一种提高羊草花药培养愈伤组织诱导率的方法

本发明涉及羊草培养愈伤组织的方法。背景技术：1、羊草(leymus chinensis(trin.)tzvel.)属于多年生禾本科赖草属，具有耐盐碱性强、适口性好、粗蛋白含量高等优点。但现有羊草品种缺乏，育成品种少、产量低。而羊草培育新品种，目前广泛采用种子繁殖和分株繁殖的方式；上述羊草育种技术落后，优质种质资源产生率低且育种时间需要8～10年，严重制约了羊草新品种培育的进程。即便采用种子和幼穗作为外植体的组织培养技术，仍然存在愈伤组织的诱导率低，羊草育种年限长的问题。技术实现思路1、本发明的目的是为了加快羊草新品种培育，而提供的一种提高羊草花药培养愈伤组织诱导率的方法。2、本发明提高羊草花药培养愈伤组织诱导率的方法，按以下步骤进行：3、一、选取羊草不同生态型杂交f1代植株的幼穗；4、二、幼穗用湿纸巾包裹剪口处保湿，然后在幼穗外部裹保鲜膜将幼穗整体包严，防止水分流失；之后避光放置在4℃环境中低温处理2～5天；5、三、低温处理后的幼穗剪去旗叶和茎秆，用酒精消毒，然后用灭菌的蒸馏水冲洗，去除表面酒精；再用次氯酸钠溶液浸泡，之后用灭菌的蒸馏水冲洗幼穗；6、四、在无菌环境中用镊子剥开幼穗的旗叶叶鞘，取出幼穗后用剪刀分别剪去幼穗上部和下部的小穗，保留中间的小穗；取上述保留的小穗中最外面的两个小花，将单个小花打开，露出里面的花药，用镊子小心的夹出花药摆放在诱导培养基上，然后将培养皿封闭后放置在27±1℃恒温、黑暗条件下诱导培养出愈伤组织；7、其中，步骤一选择杂交f1代羊草植株抽穗早期至抽穗中期的幼穗；8、步骤一中亲本为♀灰绿型×♂黄色型、♀黄绿型×♂灰绿型或♀黄色型×♂黄绿型；9、步骤四中的诱导培养基为ms+2.0mg/l 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-d)+30g/l蔗糖+7g/l琼脂。10、进一步的，步骤一获取的幼穗剪口朝下插入装有清水的容器中保存、运输。11、进一步的，步骤一中在天气晴好、气温稳定的条件下，选择上午9:00-10:00和/或下午14:00-15:00的时间段剪下幼穗。12、进一步的，步骤一中幼穗剪口位于羊草植株倒二节节点。13、进一步的，保留的中间小穗数量为6～8个。14、进一步的，步骤二中幼穗外部用2～3层保鲜膜包裹。15、本发明中幼穗的抽出部分占整穗长的1/3为羊草植株抽穗早期，幼穗的抽出部分占整穗长的1/2为羊草植株抽穗中期。16、本发明采用的单倍体育种技术在两代内就可以获得类型丰富、遗传背景纯合的育种材料，缩短了优质品种的选育时间，是实现作物育种优化的快速途径，具有重要应用价值。花药培养技术是产生单倍体的主要途径之一，相比种子和幼穗作为外植体的组织培养技术难度更高。本发明通过花药培养获得羊草单倍体，加倍后能快速获得纯合系育种材料，而且能够进一步的大幅提升愈伤组织的诱导率，可缩短羊草育种年限，提高育种效率；为获得更多优质羊草种质资源提供新的途径。技术特征：1.一种提高羊草花药培养愈伤组织诱导率的方法，其特征在于，该方法按以下步骤进行：2.根据权利要求1所述的提高羊草花药培养愈伤组织诱导率的方法，其特征在于，步骤一获取的幼穗剪口朝下插入装有清水的容器中保存、运输。3.根据权利要求1或2所述的提高羊草花药培养愈伤组织诱导率的方法，其特征在于，步骤一中在天气晴好、气温稳定的条件下，选择上午9:00-10:00和/或下午14:00-15:00的时间段剪下幼穗。4.根据权利要求3所述的提高羊草花药培养愈伤组织诱导率的方法，其特征在于，步骤一中幼穗剪口位于羊草植株倒二节节点。5.根据权利要求4所述的提高羊草花药培养愈伤组织诱导率的方法，其特征在于，保留的中间小穗数量为6～8个。技术总结一种提高羊草花药培养愈伤组织诱导率的方法，它涉及羊草培养愈伤组织的方法。本发明方法：一、选取羊草杂交F1代植株的幼穗；二、低温处理；三、消毒清洗；四、取花药摆放在诱导培养基上，然后恒温、黑暗条件下诱导培养出愈伤组织。本发明通过花药培养获得羊草单倍体，加倍后能快速获得纯合系育种材料，而且能够进一步的大幅提升愈伤组织的诱导率，可缩短羊草育种年限，提高育种效率；为获得更多优质羊草种质资源提供新的途径。技术研发人员：孙梦丹,马红媛,武自念,李景鹏,张雅荣受保护的技术使用者：中国科学院东北地理与农业生态研究所技术研发日：技术公布日：2024/5/19