一种紫乐锦组培方法

本发明属于植物组织培养，具体涉及一种紫乐锦组培方法。背景技术：1、多肉植物一般指根、茎、叶三种营养器官中至少有一种是肥厚多汁具备储藏大量水分功能的植物。多肉植物也称多浆植物或多汁植物，其最显著的特点是植物营养器官的某一部分薄壁组织发达，用以水分和养分的贮藏，因其造型肥厚可爱，奇特多彩，观赏价值高，广受人们喜爱；尤其是一些自然变异的珍贵品种，受限于种源稀缺加上繁殖率低、繁殖周期长、增殖速度慢等问题，难以满足市场需要。利用组织培养技术筛选适宜的外植体和培养基组合物来快速繁殖多肉植物是解决珍稀多肉植物繁殖量和需求量的快速高效的方法，且对于保存多肉植物优良的种质资源有着重要意义。2、紫乐（graptopetalum 'purple delight'），又名紫悦，为景天科风车草属多年生肉质草本植物，其叶片绿色略带粉紫色，肥厚、光滑，表面有白粉，呈莲座状排列。紫乐锦为紫乐的锦化品种，叶片颜色呈现白、粉和黄等颜色的锦斑，具有很高的观赏价值。锦化是指多肉植物因为环境的影响或者内在的基因突变导致叶片颜色发生改变。普通的紫乐叶片多呈绿色而无白色、黄色或粉色的锦斑，紫乐锦的叶片在边缘或内部有白色、黄色或粉色的斑块或条纹，具有更高的观赏价值。多肉植物锦化的概率是很低的，价值也比普通品种要高很多。通常多肉植物出锦后，叶片中叶绿素的含量会降低，花青素的含量会增加，这些色素可以帮助多肉植物抵抗紫外线、干旱、寒冷等不利环境因素，提高植物的适应能力和抗逆性。当多肉植物出现锦化后，相比未锦化的品种繁殖率会更低，生长发育速度和增殖速度变慢，且更易受环境影响，目前紫乐锦的繁殖主要以叶插法和枝插法为主，难以满足市场需求。植物组织培养不受外界环境影响，可提高植物的增殖速度，且保持性状稳定。因此利用组织培养技术快速繁殖多肉植物是解决优良、名贵珍稀多肉植物品种供需矛盾的一种快速有效的方法。但是当前未见多肉锦紫乐锦组织培养快速繁殖方法的完整报道。技术实现思路1、本发明的目的是提供一种紫乐锦组培方法，应用本发明提供的组培方法进行紫乐锦组培，在较短时间内获得大量紫乐锦丛生芽和紫乐锦幼苗。2、为了解决上述问题，本发明提供了以下技术方案：3、本发明提供了一种紫乐锦组培方法，所述组培方法包括以下步骤：4、将紫乐锦叶片接种于丛生芽诱导培养基上进行诱导培养，得到紫乐锦丛生芽；所述丛生芽诱导培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.2~0.5mg/l iba、0.2~0.5mg/lnaa、1.0~4.0mg/l 6-ba、0.05~0.15mg/l ga3、25~35g/l蔗糖和6.8~8.3g/l琼脂；5、将所述紫乐锦丛生芽接种于继代增殖培养基中进行增殖继代培养，得到紫乐锦丛生芽苗；所述继代增殖培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.1~0.5mg/l naa、0.5~1.5mg/l 6-ba、0.1~1.0mg/l tzt、25~35g/l蔗糖和6.8~8.0g/l琼脂；6、将所述紫乐锦丛生芽苗转接到生根培养基上进行生根培养，得到紫乐锦苗；所述生根培养基以1/2ms培养基为基本培养基，还包括：0.3~1.0 mg/l naa、10~20g/l蔗糖和7.0~8.3g/l琼脂。7、优选的，所述丛生芽诱导培养基的ph值为5.75~5.85；所述继代增殖培养基的ph值为5.75~5.85；所述生根培养基的ph值为5.75~5.85。8、优选的，所述紫乐锦叶片的长度为1~3cm。9、优选的，转接到生根培养基的紫乐锦丛生芽苗的高度为2.0~3.0cm。10、优选的，所述诱导培养、增殖继代培养和生根培养的温度分别为24~26℃。11、优选的，所述诱导培养、增殖继代培养和生根培养均在光照条件下进行，所述光照的时间分别为12~16h/d，所述黑暗的时间分别为8~12h/d；所述光照的强度分别为2500~3200 lx。12、优选的，所述诱导培养的时间为20~30d；所述增殖继代培养的时间为30~60d；所述生根培养的时间为28~35d。13、优选的，所述增殖继代培养期间还包括一次继代培养，所述继代培养的时间为增殖继代培养后的28~32d，继代培养基为继代增殖培养基。