一种双靶向的纳米颗粒及其制备方法和应用

本发明属于纳米颗粒，特别涉及一种双靶向的纳米颗粒及其制备方法和应用。背景技术：1、星形胶质细胞是中枢神经系统中分布最广泛的细胞类型之一，其为神经元胞体及突起提供支撑并促进神经元的突触连接。脊髓损伤(spinal cord injury,sci)发生后，星形胶质细胞被活性氧(ros)和促炎因子等因素激活成反应性星形胶质细胞。其中，a1型反应性星形胶质细胞(type i activated astrocyte，a1s)参与神经炎症，合成并释放神经毒素s100-β，抑制突触形成和轴突再生等功能，并最终转变为瘢痕形成星形胶质细胞，合成和分泌硫酸软骨素蛋白聚糖等抑制性成分，最终导致神经再生失败。因此，精准调控星形胶质细胞的激活状态有利于维护神经元功能及促进脊髓损伤修复。2、载药纳米颗粒已被广泛用于靶向给药，靶向性的实现依托于受体-配体间的高特异性结合能力。目前，针对反应性星形胶质细胞的特异性靶向调控策略主要依赖于病毒基因载体及载药纳米颗粒，有研究将paav2/11作为基因转移载体以实现星形胶质细胞的特异性靶向。然而腺病毒载体容易被清除，不能持续表达，且病毒风险高，感染范围广。也有研究提供一种星形胶质细胞靶向性的稀土上转换纳米颗粒的一体化合成装置，其通过携带靶向性药物如叶酸来实现靶向型输送，然而，单一的受体-配体亲和作用、靶向能力较差。3、因此，提供一种具有靶向效率高，ros清除能力好，毒性小，可有效靶向调控反应性星形胶质细胞的神经毒素，促进脊髓损伤修复的纳米颗粒具有十分重要的意义。技术实现思路1、本发明旨在解决上述现有技术中存在的一个或多个技术问题，至少提供一种有益的选择或创造条件。具体而言，本发明提供一种双靶向的纳米颗粒，其具有良好的靶向能力、ros清除能力，靶向效率高，毒性小，且对反应性星形胶质细胞中的s100-β的表达具有良好的抑制作用，进而可促进脊髓损伤修复。2、本发明的发明构思：本发明纳米颗粒为具有核壳结构；所述核包括透明质酸-硒纳米颗粒，所述壳包括负载药物的反应性星形胶质细胞细胞膜。反应性星形胶质细胞高表达cd44，纳米颗粒可以通过同源细胞膜(反应性星形胶质细胞细胞膜)识别实现第一层靶向，并递送药物调控反应性星形胶质细胞内神经毒素的合成；此外通过透明质酸和反应性星形胶质细胞中特异性高表达的cd44的特异性结合来实现第二层靶向，透明质酸具有调控炎症的作用，硒可调控反应性星形胶质细胞内谷胱甘肽(gsh)清除ros的水平。透明质酸-硒纳米颗粒和负载药物的反应性星形胶质细胞细胞膜共同作用，使得纳米颗粒具有良好的靶向能力、ros清除能力、靶向效率高，毒性小，且可双靶向反应性星形胶质细胞，对反应性星形胶质细胞中的s100-β的表达具有良好抑制作用，进而可促进脊髓损伤修复。3、因此，本发明的第一方面提供一种双靶向的纳米颗粒。4、具体的，一种双靶向的纳米颗粒，所述纳米颗粒具有核壳结构；所述核包括透明质酸-硒纳米颗粒，所述壳包括负载药物的反应性星形胶质细胞细胞膜。5、具体的，双靶向的纳米颗粒为双靶向反应性星形胶质细胞的纳米颗粒。6、优选地，所述透明质酸-硒纳米颗粒与所述负载药物的反应性星形胶质细胞细胞膜的质量比为0.9-5.5：1；进一步优选地，所述透明质酸-硒纳米颗粒与所述负载药物的反应性星形胶质细胞细胞膜的质量比为1-5：1；更进一步优选地，所述透明质酸-硒纳米颗粒与所述负载药物的反应性星形胶质细胞细胞膜的质量比为5：1、4：1、3：1、2：1或1：1。