一种基于小型猪的银屑病动物模型的构建方法与

本发明属于生物，具体涉及一种基于小型猪的银屑病动物模型的构建方法。背景技术：1、银屑病俗称“牛皮癣”，是一种因皮肤代谢障碍产生的慢性以鳞屑性皮损为主要特征的慢性炎症性皮肤病，常见于四肢伸侧、头皮和背部，临床表现为红色丘疹或斑块，局限的皮肤表面覆盖银白色鳞屑，常反复发作，严重时皮肤受损，大量脱屑，疼痒难耐，对患者的身心健康带来严重的损害。据我国流行病学调查结果显示，自然人群中银屑病的患病率为0.1％-0.3％，不同人群存在差异。2、银屑病动物模型有助于研究银屑病发病机制及开发抗银屑病药物。动物模型的类型可分为自发性动物模型(例如鳞片状皮肤突变鼠)、基因工程动物模型、异体移植动物模型、诱发性动物模型等，其中，诱发性动物模型主要采用紫外线照射、化学刺激剂、药物外涂或采用缺乏必需脂肪酸的饲料饲喂模型动物(通常采用小鼠、大鼠或豚鼠)，造成表皮过度增生。3、通常，银屑病动物模型研究主要采用咪喹莫特乳膏连续涂抹小鼠背部皮肤7-8天制备出短期急性炎症模型，但5％咪喹莫特乳膏是toll样受体7/8激动剂，激活固有免疫系统导致中性粒细胞、γδt细胞在皮损浸润，产生炎症因子、趋化因子等，促进或加重银屑病样皮损改变，长期连续使用，背部皮损会逐渐稳定或减轻，引起小鼠脱水及体重减轻，可致小鼠死亡，连续长期外用不能作为银屑病的慢性观察模型。4、为解决上述技术问题，公开号为cn114568386b的专利文献公开一种建立慢性银屑病炎症动物模型的方法，包括：s1.将建模小鼠按照标准饲养方式饲养，将小鼠分为两组，第一组为对照组con，不做任何处理；第二组为实验组imq；s2.在准备造模的前两天，将小鼠背部按区域分为至少两部分，先将第一部分毛发脱去后，采用咪喹莫特乳膏均匀涂抹；小鼠第一部分的毛发有再次长出迹象，将小鼠背部的第二部分毛发脱去，同样的方法继续涂抹；以此类推，建立银屑病慢性炎症动物模型；s2中，将小鼠背部分为不同的部分，对脱去毛发的区域，采用50mg的5％咪喹莫特乳膏均匀涂抹，连用5天停用2天为一个周期，连续涂抹两个周期；s3.验证慢性银屑病炎症动物模型是否成功复制银屑病；采用改良的银屑病皮损面积和严重程度指数mpasi评分标准评价小鼠背部皮损严重程度，给出mpasi分值；组织病理学染色检测小鼠皮损组织病理学变化，酶联免疫吸附试验elisa法检测血清中炎性指标il-6、tnf-α水平；当mpasi分值大于3分，和实验组imq的血清il-6水平高于对照组con的血清il-6水平，及实验组imq的血清tnf-α水平高于对照组con的血清tnf-α水平时，成功构建得到慢性银屑病炎症动物模型。该方案通过间断外用方法，建立银屑病慢性炎症动物模型，有效模拟银屑病在人体慢性反复的发病过程，避免连续长期外用咪喹莫特乳膏导致的建模鼠背部皮损逐渐稳定或减轻，从而无法成为银屑病的慢性观察模型的缺陷。5、然而，该方案所采用的模型动物为小鼠，而小鼠的体型、器官大小、生理、病理等方面均与人相差巨大，构建得到的动物模型不能真实地模拟人类正常的生理、病理状态。并且，该方法所采用的炎症指标il-6为多向性炎症因子，与多种疾病相关，并非银屑病的特异性指标(参见“血清crp、il-6与典型肿瘤标志物检测用于胃癌患者中的临床有效性”，李再来，临床检验杂志(电子版)，2017年第6卷第1期，公开日2017年3月31日)，采用炎症指标il-6判断是否构建成功构建银屑病动物模型，结果并不准确，构建得到的动物模型不够可靠。6、此外，相关技术中，亦有以小型猪为模型动物构建银屑病动物模型的，例如公开号为cn115806981a的专利文献采用crispr/cas9技术联合双grna编辑进行tnip1基因的敲除，模拟银屑病的遗传特征，并获得tnip1基因敲除的单细胞(巴马猪细胞)克隆。