述的药物，其特征在于，所述药物的剂型为雾化剂。技术总结本发明涉及生物医药领域，具体涉及雾化吸入人脐带间充质干细胞源外泌体在治疗急性肺损伤中的应用。本发明公开了雾化吸入人脐带间充质干细胞源外泌体在治疗急性肺损伤中的应用，包括人脐带间充质干细胞培养及细胞培养上清液的收集、超速离心法提取外泌体、雾化吸入LPS构建小鼠急性肺损伤模型以及后续实验验证分析，得到人脐带间充质干细胞源外泌体通过抑制铁死亡以减轻肺损伤。本发明通过体内和体外实验确定了人脐带间充质干细胞源外泌体能够通过抑制铁死亡以减轻急性肺损伤，有利于人脐带间充质干细胞源外泌体的临床应用，具有重要的临床意义和广阔的应用前景。技术研发人员：丁仁彧,丁安云受保护的技术使用者：中国医科大学附属第一医院技术研发日：技术公布日：2024/8/15