一种提高葡萄胚挽救育种畸形苗转化效率的方法
发布日期：2024-06-10 浏览次数： 专利申请、商标注册、软件著作权、资质办理快速响应热线：4006-054-001 微信：15998557370
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| 摘要： | 本发明涉及一种葡萄胚挽救方法，具体涉及一种提高葡萄胚挽救育种畸形苗转化效率的方法。、无核葡萄作为鲜食葡萄和制干葡萄市场的重要组成部分，对促进葡萄产业发展有着重要的作用。无核葡萄根据其授粉结实特性可分为两类：单性结实型和假单性结实型。单性结实型是指葡萄在生长发育过程中子房不经过授粉受精而直接... | ||
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本发明涉及一种葡萄胚挽救方法，具体涉及一种提高葡萄胚挽救育种畸形苗转化效率的方法。背景技术：1、无核葡萄作为鲜食葡萄和制干葡萄市场的重要组成部分，对促进葡萄产业发展有着重要的作用。无核葡萄根据其授粉结实特性可分为两类：单性结实型和假单性结实型。单性结实型是指葡萄在生长发育过程中子房不经过授粉受精而直接发育成果实，假单性结实型葡萄经过正常的授粉受精，但受精胚中途败育，胚珠不能形成正常的种子。单性结实型的葡萄未形成合子胚，其遗传信息无法传递给后代，因此在无核葡萄育种中很少利用。而假单性结实葡萄无核性状能够遗传给后代，是无核葡萄育种主要亲本材料。2、由于无核葡萄做母本杂交胚发育中途败育，随着胚挽救育种技术的发展，使得以无核葡萄作母本成为可能，丰富了杂交组合的配置，提高了后代无核的比例，缩短了育种周期，是创制无核葡萄新种质的主要方法。然而，在以无核葡萄为母本胚挽救育种过程中，杂种离体胚萌发畸形苗的出现比例占到40％左右，这严重影响了利用胚挽救技术进行无核葡萄育种的成效。3、在无核葡萄胚挽救育种过程中，畸形苗的发生是不可避免的，其所占比例的高低是影响无核葡萄育种效率的主要因素之一。将离体胚萌发畸形苗转化成为正常苗，是提高无核葡萄胚挽救育种效率的主要路径。技术实现思路1、本发明的目的是提供一种提高葡萄胚挽救育种畸形苗转化效率的方法，能够对葡萄畸形苗进行挽救，提高无核葡萄胚挽救育种效率。2、为了达到上述目的，本发明提供了一种提高葡萄胚挽救育种畸形苗转化效率的方法，该方法包含：将胚挽救畸形苗接种在转化培养基中培养，将长出真叶的小苗转移至成苗培养基中培养，以获得正常苗；对未转化为正常苗的畸形苗，再进行不定芽再生途径挽救：将畸形苗切割获取胚轴，接种到诱导培养基中进行不定芽再生培养，将分化出不定芽的外植体转至成苗培养基中，以获得正常苗；其中，所述转化培养基由以下组分组成：wpm、2mg/l6-ba、2.0mg/l iba、30g/l蔗糖、7g/l琼脂和1.5g/l活性炭；所述成苗培养基由以下组分组成：1/2ms、0.3mg/l iba、30g/l蔗糖、3g/l植物凝胶和1.5g/l活性炭；所述诱导培养基由以下组分组成：ms、0.2mg/l 6-ba、2.0mg/l iba、20g/l蔗糖和7g/l琼脂。3、优选地，将长出真叶的小苗转移至成苗培养基中培养，30d后获得正常苗。4、优选地，所述畸形苗包含：单子叶畸形、无叶无根畸形、子叶扭曲褶皱畸形、子叶融合畸形、有根无子叶畸形、有子叶无根畸形、发育停止畸形、多子叶畸形和子叶筒状畸形中任意一种或两种以上。5、优选地，将畸形苗切割获取胚轴，接种到诱导培养基中培养，30d后将分化出不定芽的外植体转至成苗培养基中，30d后获得正常苗。6、优选地，所述不定芽再生培养，光照16h和暗8h培养。7、本发明的提高葡萄胚挽救育种畸形苗转化效率的方法，具有以下优点：8、本发明对无核葡萄胚挽救育种过程中产生的畸形苗提出了有效转化为正常苗的技术方案，利用两种挽救方法对无核葡萄胚挽救产生的畸形苗转化再利用，进而提高无核葡萄胚挽救育种效率，可以将胚挽救效率由原来的4～10％左右提高到25％左右，提高无核葡萄胚挽救效率。9、与已有的单一挽救方法相比，本发明结合两种方法对无核葡萄胚挽救畸形苗转化再利用，已有技术报道的转化培养基仅针对少数畸形苗类型进行挽救，本发明挽救方法一的转化培养基进行优化后，可适用大部分畸形苗类型的挽救，且挽救效率高；本发明挽救方法二是对未在方法一中直接转化正常苗的畸形苗进行诱导不定芽再生获得正常植株，增加了挽救畸形苗的新途径，可进一步提高对畸形苗的利用率。10、本发明方法中的挽救方法一可适用8种无核葡萄胚挽救畸形苗类型(单子叶畸形、子叶扭曲褶皱畸形、子叶融合畸形、有根无子叶畸形、有子叶无根畸形、发育停止畸形、多子叶畸形、子叶筒状畸形)进行直接转化再利用，可以挽救35.69％的畸形苗；挽救方法二是对未在方法一中直接转化正常苗的畸形苗进行不定芽诱导再生获得正常植株，可以挽救33.33％的畸形苗。技术特征：1.一种提高葡萄胚挽救育种畸形苗转化效率的方法，其特征在于，该方法包含：2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将长出真叶的小苗转移至成苗培养基中培养，30d后获得正常苗。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述畸形苗包含：单子叶畸形、无叶无根畸形、子叶扭曲褶皱畸形、子叶融合畸形、有根无子叶畸形、有子叶无根畸形、发育停止畸形、多子叶畸形和子叶筒状畸形中任意一种或两种以上。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将畸形苗切割获取胚轴，接种到诱导培养基中培养，30d后将分化出不定芽的外植体转至成苗培养基中，30d后获得正常苗。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述不定芽再生培养，光照16h和暗8h培养。技术总结本发明公开了一种提高葡萄胚挽救育种畸形苗转化效率的方法，该方法包含：将胚挽救畸形苗接种在转化培养基中培养，将长出真叶的小苗转移至成苗培养基中培养，以获得正常苗；对未转化为正常苗的畸形苗，再进行不定芽再生途径挽救：将畸形苗切割获取胚轴，接种到诱导培养基中进行不定芽再生培养，将分化出不定芽的外植体转至成苗培养基中，以获得正常苗。本发明对无核葡萄胚挽救育种过程中产生的畸形苗提出了有效转化为正常苗的技术方案，利用两种挽救方法对无核葡萄胚挽救产生的畸形苗转化再利用，进而提高无核葡萄胚挽救育种效率，可以将胚挽救效率由原来的4～10％左右提高到25％左右，提高无核葡萄胚挽救效率。技术研发人员：徐炎,陈曦,窦梦茹,温雪,张雅楠,鲍文武,张琦,刘国甜受保护的技术使用者：西北农林科技大学技术研发日：技术公布日：2024/5/16
