一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗及其应

本发明涉及生物兽药，更具体的说是涉及一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗及其应用。背景技术：1、鸡球虫病是一种在世界范围内流行的胞内寄生性原虫病，该病在集约化养殖场内的发病率通常为20％-80％，死亡率为60％-80％。全世界每年因鸡球虫感染造成的损失高达104亿英镑。目前，在我国已发现的七种球虫中，柔嫩艾美耳球虫(eimeria tenella，e.tenella)致病性最强、分布最广、危害也最大。2、目前，临床上防控鸡球虫病主要依赖传统药物治疗和疫苗免疫预防两种方法，但随着药物残留、耐药株的出现使得药物治疗得不到广泛的应用，从而使得防治鸡球虫的方向更多转向了疫苗。现阶段疫苗主要有强毒疫苗、弱毒疫苗、亚单位疫苗等，亚单位疫苗又分为重组亚单位疫苗和dna疫苗等。强毒苗可产生较好的保护性免疫，但由于毒力较强，容易引发球虫病；弱毒活苗具有良好的预防效果，但由于其仍具有一定致病性，可能引起鸡群不同程度的球虫病甚至大规模爆发，影响鸡群的生产性能。而dna疫苗则可很好的解决上述问题。3、dna疫苗是近年发展起来的一项新的生物技术，它是将编码抗原蛋白的外源基因dna克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组质粒dna直接注射到动物体内，使外源基因通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，激活机体的免疫系统，进而引发免疫反应。dna疫苗相比于传统疫苗具有可诱导机体的全面免疫反应；易于构建和改造；疫苗免疫时间长；规模化生产的成本低廉，热稳定性好，且利于储存运输；疫苗蛋白质抗原在宿主动物细胞内表达，无毒力返强的危险。基于此dna疫苗成为了防治鸡球虫的研究热点。4、柔嫩艾美尔球虫属于顶复门原虫，顶复门原虫的顶端复合体由一个顶端极环和一组专门的分泌细胞器组成，分别为微线体、棒状体和致密颗粒。etrop27属于棒状体基部蛋白，是在宿主细胞入侵、运动复合体的形成和纳虫空泡建立过程中重要的功能蛋白，是虫体入侵宿主细胞的关键细胞因子，在球虫胞内寄生中起着许多的作用。etrop27基因序列由转录组测序所得(cluster-10347.5943)，基因大小约为1068bp，理论分子量为38.07kda，主要在子孢子和裂殖子阶段表达。5、因此，提供一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗及其应用是本领域技术人员亟需解决的问题。技术实现思路1、有鉴于此，本发明提供了一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗及其应用。该dna疫苗编码鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子阶段抗原，编码的抗原具有较高的免疫原性，含有集中的t细胞表位。这类新型的疫苗制备简单、易于生产、成本低、保存和运输比较容易、适用于广泛的使用。本发明可为dna疫苗进入临床提供理论基础，为e.tenella病的预防和疫苗的研制提供新思路，具有重要的科学及实践意义。2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：3、一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗，含有etrop27基因；所述etrop27基因序列如seq id no.1所示。4、通过转录组测序测得etrop27基因序列(cluster-10347.5943)，其开放区序列共为1068bp，并通过分析e.tenella早熟与强毒株差异基因发现etrop27可能为致病相关基因，可作为疫苗的备选基因。5、进一步，一种pvax-rop27载体，由pvax1载体和etrop27基因构建获得；所述etrop27基因序列如seq id no.1所示。6、进一步，所述的pvax-rop27载体在制备鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗中的应用。7、进一步，所述的pvax-rop27载体在制备预防或治疗鸡球虫病的药物制剂中的应用。8、进一步，一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗，含有所述的pvax-rop27载体。9、进一步，所述的鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗在制备预防或治疗鸡球虫病的药物制剂中的应用。10、进一步，一种生产鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗的方法，技术路线如下：11、(1)克隆e.tenella棒状体基因27(etrop27)基因并进行测序；12、(2)构建e.tenella核酸疫苗重组质粒pvax-rop27；13、(3)重组质粒的体内检测；14、(4)动物免疫保护性实验。15、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗及其应用，具有以下有益效果：16、(1)该疫苗是dna疫苗，与传统疫苗相比，具有安全性高、在体内维持时间长、制备简单、热稳定性良好、便于贮藏和运输、使用省时省力等优点。17、(2)鸡球虫的生活史复杂、基因组庞大，不同发育阶段的免疫原性和抗原构成都有差异。该疫苗编码的etrop27在子孢子和裂殖子阶段都有表达，能够诱导更为全面、强烈的免疫应答反应。18、(3)pvax1载体来源于pcdna3.1载体，经过改造，专门为开发dna疫苗所设计，是目前公认较为安全的疫苗载体。技术特征：1.一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗，其特征在于，含有etrop27基因；所述etrop27基因序列如seq id no.1所示。2.一种pvax-rop27载体，其特征在于，由pvax1载体和etrop27基因构建获得；所述etrop27基因序列如seq id no.1所示。3.权利要求2所述的pvax-rop27载体在制备鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗中的应用。4.权利要求2所述的pvax-rop27载体在制备预防或治疗鸡球虫病的药物制剂中的应用。5.一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗，其特征在于，含有权利要求2所述的pvax-rop27载体。6.权利要求1或5所述的鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型dna疫苗在制备预防或治疗鸡球虫病的药物制剂中的应用。技术总结本发明公开了一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗及其应用，属于生物兽药技术领域。本发明公开的一种鸡柔嫩艾美耳球虫免疫调节型DNA疫苗，利用分子生物学技术克隆出了鸡柔嫩艾美耳球虫子孢子和裂殖子阶段抗原棒状体基部基因ROP27，并将此基因链接至真核表达载体pVAX1上，构建了pVAX‑ROP27DNA疫苗。该疫苗包含有T细胞免疫应答元件，具有安全性高、在体内维持时间长、制备简单、热稳定性良好、便于贮藏和运输、使用省时省力等优点。试验证明，免疫调节型DNA疫苗pVAX‑ROP27在抗柔嫩艾美耳球虫感染中，具有良好的免疫保护效果。技术研发人员：吕晓玲,赵文瑞,牛志斌,康舒宁,白瑞受保护的技术使用者：山西农业大学技术研发日：技术公布日：2024/8/15