14、优选的，所述接种前，还包括对紫乐锦外植体进行清洗和消毒；15、所述清洗包括流水冲洗，所述流水冲洗时间为2~4min；16、所述消毒的方式包括：清洗后，先用质量浓度70%~75%酒精浸泡10~20s，用无菌水冲洗2~4次；再用0.1%升汞溶液浸泡5~10min；最后用无菌水冲洗4~5次。17、本发明的有益效果：本发明提供了一种组培方法，所述组培方法包括以下步骤：18、将紫乐锦叶片接种于丛生芽诱导培养基上进行诱导培养，得到紫乐锦丛生芽；所述丛生芽诱导培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.2~0.5mg/l iba、0.2~0.5mg/lnaa、1.0~4.0mg/l 6-ba、0.05~0.15mg/l ga3、25~35g/l蔗糖和6.8~8.3g/l琼脂；19、将所述紫乐锦丛生芽接种于继代增殖培养基中进行增殖继代培养，得到紫乐锦丛生芽苗；所述继代增殖培养基以ms培养基为基本培养基，还包括：0.1~0.5mg/l naa、0.5~1.5mg/l 6-ba、0.1~1.0mg/l tzt、25~35g/l蔗糖和6.8~8.0g/l琼脂；20、将所述紫乐锦丛生芽苗转接到生根培养基上进行生根培养，得到紫乐锦苗；所述生根培养基以1/2ms培养基为基本培养基，还包括：0.3~1.0 mg/l naa、10~20g/l蔗糖和7.0~8.3g/l琼脂。21、在本发明提供的组培方法中应用了组培培养基，组培培养基中iba（3-indolebutyric acid，3-吲哚丁酸）和naa（1-萘乙酸）属于植物生长素，主要生理作用是促进细胞的分裂和伸长，在低浓度时能促进紫乐锦愈伤和丛生芽形成、以及预防未分化组织衰老和诱导生根；6-ba（6-苄氨基嘌呤）在适宜的浓度下能促进紫乐锦细胞分裂，诱导愈伤组织形成，促进非分化组织分化；ga3（gibberellic acid，赤霉素）刺激细胞分裂和伸长；tzt（trans-zeatin，反式玉米素）属于细胞分裂素，在适宜浓度下与其他外源植物激素配合促进诱导紫乐锦胚状体和丛生芽的形成；适宜浓度的iba和naa配合6-ba和ga3促进紫乐锦发芽和生长；iba、6-ba、naa、ga3和tzt共同作用下利于诱导紫乐锦丛生芽的形成和增殖，获得大量的丛生芽，进而获得一致性好、健壮的植株。实施例结果表明：利用本发明的组培方法可以获得大量的丛生芽和组培苗，最终获得一致性好、健壮的紫乐锦组培苗植株，建立紫乐锦组织培养快速繁殖技术体系。技术特征：1.一种紫乐锦组培方法，其特征在于，所述组培方法包括以下步骤：将紫乐锦叶片接种于丛生芽诱导培养基上进行诱导培养，得到紫乐锦丛生芽；2.根据权利要求1所述的组培方法，其特征在于，所述丛生芽诱导培养基的ph值为5.75~5.85；所述继代增殖培养基的ph值为5.75~5.85；所述生根培养基的ph值为5.75~5.85。3.根据权利要求1所述的组培方法，其特征在于，所述紫乐锦叶片的长度为1~3cm。4.根据权利要求1所述的组培方法，其特征在于，转接到生根培养基的紫乐锦丛生芽苗的高度为2.0~3.0cm。5.根据权利要求1所述的组培方法，其特征在于，所述诱导培养、增殖继代培养和生根培养的温度分别为24~26℃。6.根据权利要求1所述的组培方法，其特征在于，所述诱导培养、增殖继代培养和生根培养均在光照条件下进行，所述光照的时间分别为12~16h/d，所述黑暗的时间分别为8~12h/d；所述光照的强度分别为2500~3200 lx。7.根据权利要求1所述的组培方法，其特征在于，所述诱导培养的时间为20~30d；所述增殖继代培养的时间为30~60d；所述生根培养的时间为28~35d。8.根据权利要求1所述的组培方法，其特征在于，所述增殖继代培养期间还包括一次继代培养，所述继代培养的时间为增殖继代培养后的28~32d，继代培养基为继代增殖培养基。9.根据权利要求1所述的组培方法，其特征在于，所述接种前，还包括对紫乐锦外植体进行清洗和消毒；技术总结本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种紫乐锦组培方法。本发明的紫乐锦组培方法中应用了组培培养基，所述组培培养基包括丛生芽诱导培养基、继代增殖培养基和生根培养基；在本发明提供的组培培养基中，NAA促进紫乐锦生根；适宜浓度的IBA和NAA配合6‑BA和GA