肌肉靶向复合物及其用于治疗肌养蛋白病的用途

本技术涉及用于将分子载荷(例如，寡核苷酸)递送至细胞的靶向复合物及其用途，特别是与疾病治疗相关的用途。引用电子序列表电子序列表(d082470055wo00-seq-cob.xml；大小：1,054,275字节；以及创建日期：2022年7月7日)的内容通过引用以其整体并入本文。背景技术：1、肌养蛋白病(dystrophinopathy)是由编码肌养蛋白(dystrophin)的基因中的突变引起的一组独特的神经肌肉疾病。肌养蛋白病包括迪谢内肌营养不良(duchennemuscular dystrophy)、贝克肌营养不良(becker muscular dystrophy)和x连锁的扩张型心肌病。编码肌养蛋白的dmd基因(“dmd”)是包含79个外显子和约260万总碱基对的大基因。dmd中的许多突变(包括外显子移码、缺失、替换和重复突变)能够降低功能性肌养蛋白的表达，导致肌养蛋白病。美国食品和药物管理局(food and drug administration，fda)已经批准了数种靶向人dmd外显子的药剂，包括casimersen、viltolarsen、golodirsen和依特立生(eteplirsen)。其中，viltolarsen和golodirsen靶向外显子53。技术实现思路1、根据一些方面，本公开内容提供了靶向肌细胞以用于将分子载荷递送至那些细胞的复合物，以及可用于其中的分子载荷。在一些实施方案中，本文中提供的复合物对于递送提高或恢复功能性肌养蛋白的表达或活性的分子载荷特别有用。在一些实施方案中，复合物包含基于寡核苷酸的分子载荷，其通过框内外显子跳读机制或抑制终止密码子来促进功能性肌养蛋白的表达，例如通过促进dmd外显子53的跳读。在一些实施方案中，本文中提供的分子载荷可用于促进dmd序列中的外显子跳读，例如dmd外显子53的跳读。因此，在一些实施方案中，本文中提供的复合物包含与肌细胞表面上的受体特异性结合以用于将分子载荷递送至肌细胞的肌肉靶向剂(例如，肌肉靶向抗体)。在一些实施方案中，复合物通过受体介导的内化被摄取到细胞中，然后分子载荷可被释放以在细胞内部执行功能。例如，经工程化以递送寡核苷酸的复合物可释放该寡核苷酸，使得该寡核苷酸可促进肌细胞中功能性肌养蛋白的表达(例如，通过外显子跳读机制，例如通过促进dmd外显子53的跳读)。在一些实施方案中，通过对连接复合物的肌肉靶向剂与寡核苷酸的共价接头进行内体切割而释放该寡核苷酸。本文中提供的复合物和分子载荷可用于治疗具有突变的dmd基因(例如，适合于外显子53跳读的突变的dmd基因)的对象。2、根据一些方面，本文中提供了包含与寡核苷酸共价连接的抗转铁蛋白受体1(tfr1)抗体的复合物，所述寡核苷酸被配置成用于诱导dmd前体mrna中的外显子53的跳读，其中所述寡核苷酸包含与seq id no:224、206、209、212、277、214、207、208、205、160至204、210、211、213、215至223、225至276和278至334中任一者的至少8个连续核苷酸互补的互补区。3、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:212、224和209中任一者的至少8个连续核苷酸互补的互补区。4、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:206、277和205中任一者的至少8个连续核苷酸互补的互补区。5、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:206、224和209中任一者的至少8个连续核苷酸互补的互补区。6、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:214、207和208中任一者的至少8个连续核苷酸互补的互补区。7、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:212、206和209中任一者的至少8个连续核苷酸互补的互补区。8、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:214、207和205中任一者的至少8个连续核苷酸互补的互补区。9、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:277、214和208中任一者的至少8个连续核苷酸互补的互补区。10、在一些实施方案中，抗tfr1抗体包含：11、(i)seq id no:33的重链互补决定区1(heavy chain complementaritydetermining region 1，cdr-h1)、seq id no:34的重链互补决定区2(heavy chaincomplementarity determining region 2，cdr-h2)、seq id no:35的重链互补决定区3(heavy chain complementarity determining region 3，cdr-h3)、seq id no:36的轻链互补决定区1(light chain complementarity determining region 1，cdr-l1)、seq idno:37的轻链互补决定区2(light chain complementarity determining region 2，cdr-l2)和seq id no:32的轻链互补决定区3(light chain complementarity determiningregion 3，cdr-l3)；12、(ii)seq id no:7的cdr-h1、seq id no:8的cdr-h2、seq id no:9的cdr-h3、seqid no:10的cdr-l1、seq id no:11的cdr-l2和seq id no:6的cdr-l3；13、(iii)seq id no:7的cdr-h1、seq id no:20的cdr-h2、seq id no:9的cdr-h3、seqid no:10的cdr-l1、seq id no:11的cdr-l2和seq id no:6的cdr-l3；14、(iv)seq id no:7的cdr-h1、seq id no:24的cdr-h2、seq id no:9的cdr-h3、seqid no:10的cdr-l1、seq id no:11的cdr-l2和seq id no:6的cdr-l3；15、(v)seq id no:51的cdr-h1、seq id no:52的cdr-h2、seq id no:53的cdr-h3、seqid no:54的cdr-l1、seq id no:55的cdr-l2和seq id no:50的cdr-l3；16、(vi)seq id no:64的cdr-h1、seq id no:52的cdr-h2、seq id no:53的cdr-h3、seq id no:54的cdr-l1、seq id no:55的cdr-l2和seq id no:50的cdr-l3；或者17、(vii)seq id no:67的cdr-h1、seq id no:52的cdr-h2、seq id no:53的cdr-h3、seq id no:54的cdr-l1、seq id no:55的cdr-l2和seq id no:50的cdr-l3。18、在一些实施方案中，抗tfr1抗体包含：19、(i)含有与seq id no:76具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链可变区(heavychain variable region，vh)；和/或含有与seq id no:75具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链可变区(light chain variable region，vl)；20、(ii)含有与seq id no:69具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh；和/或含有与seq id no:70具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl；21、(iii)含有与seq id no:71具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh；和/或含有与seq id no:70具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl；22、(iv)含有与seq id no:72具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh；和/或含有与seq id