一种人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型及其

本发明属于生物医学，具体涉及一种自身免疫性脑脊髓炎模型及其建立方法。背景技术：1、多发性硬化(ms)是一种细胞免疫介导的中枢神经系统(cns)炎性脱髓鞘疾病，临床和病理表现形式复杂多样，是青壮年致残的重要原因。ms的发病涉及多种致病途径，其病因和发病机制尚未完全阐明，目前认为是由遗传和环境因素共同作用所致。目前对ms的治疗多为非特异性，急性期首选激素冲击，缓解期采用疾病修正治疗(dmt)预防复发，价格昂贵，且部分患者效果欠佳。为进一步明确ms的发病机制及评价用于临床前的药物治疗效果，迫切需要建立一种人源化的ms模型。2、目前已利用不同抗原及种属建立多种ms模型---实验性自身免疫性脑脊髓炎(eae)，每种模型的临床表现和机制不尽相同，单一模型无法概括ms疾病的复杂和多样性。此外，动物免疫系统和人免疫系统差别较大，ms作为免疫介导的疾病，部分在动物模型有效的治疗用于临床中未必有良好效果，因而建立人源化eae模型尤为重要。髓鞘碱性蛋白(mbp)、髓鞘蛋白脂蛋白(plp)和髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(mog)作为髓鞘的蛋白组成成分，成为ms的潜在抗原，已在ms患者内观察到针对这些抗原的t细胞。目前，已有多项研究利用转染人特异性t细胞受体(tcr)和人类白细胞抗原(hla)建立人源化eae模型的报道。但转染针对不同抗原的tcr和hla的鼠，以及不同背景的鼠所表现的症状不同。人mbp84-102特异性tcr和hla-dr2双转基因鼠表现eae的比例较低，但在rag-/-鼠中发病率增加，而另一种hla-dr15和人mbp85-99特异性tcr双转基因鼠则自发eae的比例较高。部分转基因鼠虽自发瘫痪比例较低，但可能出现轻微、慢性表现，病理上表现为炎性套袖、小脑受累，但无自发髓鞘脱失或轴索受累。亦有研究报道转染了其他hla的如hla-dr15、hla-dqb1*0602或人fcγrs(hfcγrs)及hla-a*0201等可出现eae表现。转基因鼠出现eae表现比例低可能与部分双转基因小鼠(hla-dr15/tcr.ob1a12)自发产生分泌il-10的调节性t细胞相关。利用转基因技术制作人源化转基因模型周期长、费用昂贵，且症状表现差异大，故目前未能广泛应用，故建立模拟人类免疫系统的鼠eae模型对临床前研究尤为重要。技术实现思路1、本发明公开了一种人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型及其建立方法，目前人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型利用转基因技术建立，本发明利用人源化免疫系统鼠建立eae模型，解决了转基因技术建立过程繁琐、周期较长以及费用昂贵的问题。2、本发明的技术方案如下：3、一种人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立方法，所述方法为：首先建立人源化免疫系统鼠；然后将人源化免疫系统鼠背部注射肽段乳化剂，肽段乳化剂注射完成后腹腔注射百日咳毒素，获得人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型。4、进一步的，所述建立人源化免疫系统鼠的方法为将人源cd34+细胞经尾静脉注射至新生nog鼠体内。5、进一步的，所述新生nog鼠为出生2～3天nog鼠。6、进一步的，所述人源cd34+细胞经尾静脉注射至新生nog鼠体内的注射量为3×105细胞/只。7、进一步的，所述肽段乳化剂的制备方法为：8、步骤1：将mbp85-99肽段溶解于无菌生理盐水中，然后置于5ml螺纹注射器中；9、步骤2：取完全弗氏佐剂置于步骤1所述的5ml螺纹注射器中，与mbp85-99肽段混合；10、步骤3：排空5ml螺纹注射器内的空气后，连接三通管和另一个5ml螺纹注射器，来回抽打100～200次，乳化成油包水状态，获得肽段乳化剂。11、进一步的，所述步骤1中mbp85-99肽段的使用量为4mg，无菌生理盐水的使用量为1ml；所述mbp85-99肽段浓度为200μg/100μl。12、进一步的，所述步骤2中完全福氏佐剂的使用量为1ml，所述完全弗氏佐剂含结核分枝杆菌的浓度为4mg/ml。13、进一步的，所述步骤2中完全弗氏佐剂与mbp85-99肽段混合的比例为1:1。