湿热下注型肛瘘大鼠模型的构建方法

本发明属于动物模型构建，具体涉及一种湿热下注型肛瘘大鼠模型的构建方法。背景技术：1、肛瘘是指肛管或直肠与肛门周围皮肤相通所形成的病理性管道，临床上常见肛门局部反复流脓、疼痛和瘙痒等症状，国内肛瘘的发病率为1.67％-3.60％，总体发病率男性高于女性，国外高于国内，发病人群集中在20-40岁的青壮年。肛瘘一旦发病，手术是唯一主流的治疗方式，但是仍然存在术后复发和肛门失禁等风险。目前肛瘘发病尚不清楚，主流学说有肛隐窝腺体感染学说和中央间隙感染学说。探索肛瘘发病机制和治疗方案是目前仍需解决的问题，因此肛瘘模型就显得十分必要。2、中医将称为“肛漏”，其病因归纳为外感六淫、七情内伤、饮食不节、便秘虚劳、肛痈溃后、痔久不愈几方面导致机体阴阳失调，经络拥塞，气血不畅，正气内伤，毒邪乘虚而入，损伤脏器功能，伤及脾胃，湿热内蕴，下注肛门，郁久不化，进而化热，热腐成脓，日久成漏。临床上肛漏的病人大多以湿热下注的证型为主，因此构建湿热下注型肛瘘动物模型对肛瘘的基础研究至关重要。3、随着肛瘘的手术成功率不断提高，手术治疗肛瘘已达到瓶颈期，非手术干预技术治疗肛瘘被提出，但基础研究少，疗效缺乏临床前验证，这与肛瘘动物模型尚不完善有关。目前肛瘘模型类型较多，尚不统一，造模动物主要集中在猪、狗、兔、鼠四种动物，目前比较公认的造模方式以钢丝或导管在动物肛旁挂线为主，且以克罗恩病肛瘘模型多见，仍缺乏与中医临床上病证结合的动物模型。国内目前以小型动物造模为主，因其内外括约肌结构与人类类似，且容易获得，成本较低，常见的动物背部创面模拟肛瘘术后创面愈合模型，严格来说不是真正意义上的肛瘘，而丝挂线造模在喂养过程中存在啃咬脱落情况，成模率较低，钢丝挂线造模过程由于钢丝两端头较钝，穿入内外括约肌过程中存在出血量较多的情况。4、现有技术cn113974887a公开了一种感染性肛瘘动物模型的构建方法。该构建方法使用pvc包裹铝丝穿过肛门括约肌形成创口，同时饲喂葡聚糖硫酸钠盐饮用水引发肠道炎症反应，从而获得肛瘘验证模型。但是，该方法使用的葡聚糖硫酸钠(dss)是本领域公知的结肠炎造模试剂，会在结肠全段引发炎症反应(如溃疡性结肠炎)，无法将病灶局限在肛周，也无法模拟临床非结肠炎患者的肛瘘模型。5、现有技术cn115349498a公开了一种湿热型子宫内膜炎小鼠模型的构建方法。具体公开了于湿热环境下采用高脂高糖饲料对小鼠进行饲养，灌喂油和白酒，得到湿热症候模型小鼠；进一步对湿热症候模型小鼠进行子宫内膜炎病症模型造模，得到湿热型子宫内膜炎小鼠模型。但是，该方法仍需要外源性地使用脂多糖(lps)进行子宫腔内注射构建炎症模型，无法模拟临床自然条件下细菌感染的疾病发生情况。同时，lps应用于肠道也有很大风险引发结肠炎。6、此外，本领域还存在一些括约肌穿刺造模方法，但是，此类方法仅是通过人工地穿透括约肌形成瘘管，无法模拟临床肛瘘患者湿热下注、腹泻、肛周炎症的情况，也无法用于相关证型中医疗法的研究。7、因此，本领域需要开发一种不使用dss、lps等炎症刺激药物、模拟临床肛瘘发病的湿热下注型肛瘘造模方法。技术实现思路1、本发明的目的就是提供一种不使用dss、lps等炎症刺激药物、模拟临床肛瘘发病的湿热下注型肛瘘造模方法。2、在本发明的第一方面，提供了一种湿热下注型肛瘘大鼠模型的构建方法，所述方法包括以下步骤：3、1)将大鼠饲养于湿性垫料环境下5-10天，每日饲喂高脂高糖饲料，隔日灌胃白酒，从而获得湿热下注型证候大鼠；4、2)对所述湿热下注型证候大鼠进行肛瘘造模，从而获得湿热下注型肛瘘大鼠模型。5、在另一优选例中，所述步骤1)中，将大鼠饲养于湿性垫料环境下7-8天。6、在另一优选例中，所述环境的温度为20-26℃，湿度为45-55％。7、在另一优选例中，所述的大鼠是spf级sd大鼠。8、在另一优选例中，所述的通过向大鼠饲养箱垫料中喷入200-250ml温水，从而得到所述湿性垫料环境。