no:70具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl；23、(v)含有与seq id no:73具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh；和/或含有与seq id no:74具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl；24、(vi)含有与seq id no:73具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh；和/或含有与seq id no:75具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl；25、(vii)含有与seq id no:76具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh；和/或含有与seq id no:74具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl；26、(viii)含有与seq id no:77具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh；和/或含有与seq id no:78具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl；27、(ix)含有与seq id no:79具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh；和/或含有与seq id no:80具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl；或者28、(x)含有与seq id no:77具有至少85％同一性的氨基酸序列的vh；和/或含有与seq id no:80具有至少85％同一性的氨基酸序列的vl。29、在一些实施方案中，抗tfr1抗体包含：30、(i)含有seq id no:76的氨基酸序列的vh和含有seq id no:75的氨基酸序列的vl；31、(ii)含有seq id no:69的氨基酸序列的vh和含有seq id no:70的氨基酸序列的vl；32、(iii)含有seq id no:71的氨基酸序列的vh和含有seq id no:70的氨基酸序列的vl；33、(iv)含有seq id no:72的氨基酸序列的vh和含有seq id no:70的氨基酸序列的vl；34、(v)含有seq id no:73的氨基酸序列的vh和含有seq id no:74的氨基酸序列的vl；35、(vi)含有seq id no:73的氨基酸序列的vh和含有seq id no:75的氨基酸序列的vl；36、(vii)含有seq id no:76的氨基酸序列的vh和含有seq id no:74的氨基酸序列的vl；37、(viii)含有seq id no:77的氨基酸序列的vh和含有seq id no:78的氨基酸序列的vl；38、(ix)含有seq id no:79的氨基酸序列的vh和含有seq id no:80的氨基酸序列的vl；或者39、(x)含有seq id no:77的氨基酸序列的vh和含有seq id no:80的氨基酸序列的vl。40、在一些实施方案中，抗tfr1抗体是fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、scfv、fv或全长igg。41、在一些实施方案中，抗tfr1抗体为fab片段。42、在一些实施方案中，抗tfr1抗体包含：43、(i)含有与seq id no:101具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no:90具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；44、(ii)含有与seq id no:97具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no:85具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；45、(iii)含有与seq id no:98具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no:85具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；46、(iv)含有与seq id no:99具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no:85具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；47、(v)含有与seq id no:100具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no:89具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；48、(vi)含有与seq id no:100具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no:90具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；49、(vii)含有与seq id no:101具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no:89具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；50、(viii)含有与seq id no:102具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no:93具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；51、(ix)含有与seq id no:103具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no:95具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链；或者52、(x)含有与seq id no:102具有至少85％同一性的氨基酸序列的重链；和/或含有与seq id no:95具有至少85％同一性的氨基酸序列的轻链。53、在一些实施方案中，抗tfr1抗体包含：54、(i)含有seq id no:101的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:90的氨基酸序列的轻链；55、(ii)含有seq id no:97的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:85的氨基酸序列的轻链；56、(iii)含有seq id no:98的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:85的氨基酸序列的轻链；57、(iv)含有seq id no:99的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:85的氨基酸序列的轻链；58、(v)含有seq id no:100的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:89的氨基酸序列的轻链；59、(vi)含有seq id no:100的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:90的氨基酸序列的轻链；60、(vii)含有seq id no:101的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:89的氨基酸序列的轻链；61、(viii)含有seq id no:102的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:93的氨基酸序列的轻链；62、(ix)含有seq id no:103的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:95的氨基酸序列的轻链；或者63、(x)含有seq id no:102的氨基酸序列的重链；和含有seq id no:95的氨基酸序列的轻链。