一种载沙漠樱桃果实黄酮的双层凝胶递送系统及

本发明属于药物缓释载体材料，具体涉及针对炎症肠道的载沙漠樱桃果实黄酮和多糖的双层凝胶递送系统及其制备方法和应用。背景技术：1、炎症性肠病(inflammatoryboweldisease，ibd)包括克罗恩病(crohn’sdisease，cd)和溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis，uc)，其病因和发病机制仍不清楚，目前大多学者认为持续肠道感染、肠黏膜屏障缺损、肠黏膜免疫调节异常、遗传和环境等因素共同参与了疾病发生过程。治疗uc的药物主要为免疫抑制剂、糖皮质激素类药物，诸如氨基水杨酸类制剂、美沙拉嗪、柳氮磺吡啶等，但是疗效不佳，副作用较大。大量研究表明，治疗uc，应瞄准两个方向：一方面通过促进有益菌生长、抑制致病菌繁殖达到宿主肠道菌群合理化，恢复肠道菌群多样性结构平衡，提高有益菌的丰度，减少致病菌的定植，进而调节肠道菌群平衡将有助于抑制uc患者结肠黏膜炎性损伤，促进结肠黏膜组织修复。另一方面通过抗炎、阻断促炎性信号通路、抑制氧化应激、降低细胞凋亡反应来重建结肠黏膜屏障，最终实现缓解或治愈uc目的。因此，利用天然产物通过抑制炎症、维持氧化应激平衡以及改善肠道菌群来防控溃疡性结肠炎是较为有效的途径。2、抗氧化和抑制氧化应激的天然药物中，黄酮类占有很高的比例。黄酮类中药单体可以调控多条信号通路,包括核因子-κb(nuclear factor kappa-b,nf-κb)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,mapk)信号通路、janus激酶(thejanus kinase,jak)/信号转导与转录激活子(signal transducer and activator oftranscription,stat)信号通路、核转录因子e2相关因子(nuclear factor e2-relatedfactor 2,nrf2)信号通路、notch信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositide3-kinases,pi3k)/蛋白激酶b(protein kinase b,akt)信号通路、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor protein3,nlrp3)信号通路，发挥着抗炎、抗氧化应激、调节免疫、保护肠道上皮屏障等作用，从而来减轻uc肠道损伤。3、植物多糖可大幅增加结肠炎小鼠肠道中杜氏芽孢杆菌等有益菌群的丰度，明显降低turicibacter菌属、肠杆菌属、埃希氏菌-志贺菌属等有害菌群的丰度，恢复uc肠道菌群稳态向正常健康状态趋近。而这些益生菌在肠道的代谢中会产生短链脂肪酸如乙酸、丙酸和丁酸，能够增强结肠紧密连接蛋白claudin-1和zo-1表达并且诱导肠道上皮细胞产生抗菌肽以增强肠道屏障，因而发挥调节炎症的作用。4、近年来，研究者开始将多糖与黄酮类物质联合用药，来治疗溃疡性结肠炎，取得了良好的效果。然而这些天然产物口服进入胃肠道后，容易受到消化液、消化酶等的破坏，同时在肠粘液层的扩散渗透能力及在肠上皮细胞中的转运能力较差，导致其肠道吸收率较低。因此通过载体来实现靶向递送受到极大关注。研究人员将天然或人工合成的大分子材料通过乳化、喷雾干燥、分子自组装、离子凝胶等技术制备而成的微米或纳米级载体，通过疏水、氢键、静电等相互作用对目标化合物进行包裹、吸附或直接交联，以实现活性物质的递送，有效提高活性物质的溶解度和稳定性，促进其肠道吸收，最终以较低口服浓度在机体内行使较高生理功能。5、白刺(nitraria tangutorum)是我国西北地区广泛分布的防风固沙植物，柴达木盆地是白刺自然分布和演化的中心之一,面积达10×104hm2,年产鲜果34×104t，果实味道鲜美，有“沙漠樱桃”之美誉，富含多糖、花青素、黄酮类、皂苷、甾醇类生理活性物质。《中国大辞典》中白刺被称为卡密，以果熟时采收，晒干入药，具有健脾胃、滋补强壮、调经活血的功能。作为蒙药，哈日莫格，能健脾和胃、助消化、安神解表，主治脾胃虚弱、气血两亏、消化不良和神经衰弱等症。白刺果实中总黄酮的含量约为1.46％～1.65％，多糖含量为33.875mg·g-1。本发明研究人员于2010年暑期，带领学生赴甘肃实习，因家族遗传、水土不服以及酒精损伤，导致急性肠炎，服用诸多西药，未见明显好转；而进入民勤的巴丹吉林沙漠后，适值白刺盛果期，吃了很多，第二天即痊愈。6、基于此，本发明提供一种载沙漠樱桃果实黄酮的双层凝胶递送系统及其制备方法和应用。