9、在另一优选例中，所述的高脂高糖饲料由以下组分组成：普通饲料中加入8％-15％的蜂蜜以及10％-15％的猪油。10、在另一优选例中，所述的高脂高糖饲料由以下组分组成：普通饲料加入10％蜂蜜和12％猪油。11、在另一优选例中，所述的白酒为50°-56°白酒，较佳地为52°-54°。12、在另一优选例中，所述的白酒为52°高粱红或二锅头。13、在另一优选例中，所述的灌胃白酒剂量为每次10-20ml/kg。14、在另一优选例中，所述方法中，除高脂高糖饲料和白酒外，不使用其他食物或药物处理所述大鼠。15、在另一优选例中，步骤2)中，包括步骤：使用不锈钢别针穿透所述湿热下注型证候大鼠的肛门内外括约肌并固定，从而形成瘘管隧道。16、在另一优选例中，步骤2)中，所述不锈钢别针为00号2.3cm别针。17、在另一优选例中，步骤2)中，在大鼠肛门内肛缘附近进针，穿过肛门内外括约肌，在肛门外出针并固定，从而形成瘘管隧道。18、在另一优选例中，步骤2)中，隔天转动不锈钢别针，防止与肛周组织粘连。19、在另一优选例中，步骤2)中，形成瘘管隧道后，在步骤1)的条件下继续饲养所述大鼠25-40天，从而获得湿热下注型肛瘘大鼠模型。20、在另一优选例中，步骤2)中，继续饲养所述大鼠30-35天。21、在另一优选例中，所述的方法由所述步骤1)-2)组成。22、在本发明的第二方面，提供了一种用本发明第一方面所述方法构建的肛瘘大鼠模型。23、应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。技术特征：1.一种湿热下注型肛瘘大鼠模型的构建方法，所述方法包括以下步骤：2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述环境的温度为20-26℃，湿度为45-55％。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中，将大鼠饲养于湿性垫料环境下7-8天。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的大鼠是spf级sd大鼠。5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的高脂高糖饲料由以下组分组成：普通饲料中加入8％-15％的蜂蜜以及10％-15％的猪油。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的灌胃白酒剂量为每次10-20ml/kg。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤2)中，包括步骤：使用不锈钢别针穿透所述湿热下注型证候大鼠的肛门内外括约肌并固定，从而形成瘘管隧道。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述不锈钢别针为00号2.3cm别针。9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，形成瘘管隧道后，在步骤1)的条件下继续饲养所述大鼠25-40天，从而获得湿热下注型肛瘘大鼠模型。10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的方法由所述步骤1)-2)组成。技术总结本发明提供了湿热下注型肛瘘大鼠模型的构建方法。具体地，本发明在湿热环境下，采用高脂高糖饲料及白酒对大鼠进行饲喂，同时对大鼠肛周进行不锈钢别针虚挂，从而形成肛周瘘管，得到湿热下注型肛瘘大鼠模型。本发明的构建方法填补了湿热下注型肛瘘动物模型的空白，采用病证结合的方法进行肛瘘造模，能够为临床上最常见的肛瘘中医证型的治疗和机制探讨提供可靠的模型支持。技术研发人员：叶倩倩,汪庆明,梅祖兵,王泽惠,柳奕诚,陈博,毛畅,李莹莹受保护的技术使用者：上海中医药大学附属曙光医院技术研发日：技术公布日：2024/5/19