64、在一些实施方案中，抗tfr1抗体不与转铁蛋白受体1的转铁蛋白结合位点特异性结合和/或抗tfr1抗体不抑制转铁蛋白与转铁蛋白受体1的结合。65、在一些实施方案中，寡核苷酸与dmd前体mrna的剪接特征的至少4个连续核苷酸互补。66、在一些实施方案中，剪接特征是dmd前体mrna的外显子53中的外显子剪接增强子(exonic splicing enhancer，ese)，任选地其中所述ese包含seq id no:689至715中任一者的序列。67、在一些实施方案中，剪接特征是分支点、剪接供体位点或剪接受体位点，任选地其中所述剪接特征跨越dmd前体mrna的外显子52与内含子52的连接处、在内含子52中、跨越内含子52与外显子53的连接处、跨越外显子53与内含子53的连接处、在内含子53中或者跨越内含子53与外显子54的连接处，并且还任选地其中所述剪接特征包含seq id no:685至688和716至718中任一者的序列。68、在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含与seq id no:160至334中任一者互补的序列或包含seq id no:335至684中任一者的序列，其中每个胸腺嘧啶碱基(t)可独立且任选地用尿嘧啶碱基(u)替代，并且每个u可独立且任选地用t替代。69、在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含seq id no:574、556、559、562、627、564、557、558和555中任一者的序列，其中每个胸腺嘧啶碱基(t)可独立且任选地用尿嘧啶碱基(u)替代，并且每个u可独立且任选地用t替代。70、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:562、574和559中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。71、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:556、627和555中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。72、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:556、574和559中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。73、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:564、557和558中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。74、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:562、556和559中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。75、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:564、557和555中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。76、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:627、564和558中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。77、在一些实施方案中，寡核苷酸包含一个或更多个磷酸二酰胺吗啉代，任选地其中所述寡核苷酸是磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(phosphorodiamidate morpholino oligomer，pmo)。78、在一些实施方案中，抗tfr1抗体通过可切割接头与寡核苷酸共价连接，任选地其中所述可切割接头包含缬氨酸-瓜氨酸序列。79、在一些实施方案中，抗tfr1抗体通过与抗体的赖氨酸残基或半胱氨酸残基缀合而与寡核苷酸共价连接。80、根据一些方面，本文中提供了靶向dmd的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含seq idno:160至334中任一者的互补区，任选地其中所述互补区包含与seq id no:160至334中任一者互补的至少15个连续核苷。81、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:212、224和209中任一者互补的区域。82、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:206、277和205中任一者互补的区域。83、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:206、224和209中任一者互补的区域。84、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:214、207和208中任一者互补的区域。85、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:212、206和209中任一者互补的区域。86、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:214、207和205中任一者互补的区域。87、在一些实施方案中，寡核苷酸包含与seq id no:277、214和208中任一者互补的区域。88、在一些实施方案中，所述寡核苷酸包含seq id no:335至684中任一者的至少15个连续核苷，任选地其中所述寡核苷酸包含seq id no:335至684中任一者的序列，其中每个胸腺嘧啶碱基(t)可独立且任选地用尿嘧啶碱基(u)替代，并且每个u可独立且任选地用t替代。89、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:574、556、559、562、627、564、557、558和555中任一者的序列，其中每个胸腺嘧啶碱基(t)可独立且任选地用尿嘧啶碱基(u)替代，并且每个u可独立且任选地用t替代。90、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:562、574和559中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。91、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:556、627和555中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。92、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:556、574和559中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。93、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:564、557和558中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。94、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:562、556和559中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。95、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:564、557和555中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。96、在一些实施方案中，寡核苷酸包含seq id no:627、564和558中任一者的序列，其中每个t可独立且任选地被u替代，并且每个u可独立且任选地被t替代。97、根据一些方面，本文中提供了向细胞递送寡核苷酸的方法，所述方法包括使所述细胞与本文中公开的复合物或与本文中公开的寡核苷酸接触。98、根据一些方面，本文中提供了促进细胞中肌养蛋白的表达或活性的方法，所述方法包括使细胞与以有效用于促进寡核苷酸内化至细胞的量的本文中公开的复合物或本文中公开的寡核苷酸接触，任选地其中所述细胞是肌细胞。99、在一些实施方案中，所述细胞包含适合于外显子53跳读的dmd基因。100、在一些实施方案中，所述肌养蛋白是截短的肌养蛋白。