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改善产蛋量和/或蛋品质的方法和用途,涉及施用

发布日期:2024-08-21 浏览次数: 专利申请、商标注册、软件著作权、资质办理快速响应热线:4006-054-001 微信:15998557370


改善产蛋量和/或蛋品质的方法和用途,涉及施用
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摘要: 本发明涉及一种通过使用一种或多种微生物胞壁质酶来改善产蛋禽类的产蛋量和/或蛋品质的方法。相关技术描述胞壁质酶,也称为溶菌酶,是许多生物体作为对抗细菌的防御机制产生的一种o-糖基水解酶。该酶通过切割肽聚糖(细菌中的重要结构分子)的糖苷键而导致细菌细胞壁的水解。在其细胞壁被胞壁质酶作用削弱后,细菌细胞...
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本发明涉及一种通过使用一种或多种微生物胞壁质酶来改善产蛋禽类的产蛋量和/或蛋品质的方法。相关技术描述胞壁质酶,也称为溶菌酶,是许多生物体作为对抗细菌的防御机制产生的一种o-糖基水解酶。该酶通过切割肽聚糖(细菌中的重要结构分子)的糖苷键而导致细菌细胞壁的水解。在其细胞壁被胞壁质酶作用削弱后,细菌细胞因渗透压不平衡而裂解。胞壁质酶天然存在于许多生物体中,诸如病毒、植物、昆虫、禽类、爬行动物和哺乳动物。胞壁质酶已被分类为五个不同的糖苷水解酶(gh)家族(cazy,www.cazy.org):鸡蛋清胞壁质酶(gh22)、鹅蛋清胞壁质酶(gh23)、噬菌体t4胞壁质酶(gh24)、鞘氨醇单胞菌(sphingomonas)鞭毛蛋白(gh73)和拟鞘孢菌(chalaropsis)胞壁质酶(gh25)。来自gh23和gh24家族的胞壁质酶主要从噬菌体中发现,直到最近才在真菌中鉴定。已发现胞壁质酶家族gh25在结构上与其他胞壁质酶家族无关。由于其天然丰富,传统上从鸡蛋清中提取胞壁质酶,并且一直到最近,鸡蛋清胞壁质酶都是唯一研究用于动物饲料的胞壁质酶。从鸡蛋清中提取的胞壁质酶是可在商业市场上获得的主要产品,但它不切割例如金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)细胞壁中的n,6-o-二乙酰胞壁酸,并且因此无法裂解这种尤其重要的人类病原体(masschalck b、deckers d、michiels cw(2002),j food prot.65(12):1916-23)。wo/2019/121937公开了一种包含真菌gh24胞壁质酶或gh25胞壁质酶的动物饲料组合物及其用于改善营养物和能量在动物中的回肠消化率的用途。wo/2019/121938公开了真菌gh24胞壁质酶或gh25胞壁质酶用于改善动物的营养吸收的用途。wo 2020/053274公开了真菌gh24胞壁质酶或gh25胞壁质酶用于改善单胃动物的免疫力和/或抗炎能力的用途。令人惊讶的是,本发明的发明人发现真菌胞壁质酶可以用于饲料中以改善产蛋禽类的产蛋量和/或蛋品质。背景技术:技术实现思路1、因此,本发明提供了一种用于改善产蛋禽类的产蛋量和/或蛋品质的方法,其包括向禽类施用包含一种或多种微生物胞壁质酶的组合物、动物饲料或动物饲料添加剂。2、序列表概述3、seq id no:1是来自acremonium alcalophilum的具有n端spirr的野生型gh25胞壁质酶的成熟氨基酸序列,如wo 2013/076253中所述。4、seq id no:2是来自trichophaea saccata的野生型gh24胞壁质酶的成熟氨基酸序列。5、seq id no:3是来自acremonium alcalophilum的野生型gh25胞壁质酶的成熟氨基酸序列,如wo 2013/076253中所述。6、定义7、微生物胞壁质酶:术语“微生物胞壁质酶”是指获自或可获自微生物来源的具有胞壁质酶活性的多肽。微生物来源的示例是真菌;即,胞壁质酶获自或可获自真菌界,其中术语界是分类阶元。具体地,微生物胞壁质酶获自或可获自子囊菌(ascomycota)门,诸如盘菌(pezizomycotina)亚门,其中术语门和亚门是分类阶元。8、如果多肽的分类阶元未知,则本领域技术人员可以通过对多肽进行blastp搜索(使用例如美国国家生物技术信息中心(ncib)网站http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)并将其与最接近的同系物进行比较来容易地确定。作为已知多肽的片段的未知多肽被认为属于相同的分类种(taxonomic species)。在最多至10个位置上包含取代、缺失和/或插入的未知的天然多肽或人工变体被认为来自与已知多肽相同的分类种。