7、优选地，所述负载药物的反应性星形胶质细胞细胞膜包括药物和反应性星形胶质细胞细胞膜，所述反应性星形胶质细胞细胞膜与药物的质量比为5-110：1。8、进一步优选地，所述反应性星形胶质细胞细胞膜与药物的质量比为5-100：1；更进一步优选地，所述反应性星形胶质细胞细胞膜与药物的质量比为100：1、80：1、50：1、20：1、10：1或5：1。9、优选地，所述药物包括疏水性药物。10、优选地，所述疏水性药物包括(r)-2-丙基辛酸(arundic acid)。11、本发明的第二方面提供一种本发明第一方面所述的双靶向的纳米颗粒的制备方法。12、具体的，所述双靶向的纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：13、(1)将亚硒酸钠、透明质酸、还原剂混合，反应，制得所述透明质酸-硒纳米颗粒；14、(2)将反应性星形胶质细胞细胞膜、药物、步骤(1)所得的透明质酸-硒纳米颗粒混合，挤压，制得所述纳米颗粒。15、优选地，步骤(1)中，先将所述亚硒酸钠与透明质酸混合，然后加入还原剂，反应，制得所述透明质酸-硒纳米颗粒。16、优选地，所述亚硒酸钠与透明质酸的摩尔比为1：(0.9-110)；进一步优选地，所述亚硒酸钠与透明质酸的摩尔比为1：(1-100)。17、优选地，所述还原剂与亚硒酸钠的摩尔比为0.9-6.5：1；进一步优选地，所述还原剂与亚硒酸钠的摩尔比为1-6：1；更进一步优选地，所述还原剂与亚硒酸钠的摩尔比为1：1、2：1、3：1、4：1、5：1或6：1，18、优选地，所述还原剂包括抗坏血酸、抗坏血酸衍生物、草酸、草酸衍生物、柠檬酸、柠檬酸衍生物中的至少一种，且所述抗坏血酸衍生物、草酸衍生物、柠檬酸衍生物均为基团取代的衍生物，所述基团包括甲基、氨基、巯基、羟基中的至少一种。19、具体的，所述亚硒酸钠被还原剂还原成硒单质。20、优选地，所述亚硒酸钠与透明质酸混合后进行搅拌。21、优选地，所述搅拌的速度为900-2200rpm/min，所述搅拌的时间为0.5-26h；进一步优选地，所述搅拌的速度为1000-2000rpm/min，所述搅拌的时间为0.5-24h；更进一步优选地，所述搅拌速度为1000rpm、1500rpm、1800rpm或2000rpm；所述搅拌的时间为0.5h、1h、2h、5h、12h或24h。22、优选地，所述搅拌在一定的温度下进行。23、优选地，所述温度为4-37℃；进一步优选地，所述温度为25-37℃；更进一步优选地，所述温度为4℃、15℃、20℃、25℃、30℃或37℃。24、优选地，所述透明质酸为透明质酸溶液；进一步优选地，所述透明质酸溶液为透明质酸水溶液。25、优选地，所述透明质酸溶液的质量分数为0.1-1.1％；进一步优选地，所述透明质酸溶液的质量分数为0.1-1％。26、优选地，所述亚硒酸钠为亚硒酸钠溶液；进一步优选地，所述亚硒酸钠溶液为亚硒酸钠水溶液。27、优选地，所述亚硒酸钠溶液的摩尔浓度为0.08-0.12m；进一步优选地，所述亚硒酸钠溶液的摩尔浓度为0.09-0.11m；更进一步优选地，所述亚硒酸钠溶液的摩尔浓度为0.1m。28、优选地，所述还原剂为还原剂溶液；进一步优选地，所述还原剂溶液为还原剂水溶液。