一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法及其应用

本发明属于降糖，具体涉及一种α-葡萄糖苷酶抑制剂的制备方法及其应用。背景技术：1、南烛（vaccinium bracteatum thunb.）为杜鹃花科越橘属常绿灌木，又名牛筋、黑饭草、南烛、男续、染椒、沙莲子、米饭花等。其根、叶、果实均可入药。在我国有较早的食用和药用历史。每年四月，江南民众喜食用乌饭树嫩叶浸汁染米做成的乌饭。用乌饭树汁液浸泡食材烹制的黑官膳曾经风靡一时。据《中药大辞典》记载，乌饭树叶可益肠胃、养肝肾，治疗须发早白；果具有益肾固精、强筋止泻等药效；根入药可散瘀、消肿、止痛。乌饭树在我国分布很广，蕴藏量很大，主产于华东、华中、华南等地。常分布在丘陵地带或海拔400~1400 m的山坡林内或灌木丛中，是酸性土（红壤）的指示性植物。但是南烛叶在我国仅仅用来制作乌米饭，缺乏对南烛叶功能因子的挖掘、健康效应解析的研究，很大程度上限制了南烛资源的开发利用。2、糖尿病已成为威胁人类健康的重大疾病之一。2021 年 12 月，国际糖尿病联盟发布“全球糖尿病地图第 10 版” （idf diabetes atlas 10th edition），指出 2021 年全球20~79 岁糖尿病患者有 5.37 亿，约占该年龄段全球人口的 10.5%；预计到 2030 年，这一数值将增长到 6.43 亿，2045 年达到 7.83 亿。2021年，我国糖尿病患者（20-79岁）总数、未被诊断糖尿病患者数量、因糖尿病导致的死亡人数均排在第一位。临床用于治疗糖尿病的药物主要分为胰岛素及胰岛素类似物和口服药物，口服药物包括胰岛素促泌药、胰岛素增敏药、促糖排出药（sglt2抑制药）、双胍类、α-糖苷酶抑制药、胰高血糖素样肽1（glp-1）受体激动药及二肽基肽酶-ⅳ（dpp-4）抑制药等。阿卡波糖、米格列醇和伏格列波糖是当前临床常用的α-葡萄糖苷酶抑制剂，但是这几种药物的使用会产生腹胀、腹泻、腹痛等副作用。因此，寻找抑制活性强且毒副作用低的新型α-葡萄糖苷酶抑制剂对糖尿病、肥胖等代谢综合征的防治具有重要意义。技术实现思路1、本发明旨在于提供一种α-葡萄糖苷酶抑制剂及其制备方法和应用。一种α-葡萄糖苷酶抑制剂主要成分是南烛叶水提物，南烛叶水提物来源于天然南烛叶，安全性高，对高糖线虫具有显著延长寿命的作用。并利用南烛叶水提物制作南烛叶黑面包。2、本发明所采用的技术方案如下：3、一种α-葡萄糖苷酶抑制剂主要成分是南烛叶水提物。4、所述南烛叶水提物的提取的方法没有特殊限定，包括超声提取、回流提取或者浸提，提取液在55 ℃下旋转蒸发浓缩得到浸膏，倒入培养皿后冷冻干燥，研磨装瓶，放于4 ℃保藏备用。5、南烛叶水提物对α-葡萄糖苷酶抑制效果评价如下：6、（1）对照组：向96孔板中加入0.3 u/ml的α-葡萄糖苷酶溶液30 μl，ph为6.8的pbs缓冲液60 μl，置于37℃培养箱中，保温孵育10 min后，加入10 mmol/l的pnpg溶液30 μl，置于37℃培养箱中，保温孵育15 min后，加入1 mmol/l的na2co3终止液120 μl终止反应，酶标仪上测定405 nm处吸光值（a）。7、（2）空白组：向96孔板中加入ph为6.8的pbs缓冲液90 μl，置于37℃培养箱中，保温孵育10 min后，加入10 mmol/l的pnpg溶液30 μl，置于37℃培养箱中，保温孵育15 min后，加入1 mmol/l的na2co3终止液120 μl终止反应，酶标仪上测定405 nm处吸光值（b）。8、（3）实验组：向96孔板中加入0.3 u/ml的α-葡萄糖苷酶溶液30 μl，ph为6.8的pbs缓冲液50 μl，南烛叶水提物浓度分别为2.5、5.0、10、20、40、80 μg/ml水溶液10 μl，置于37℃培养箱中，保温孵育10 min后，加入10 mmol/l的pnpg溶液30 μl，置于37℃培养箱中，保温孵育15min后，加入1 mmol/l的na2co3终止液120 μl终止反应，酶标仪上测定405 nm处吸光值（c）。