9、胞壁质酶活性:术语“胞壁质酶活性”是指将肽聚糖中的n-乙酰胞壁酸与n-乙酰基-d-葡糖胺残基之间或壳糊精中的n-乙酰基-d-葡糖胺残基之间的1,4-β-键酶促水解,从而由于渗透压而导致溶菌作用。胞壁质酶属于酶类别ec 3.2.1.17。胞壁质酶活性通常通过比浊法确定来测量。该方法是基于由胞壁质酶的裂解作用诱导的藤黄微球菌(micrococcusluteus)atcc 4698悬浮液的浊度变化。在适当的实验条件下,这些变化与培养基中胞壁质酶的量成正比(参见联合国粮食及农业组织(food and agriculture organisation ofthe un)的食品添加剂规范综合纲要(combined compendium of food additivespecifications)的ins1105(www.fao.org))。出于本发明的目的,根据wo 2020/053274 a1的实施例5(“胞壁质酶活性的确定”)中描述的浊度测定来确定胞壁质酶活性。在一个方面,本发明的多肽具有seq id no:1的胞壁质酶活性的至少20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%。在一个方面,本发明的多肽具有seq id no:2的胞壁质酶活性的至少20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%。在一个方面,本发明的多肽具有seq idno:3的胞壁质酶活性的至少20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%。10、片段:术语“片段”是指成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基端缺少一个或多个(例如,若干个)氨基酸的多肽或催化结构域,其中片段具有胞壁质酶活性。在一个方面,片段包含seq id no:1的至少170个氨基酸,诸如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸,并且具有胞壁质酶活性。11、在另一方面,片段包含seq id no:2的至少210个氨基酸,诸如至少215个氨基酸、至少220个氨基酸、至少225个氨基酸、至少230个氨基酸、至少235个氨基酸或至少240个氨基酸,并且具有胞壁质酶活性。12、在一个方面,片段包含seq id no:3的至少170个氨基酸,诸如至少175个氨基酸、至少177个氨基酸、至少180个氨基酸、至少185个氨基酸、至少190个氨基酸、至少195个氨基酸或至少200个氨基酸,并且具有胞壁质酶活性。13、成熟多肽:术语“成熟多肽”是指经过翻译和任何翻译后修饰(诸如n-端加工、c-端截短、糖基化、磷酸化等)后处于其最终形式的多肽。14、序列同一性:两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性通过参数“序列同一性”描述。15、出于本发明的目的,使用needleman-wunsch算法确定两个氨基酸序列之间的序列同一性(needleman和wunsch,1970,j.mol.biol.48:443-453),如在emboss包的needle程序中所实现的(emboss:the european molecular biology open software suite,rice等人,2000,trends genet.16:276-277),优选版本5.0.0或更高版本。所用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5和eblosum62(blosum62的emboss版本)取代矩阵。标记“最长同一性”的needle输出(使用–nobrief选项获得)用作同一性百分比并且计算如下:16、(相同残基×100)/(比对长度-比对中的空位总数)17、变体:术语“变体”是指在一个或多个(例如,若干个)位置处包含一个或多个(若干个)氨基酸残基的改变(即取代、插入和/或缺失)的具有胞壁质酶活性的多肽。取代是指用不同的氨基酸替换占据某个位置的氨基酸;缺失是指移除占据某个位置的氨基酸;并且插入是指在占据该位置的氨基酸附近和紧跟其后添加1、2或3个氨基酸。18、在一个方面,根据本发明的胞壁质酶变体可包含1至5个;1至10个;1至15个;1至20个;1至25个;1至30个;1至35个;1至40个;1至45个;或1-50个,即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50个改变并且具有亲本胞壁质酶诸如seq id no:1、seq id no:2或seq id no:3的胞壁质酶活性的至少20%,例如至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或至少100%。

改善产蛋量和/或蛋品质的方法和用途,涉及施用