然而，该方案为细胞层面的动物模型，其在后期是否能够出现银屑病的病理特征无法确认，且该方案的模型构建周期较长，自开始构建模型到直接用于人体，其周期长达数月之久，且步骤繁杂，成本较高。技术实现思路1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于小型猪的银屑病动物模型的构建方法，以获得一种更可靠、更具代表性的简单、快速、成本低的银屑病动物模型。2、为实现上述目的，本发明的技术方案如下：3、在一些实施例中，本发明提供一种基于小型猪的银屑病动物模型的构建方法，包括以下步骤：4、以小型猪为模型动物，在其皮肤上划定给药区域，在所述给药区域施用银屑病诱导剂，持续施用至少7天，优选为7-14天，更优选为12-14天，构建得到所述基于小型猪的银屑病动物模型。5、在一些实施例中，所述银屑病诱导剂选自咪喹莫特乳膏。6、在一些实施例中，给药频率为每天至少1次。7、在一些实施例中，每次给药量为1.0-1.5mg/cm2。8、在一些实施例中，所述咪喹莫特乳膏中咪喹莫特的质量浓度为4wt％-6wt％。9、在一些实施例中，所述小型猪选自巴马香猪、滇南小耳猪、五指山小型猪、贵州小型猪、乌金猪、藏猪、台湾小型猪中的任意一种。10、在一些实施例中，所述给药区域选自背部皮肤。11、在一些实施例中，所述基于小型猪的银屑病动物模型的构建方法还包括：12、若所述基于小型猪的银屑病动物模型满足以下条件(ⅰ)至(ⅳ)中的至少一个，则构建成功：13、(ⅰ)所述给药区域出现银屑病表型特征；14、(ⅱ)所述给药区域出现银屑病病理特征；15、(ⅲ)给药后小型猪体内白细胞介素17(即il-17)表达量超过预设白细胞介素17含量阈值；16、(ⅳ)给药后小型猪体内肿瘤坏死因子α(即tnf-α)表达量超过预设肿瘤坏死因子α含量阈值。17、在一些实施例中，所述条件(ⅲ)和(ⅳ)还包括：取样，测定小型猪体内白细胞介素17和肿瘤坏死因子α表达量，样品选自血清、血浆、全血、尿液、脑脊液、胸水、腹水、关节液、所述给药区域的皮肤组织中的至少一种。18、如上所述，本发明的基于小型猪的银屑病动物模型的构建方法，具有以下有益效果：19、(1)与其他动物相比，小型猪与人类的皮肤相似度最高，其毛囊结构与人类接近，毛发密度根据部位不同(颈部、耳部、背部)有更多的研究部位选择，本发明以与人类皮肤结构、皮肤病理学更相似的小型猪为模型动物构建银屑病动物模型，能够提高银屑病动物模型的可靠性。20、(2)与现有技术中采用小鼠、大鼠、豚鼠等模型动物构建银屑病动物模型需进行后续猪的皮肤渗透实验不同的是，本发明以小型猪为模型动物构建银屑病动物模型，省却了进行后续猪的皮肤渗透实验的流程(相关技术中，若以小鼠、大鼠、豚鼠等小型动物为模型动物构建皮肤病模型，通常需进行猪皮渗透性实验)，能够更好地将该银屑病动物模型用于研究银屑病发病机制和药物开发。21、(3)本发明采用咪喹莫特诱导方式基于小型猪活体构建银屑病动物模型，咪喹莫特能够与树突状细胞表面上的toll样受体7(tlr7)反应，诱导机体产生较多的ifn-γ细胞因子，出现皮损，该方法简单，适合在临床银屑病病理和药物研发中大规模应用，产业价值更高。22、(4)与cn115806981a不同的是，本发明直接基于小型香猪活体构建银屑病动物模型，无需进行后续病理特征验证，周期短，1-2周即可构建成功，构建得到的银屑病动物模型可直接用于研究银屑病发病机制和药物开发。23、(5)本发明采用与银屑病有直接关联、特异性更高的白细胞介素17(il-17)作为生物标志物验证模型构建状态，能够提高结果的准确性。24、综上所述，本发明提供的基于小型猪的银屑病动物模型的构建方法相较于现有技术更加快速、简单、可靠、成本低，非常适合在临床银屑病病理和药物研发中大规模应用，产业价值更高。