29、优选地，所述还原剂溶液的摩尔浓度为0.08-0.12m；进一步优选地，所述还原剂溶液的摩尔浓度为0.09-0.11m；更进一步优选地，所述还原剂溶液的摩尔浓度为0.1m。30、具体的，改变原材料的浓度可制备得到不同粒径和电势的纳米颗粒。31、优选地，步骤(1)中，所述反应的时间为0.1-5.5h；进一步优选地，所述反应的时间为0.1-5h；更进一步优选地，所述反应时间为0.1h、1h、2h、3h、4h或5h。32、优选地，步骤(1)中，所述反应后离心、取上清液透析，干燥，制得所述透明质酸-硒纳米颗粒。33、具体的，所述离心的目的是去除底部杂质，透析的目的是除去未反应的化合物。34、优选地，所述离心的速度为6500-15000rpm/min，所述离心的时间为4.5-35min；进一步优选地，所述离心的速度为7000-14000rpm/min，所述离心的时间为5-30min；更进一步优选地，所述离心的速度为10000rpm/min，所述离心的时间为20min。35、优选地，在水中进行透析；进一步优选地，在去离子水中进行透析。36、优选地，所述透析的时间为45-80h；进一步优选地，所述透析的时间为48-72h。37、优选地，所述透析时的透析袋截留分子量为250-350kda；进一步优选地，所述透析时的透析袋截留分子量为270-330kda；更进一步优选地，所述透析时的透析袋截留分子量为300kda。38、优选地，所述干燥为冷冻干燥。39、具体的，步骤(1)中，透明质酸包裹的亚硒酸钠还原为硒单质并成核，从而获得透明质酸-硒纳米颗粒。40、优选地，步骤(2)中，先将反应性星形胶质细胞细胞膜、药物混合，挤压，然后加入步骤(1)所得的透明质酸-硒纳米颗粒混合，挤压，制得所述纳米颗粒。41、优选地，采用脂质体挤压器进行挤压。42、优选地，所述挤压的滤膜孔径为180-220μm；进一步优选地，所述挤压的滤膜孔径为190-210μm；更进一步优选地，所述挤压的滤膜孔径为200μm。43、优选地，所述挤压的次数为单数。44、本发明的第三方面提供一种药物。45、具体的，所述药物包括本发明第一方面所述的双靶向的纳米颗粒。46、相对于现有技术，本发明提供的技术方案的有益效果如下：47、(1)本发明纳米颗粒具有核壳结构；所述核包括透明质酸-硒纳米颗粒，所述壳包括负载药物的反应性星形胶质细胞细胞膜。反应性星形胶质细胞高表达cd44，纳米颗粒可以通过同源细胞膜(反应性星形胶质细胞细胞膜)识别实现第一层靶向，并递送药物调控反应性星形胶质细胞内神经毒素的合成；此外通过透明质酸和反应性星形胶质细胞中特异性高表达的cd44的特异性结合来实现第二层靶向，透明质酸具有调控炎症的作用，硒是谷胱甘肽过氧化物酶gsh-px的核心组成部分，通过催化gsh氧化为氧化型谷胱甘肽(gssg)从而调控反应性星形胶质细胞内的ros水平。透明质酸-硒纳米颗粒和反应性星形胶质细胞细胞膜共同作用，使得纳米颗粒具有良好的靶向能力、ros清除能力，且对反应性星形胶质细胞中的s100-β的表达具有良好的抑制作用，进而可促进脊髓损伤修复。48、(2)本发明所制备的纳米颗粒粒径均一，分散性较好，靶向效率高，递送的药物有效靶向调控反应性星形胶质细胞的神经毒素，将其应用于反应性星形胶质细胞的功能调控及脊髓损伤修复，均表现出明显的积极调控作用，且毒性低。49、(3)本发明制备工艺简单、易于工业化生产。