9、（4）实验对照组：向96孔板中加入ph为6.8的pbs缓冲液80 μl，南烛叶水提物浓度分别为2.5、5.0、10、20、40、80 μg/ml水溶液10 μl，置于37 ℃培养箱中，保温孵育10 min后，加入10 mmol/l的pnpg溶液30 μl，置于37℃培养箱中，保温孵育15 min后，加入1 mmol/l的na2co3终止液120 μl终止反应，酶标仪上测定405 nm处吸光值（d）。10、进一步，α-葡萄糖苷酶抑制率的计算公式如下：11、12、式中：c为实验组吸光值；b为实验空白组吸光值；a为对照组吸光值；d为空白组吸光值。13、进一步，所述南烛叶为春季4-6月份嫩叶片及老叶片，秋季9-10月份老叶片。14、进一步，福建、贵州、江西、江苏、浙江和湖北6个地区春季和秋季的南烛叶均具有抑酶活性。15、优选的，福建、贵州、江西、江苏、浙江和湖北6个地区秋季9，10，11月份南烛老叶的抑酶活性优于春季嫩叶及春季老叶。16、进一步，优选的，福建地区秋季9，10，11月份老叶的抑酶效果最佳。17、本发明利用所述的南烛叶水提物，提供了一种含有南烛叶水提物的南烛叶黑面包，其原料组成质量份计：南烛叶水提物10-20份、南烛叶汁70-90份，普通全麦粉80-90份、高筋面粉60-70份、鸡蛋40-50份、赤藓糖醇10份、酵母3-4份、盐1-2份、黄油5-10份。18、优选的，南烛叶黑面包其原料组成质量份计：南烛叶水提物15份、南烛叶汁80份，普通全麦粉90份、高筋面粉60份、鸡蛋40份、赤藓糖醇10份、酵母3份、盐2份、黄油8份。19、上述南烛叶汁的制备：将南烛叶与纯净水按照1 : 5的比例分别进行称量，将南烛叶进行筛选，剔除品相较差的叶子后，洗净，晾干，然后将南烛叶与纯净水混合放入料理机中高速搅拌成浆汁，用200目的过滤网对浆汁进行过滤，去除滤渣，将过滤出的南烛叶汁备用。20、上述南烛叶水提物的制备方法，包括以下步骤：21、（1）选取南烛叶为春季4-6月份嫩叶片及老叶片，秋季9-10月份老叶片，挑选出品相不佳的叶片和其他杂质，用流水冲洗，沥干后放置-40℃冰箱冷冻，用真空冷冻干燥机干燥后粉碎为粉末。22、（2）称取样品粉末，按照料液比1 : 30（m : v）加入蒸馏水，浸2 h后于60 ℃、80khz条件下超声提取45 min，常温下6000 r·min-1离心20 min，分别收集上清液和滤渣；收集的滤渣进行二次提取，按料液比1：30（m:v）加入蒸馏水，按照一提的条件离心收集二提的上清液，合并两次上清液进行抽滤，得到澄清液体。23、（3）在55 ℃下旋转蒸发浓缩得到浸膏，倒入培养皿后冷冻干燥，研磨装瓶，放于4℃保藏备用。24、上述南烛叶黑面包的制作方法，包括以下步骤：25、（1）制备面团：称取普通全麦粉加入高筋小麦粉、南烛叶水提物和南烛叶汁搅拌使其混合均匀，常温静置8-10 h；26、（2）混合发酵：将鸡蛋、赤藓糖醇、酵母粉等加入面团，使用面包机将面团低速滚揉成型后静置发酵30 min；再向面团中加入1份的食用盐和10份的黄油，使用面包机将面团滚揉成型后静置发酵20 min后松弛30 min；27、（3）面包烘烤：烘烤发酵好的面团50 min，冷却脱模而得成品南烛叶黑面包。28、本发明公开了将上述提供给糖尿病患者食用的南烛叶黑面包的焙烤方法，将发酵松弛后的面团放入烤箱中，烘烤50 min。经过验证发现该配方的南烛叶黑面包具有南烛叶草木清香，南烛叶黑面包质地蓬松，口感劲道。且通过实验检测，该比例的南烛叶的降糖效果和消化效果都很适宜。29、本发明所述α-葡萄糖苷酶抑制剂具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性，且能够发挥降血糖作用的有效剂量为南烛叶水提物，可作为活性成分的降血糖药物、保健品或辅助降血糖食品。本发明所述α-葡萄糖苷酶抑制剂可作为唯一活性成分，也可以与其他活性成分进行复配，并根据剂型添加药学上可接受的辅料。