一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法与流程

本发明涉及植物组织培养，具体涉及一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法。背景技术：1、俄罗斯饲料菜，简称俄菜，又名聚合草，俗称紫草，为紫草科聚合草属多年生草本宿根性植物，原产于俄罗斯的北高加索和西伯利亚等地。俄罗斯饲料菜是一种优质牧草，因适口性好、适应性广、抗逆性强等优点，已在我国大面积推广。俄罗斯饲料菜喜温暖、湿润气候，抗逆性和分蘖力强，根系在-40℃低温地区可越冬，对土壤要求不高，排水顺畅，以土层深厚的壤土或沙质壤土为最佳，种植第2年后，返青早、封行快、叶片覆盖度高，杂草很难生长繁衍，属于“生性随和、植地而生”的植物，同时，由于其抗寒性、抗旱性、适应性强、营养丰富且产量高，被称为“饲草之王”。2、然而，俄罗斯饲料菜结籽量极低，主要采用无性繁殖方式进行，无性繁殖的主要方法有分株法、切根法和茎秆扦插法等，目前大田中比较常用的为切根法（肉质根繁殖），但此法需要投入大量的人力，操作性不强，因此，亟待一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法。技术实现思路1、本发明为克服现有技术的不足而提供了一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，筛选出用于俄罗斯饲料菜组织培养中不同时期的最佳培养基，确定了培养基中的各激素配比，本发明中：2、6ba：6-苄氨基嘌呤；3、ch：水解酪蛋白；4、ac：活性炭；5、kt：激动素；6、2,4d：2,4-二氯苯氧乙酸；7、iaa：吲哚乙酸；8、ms：ms培养基；9、1/2ms：将ms培养基的微量元素减少到原来ms培养基的1/2。10、本发明的技术方案具体如下：11、一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，包括如下步骤：12、s1、外植体的选择与灭菌：取俄罗斯饲料菜的新叶片为外植体，进行消毒灭菌；13、s2、愈伤组织诱导：将消毒灭菌的新叶片切成小块，背面接触培养基，接种到初代培养基上培养8-12天，诱导出愈伤组织；14、所述初代培养基为：ms+6ba 1.3-1.7mg/l+ch 0.09-0.11mg/l+ac 0.08-1.2 mg/l+2,4d 0.04-0.06 mg/l；15、s3、增殖培养：将步骤s2诱导出的愈伤组织接种于增殖培养基上培养6-8天，增殖培养出不定芽；16、所述增殖培养基为：ms+6ba 0.8-1.2mg/l+ch 0.4-0.6mg/l+ac 2.5-3.5mg/l；17、s4、分化培养：将步骤s3增殖培养出的不定芽接种到分化培养基上培养8-12天，分化培养出真叶；18、所述分化培养基为：ms+6ba 0.8-1.2mg/l+ch 0.4-0.6mg/l+ac 2.5-3.5mg/l+kt0.04-0.06mg/l；19、s5、生根培养：将步骤s4分化培养出的真叶转入生根培养基中培养5-9天，获得无菌苗；20、所述生根培养基为：1/2ms+iaa 0.4-0.6mg/l+ac 2.5-3.5mg/l。21、而且，一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，包括如下步骤：22、s1、外植体的选择与灭菌：取俄罗斯饲料菜的新叶片为外植体，进行消毒灭菌；23、s2、愈伤组织诱导：将消毒灭菌的新叶片放在无菌滤纸上，切成小块，背面接触培养基，接种到初代培养基上培养10天，诱导出愈伤组织；24、所述初代培养基为：ms+6ba 1.5mg/l+ch 0.1mg/l+ac 1mg/l+2,4d 0.05mg/l；25、s3、增殖培养：将步骤s2诱导出的愈伤组织接种于增殖培养基上培养7天，增殖培养出不定芽；26、所述增殖培养基为：ms+6ba 1mg/l+ch 0.5mg/l+ac 3mg/l；27、s4、分化培养：将步骤s3增殖培养出的不定芽接种到分化培养基上培养10天，分化培养出真叶；28、所述分化培养基为：ms+6ba 1mg/l+ch 0.5mg/l+ac 3mg/l+kt 0.05mg/l；29、s5、生根培养：将步骤s4分化培养出的真叶转入生根培养基中，培养7天获得无菌苗；30、所述生根培养基为：1/2ms+iaa 0.5mg/l+ac 3mg/l。31、而且，所述步骤s2中，将新叶片切成1-2cm×1-2cm的小块。32、而且，所述步骤s1中，所述消毒灭菌的方法为：先用饱和洗衣粉水浸泡2-4分钟，超净台无菌水冲洗4-6次，再用75%的酒精浸泡25-35秒，无菌水冲洗1-3次，最后用浓度为0.1%的氯化汞溶液浸泡2-4分钟，无菌水冲洗4-6次。33、而且，所述消毒灭菌的方法为：先用饱和洗衣粉水浸泡3分钟，超净台无菌水冲洗5次，再用75%的酒精浸泡30秒，无菌水冲洗2次，最后用浓度为0.1%的氯化汞溶液浸泡3分钟，无菌水冲洗5次。34、而且，所述步骤s2中，诱导愈伤组织的温度为20-25℃，湿度为70%-80%，光照时间为10-14h/d，光照强度为2500-3500lx。