14、进一步的，所述百日咳毒素的配制方法为：用500μl无菌生理盐水溶解50μg百日咳毒素制备成母液，所述母液浓度为100ng/μl；取适量无菌生理盐水稀释母液，配制成百日咳毒素工作液，所述百日咳毒素工作液浓度为2ng/μl。15、一种人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型，所述人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型由上述方法制备而成。16、本发明所述方法旨在使用人pbmcs的cd34+细胞经尾静脉注射至新生nog鼠，并利用乳化的人mbp85-99肽段背部四点注射及腹腔注射百日咳毒素(ptx)建立eae模型，从而获得一种制作简单能更好模拟人免疫系统的ms模型。本模型方法制作简单、方便、周期短，人外周血单个核细胞易得，免疫缺陷鼠目前购买简便，几乎所有实验室均可完成，可推广性极强。hu-pbmc免疫重建鼠t细胞作用强，更好地模拟人ms的免疫系统，经人mbp肽段乳和ptx免疫后可获得eae症状，且病理上存在eae样表现，能更好地促进ms的药物治疗、发病机制等临床前研究，从而为ms患者带来更多获益。技术特征：1.一种人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立方法，其特征在于，所述方法为：首先建立人源化免疫系统鼠；然后将人源化免疫系统鼠背部注射肽段乳化剂，肽段乳化剂注射同时及48h腹腔注射百日咳毒素，获得人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述建立人源化免疫系统鼠的方法为将人源cd34+细胞经尾静脉注射至新生nog鼠体内。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述新生nog鼠为出生2～4天nog鼠。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述人源cd34+细胞经尾静脉注射至新生nog鼠体内的注射量为3×105细胞/只。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肽段乳化剂的制备方法为：6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤1中mbp85-99肽段的使用量为4～6mg，无菌生理盐水的使用量为1ml；所述mbp85-99肽段浓度为200～300μg/100μl。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2中完全弗氏佐剂的使用量为1ml，所述完全弗氏佐剂含结核分枝杆菌的浓度为4mg/ml。8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤2中完全弗氏佐剂与mbp85-99肽段混合的比例为1:1。9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述百日咳毒素的配制方法为：用500μl无菌生理盐水溶解50μg百日咳毒素制备成母液，所述母液浓度为100ng/μl；取适量无菌生理盐水稀释母液，配制成百日咳毒素工作液，所述百日咳毒素工作液浓度为2ng/μl，所述注射体积为200μl。10.一种人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型，其特征在于，所述人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型由权利要求1-9所述的方法制备而成。技术总结本发明公开了一种人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型及其建立方法，属于生物医学技术领域。本发明解决了目前人源化实验性自身免疫性脑脊髓炎模型建立过程繁琐、周期较长以及费用昂贵的问题。本发明通过分离人外周血单个核细胞的CD34+细胞，经处理后注射至NOG鼠中以建立人源化免疫系统鼠。随后，通过MBP85‑99乳化剂背部注射人源化免疫系统鼠，并腹腔注射百日咳毒素建立EAE模型。所述的人源化EAE模型是一种理想的模拟人免疫系统的MS模型，适用于MS的药物治疗、发病机制等临床前研究领域。技术研发人员：刘广志,杨亭亭,袁国宾受保护的技术使用者：首都医科大学附属北京安贞医院技术研发日：技术公布日：2024/3/24