技术实现思路1、针对上述技术问题，本发明提供了一种载沙漠樱桃果实黄酮的双层凝胶递送系统及其制备方法和应用。2、本发明采用如下技术方案：一方面，本发明提供一种载沙漠樱桃果实黄酮的双层凝胶递送系统的制备方法，包括以下步骤：从唐古特白刺(又名沙漠樱桃)果实中提取黄酮和多糖并纯化。3、将所述黄酮装载在多孔淀粉上，得到载黄酮多孔淀粉。4、将2w/v％的瓜尔胶溶液与1w/v％的低甲酯苹果果胶溶液混合，向混合溶液中加入氯化钙混匀，将该混合溶液滴入含有span80的液体石蜡中，得到的溶液中滴入1w/v％的海藻酸钠溶液，反应30-50min，冲洗，沉淀注入1-3w/v％壳聚糖溶液，反应30-50min，形成双层凝胶。5、将载黄酮多孔淀粉溶于所述双层凝胶的溶液中，再加入所述多糖，乳化均质得乳液，将所得乳液干燥、研磨，得所述载沙漠樱桃果实黄酮的双层凝胶递送系统。6、作为本发明所述制备方法的优选，自沙漠樱桃果实中提取黄酮和多糖并纯化，包括以下步骤：a1)将沙漠樱桃鲜果剔除种子后烘干、粉碎后得果粉。7、a2)采用超声辅助乙醇提取果粉中总黄酮，提取后离心取上清液，重复3-5次后，合并上清液，残渣备用，所述上清液即沙漠樱桃黄酮类化合物提取物；聚酰胺树脂纯化所述沙漠樱桃黄酮类化合物提取物，得到纯化的沙漠樱桃果实黄酮。8、a3)将a2)的残渣于纤维素酶溶液中提取1-1.5h，然后依次用耐热α-淀粉酶、木瓜蛋白酶、淀粉葡萄糖苷酶酶解，然后加热灭活，离心，所得沉淀和上清液备用。9、a4)采用乙醇溶液对a3)的上清液进行醇沉，离心除去不溶物，取上清液透析，透析液用凝胶柱吸附，用0、0.1、0.3、0.5mnacl梯度溶液洗脱多糖溶液，流速为1ml/min；合并洗脱液组分，合并液通过旋转蒸发进行浓缩，浓缩液经8000da透析袋透析3天后，转移透析液至10kda的超滤管，在8000rpm下离心15min，最终将超滤液经冷冻干燥得到沙漠樱桃果实水溶性纯多糖。10、作为本发明所述制备方法的进一步优选，a2)的超声辅助乙醇提取中，乙醇的质量分数为60-70％，料液比为1：19-25，温度为40-45℃，超声频率为40khz，功率为400w，提取时间为1-1.5h。11、作为本发明所述制备方法的进一步优选，a4)中，醇沉采用体积分数80％的乙醇溶液，透析采用截留分子量为8000-10000da的透析袋。12、作为本发明所述制备方法的进一步优选，载黄酮多孔淀粉的制备包括：b1)将玉米淀粉加入浓度0.1m的醋酸钠缓冲液，得到浓度20-25g/ml的淀粉悬浮液，50℃加热10min，加入200u/g的α-淀粉酶，50℃加热4h，加入600u/g葡糖淀粉酶50℃，120r/min反应振荡4h，加入反应体系体积1/5-1/4的95％乙醇，离心，沉淀物干燥、过筛，得粉末状多孔淀粉。13、b2)将所述黄酮溶解于80％乙醇中，除去未溶解晶体，得黄酮-乙醇溶液，将黄酮-乙醇溶液滴入10mg/ml的多孔淀粉溶液，反应1h，离心，沉淀干燥后得所述载黄酮多孔淀粉。14、又一方面，本发明提供所述制备方法制备得到的载沙漠樱桃果实黄酮的双层凝胶递送系统。15、又一方面，本发明提供载沙漠樱桃果实黄酮的双层凝胶递送系统在制备治疗结肠炎的药物中的应用。16、进一步的，所述结肠炎为溃疡性结肠炎。17、更进一步的，所述溃疡性结肠炎由葡聚糖硫酸钠诱导。18、本发明具有如下有益效果：本发明从肠道保健的角度，选取具有提高免疫力、肠道保护、黏膜修复功能的沙漠樱桃果实多糖，以及具有消炎、抗氧化功能的沙漠樱桃果实黄酮，进行提取、纯化，制备了一种双层微凝胶口服递送系统，具有ph响应性、缓释性和结肠酶降解三种效应。结合沙漠樱桃多糖与黄酮的多重生物学功效，增强针对结肠微环境的靶向结肠定位和释放。内核由瓜尔胶和低甲氧基果胶制成，具有结肠粘附和降解作用；外层经海藻酸盐和壳聚糖相互作用修饰，实现结肠定位。多孔淀粉(porous starch,ps)介导的强吸附使黄酮在内核中加载，从而构建多功能输送系统。19、在体外实验中，该双层微凝胶口服递送系统在不同的ph条件下表现出良好的生物反应，可延缓黄酮在上胃肠道的释放。在体内，口服葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,uc)症状明显减轻，同时炎症因子水平降低。该靶向递送方式促进结肠输送，允许结肠组织中的黄酮成分积累。此外，这些双层微凝胶口服递送系统可以改变小鼠肠道微生物群的组成。20、在给药过程中，黄酮和多糖增加了肠道微生物多样性，提高了益生菌丰度。这些负载多孔淀粉的双层微凝胶具有优异的生物相容性、多生物反应性和结肠靶向性，通过精准递送沙漠樱桃功能成分，来实现消化道保护和uc治疗，使其成为一种新型口服制剂。