35、而且，所述步骤s3中，增殖培养的温度为20-25℃，湿度为70%-80%，光照时间为10-14h/d，光照强度为2500-3500lx。36、而且，所述步骤s4中，分化培养的温度为20-25℃，湿度为70%-80%，光照时间为10-14h/d，光照强度为2500-3500lx。37、而且，所述步骤s5中，转入生根培养基中培养的温度为20-25℃，湿度为70%-80%，光照时间为10-14h/d，光照强度为2500-3500lx。38、而且，所述步骤s2-s5中，均采用无菌培养，对培养环境进行10-20min的消毒灭菌后再进行培养。39、与现有技术相比，本发明的有益效果在于：40、本发明筛选出用于俄罗斯饲料菜组织培养中不同时期的最佳培养基，确定了俄罗斯饲料菜组织培养快繁过程中各阶段的培养基分别为初代培养基为、增殖培养基、分化培养基、生根培养基，并确定了的各培养基中适宜俄罗斯饲料菜生长的配方及配比，采用本发明的培养基，诱导率最高为95%，增殖率最高为95%，分化率最高为95%，生根率最高为95%，效果显著。技术特征：1.一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：2.如权利要求1所述的一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，其特征在于，包括如下步骤：3.如权利要求1或2所述的一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，其特征在于，所述步骤s2中，将新叶片切成1-2cm×1-2cm的小块，背面接触培养基，接种到初代培养基上。4.如权利要求1或2所述的一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，其特征在于，所述步骤s1中，所述消毒灭菌的方法为：先用饱和洗衣粉水浸泡2-4分钟，超净台无菌水冲洗4-6次，再用75%的酒精浸泡25-35秒，无菌水冲洗1-3次，最后用浓度为0.1%的氯化汞溶液浸泡2-4分钟，无菌水冲洗4-6次。5.如权利要求4所述的一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，其特征在于，所述步骤s1中，所述消毒灭菌的方法为：先用饱和洗衣粉水浸泡3分钟，超净台无菌水冲洗5次，再用75%的酒精浸泡30秒，无菌水冲洗2次，最后用浓度为0.1%的氯化汞溶液浸泡3分钟，无菌水冲洗5次。6.如权利要求1或2所述的一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，其特征在于，所述步骤s2中，诱导愈伤组织的温度为20-25℃，湿度为70%-80%，光照时间为10-14h/d，光照强度为2500-3500lx。7.如权利要求1或2所述的一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，其特征在于，所述步骤s3中，增殖培养的温度为20-25℃，湿度为70%-80%，光照时间为10-14h/d，光照强度为2500-3500lx。8.如权利要求1或2所述的一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，其特征在于，所述步骤s4中，分化培养的温度为20-25℃，湿度为70%-80%，光照时间为10-14h/d，光照强度为2500-3500lx。9.如权利要求1或2所述的一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，其特征在于，所述步骤s5中，转入生根培养基中培养的温度为20-25℃，湿度为70%-80%，光照时间为10-14h/d，光照强度为2500-3500lx。10.如权利要求1或2所述的一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，其特征在于，所述步骤s2-s5中，均采用无菌培养，对培养环境进行10-20min的消毒灭菌后再进行培养。技术总结本发明公开一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法，S1、外植体的选择与灭菌：取俄罗斯饲料菜的新叶片为外植体，进行消毒灭菌；S2、愈伤组织诱导：将消毒灭菌的新叶片，切成小块，背面接触培养基，接种到初代培养基上，培养8‑12天诱导出愈伤组织；S3、增殖培养：将愈伤组织接种于增殖培养基上培养6‑8天，增殖培养出不定芽；S4、分化培养：将不定芽接种到分化培养基上培养8‑12天，分化培养出真叶；S5、生根培养：将真叶转入生根培养基中培养5‑9天，获得无菌苗；采用本发明的培养基，诱导率最高为95%，增殖率最高为95%，分化率最高为95%，生根率最高为95%，效果显著。技术研发人员：刘亚玲,马怀林,付娜娜,赵慧敏,张逸敏,杜磊,苑峰受保护的技术使用者：内蒙古草业技术创新中心有限公司技术研发日：技术公布日：2024/5/16