一种基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子

本发明涉及生物，具体涉及一种基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法。背景技术：1、糖尿病(diabetes mellitus，md)是一种由胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用不足导致的代谢紊乱综合征，其主要特征为持续高血糖。据世界卫生组织统计，全球约有4.51亿人患有糖尿病，其中我国约占27％。预计到2030年，全球患病人数将增至5.52亿，其中2型糖尿病患者占绝大多数。2、科学界一直在寻找更有效、更经济的2型糖尿病治疗方法。秀丽隐杆线虫作为模式生物因其短生命周期、低成本饲养、基因组解析等特性备受关注。这些线虫受外界环境胁迫时能进入dauer期，暂停发育以应对逆境。其中，超过40个与dauer形成相关的基因被发现，包括胰岛素信号通路的关键基因daf-2。因其与人类基因的同源性，经过胰岛素信号通路刺激后，该线虫可恢复发育，仿效接受有效治疗，为针对daf-2基因的降糖药物筛选提供了模拟实验平台。同时，辣椒富含多种活性物质，近期研究发现其对于调节糖脂代谢具有潜在疗效。辣椒中的辣椒碱类、维生素类、多酚和黄酮等活性物质引起了科学家们的广泛兴趣。针对辣椒中降糖活性因子的筛选方法的提出，为相关研究人员提供了一种低成本、操作便捷的新途径，可推动更多关于糖尿病治疗的创新研究。技术实现思路1、为解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法。2、本发明公开了一种基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，包括：3、提取辣椒的降糖功能因子，所述降糖功能因子包括黄酮、多糖、多酚和蛋白；4、构建秀丽隐杆线虫模型，并通过所述秀丽隐杆线虫模型筛选出降糖功能因子；5、其中，构建所述秀丽隐杆线虫模型包括：6、培养大肠杆菌op50；7、将所述大肠杆菌op50涂抹至ngm培养板；8、所述ngm培养板培养秀丽隐杆线虫；9、通过次氯酸钠法同步化所述秀丽隐杆线虫，制得所述秀丽隐杆线虫模型。10、优选的是，所述黄酮提取方法包括称取2.0g辣椒冻干粉，置于500ml圆底烧瓶中，加入80％乙醇溶液，保持料液比例为1:40，进行超声冷凝回流提取60分钟，重复进行4-5次提取，将提取液进行离心，吸取上清液，然后在60℃下旋蒸至乙醇完全挥发，剩余液体置于-80℃预冻2小时，随后放入冻干机中进行两天的冻干处理，获得所述黄酮。11、优选的是，所述多糖提取方法包括取10g辣椒粉末，加入250ml蒸馏水放入蒸馏瓶中，设置旋转蒸发仪为80℃、120rpm提取三小时；通过四层纱布过滤两次，得到提取液后，利用真空泵过滤两次，获得滤液；再将所述滤液进行减压蒸馏，接着加入4倍体积的无水乙醇，在4℃条件下静置过夜；之后以7500转/分钟、15分钟条件下离心，取沉淀物，将所述沉淀物置于-80℃预冻2小时后再放入冻干机中冻干，获得所述多糖。12、优选的是，所述多酚提取方法包括在1升烧杯中称取20.0g辣椒冻干粉，加入1升无菌去离子水后加入转子中，并用保鲜膜封口；进行磁力搅拌0.5小时，随后在80℃条件下浸提2小时，以8000转/分钟离心15分钟，弃去上清液，在沉淀中加入体积分数为60％的乙醇后，再次磁力搅拌0.5小时，在80℃下浸提2小时，随后超声40分钟，在8000转/分钟条件下离心15分钟，取上清液，将上清液于50℃下旋蒸浓缩，浓缩液置于-80℃预冻2小时，再进行冻干处理，获得所述多酚。13、优选的是，所述蛋白提取方法包括取20g辣椒冻干粉放入1000ml烧瓶中，加入0.4mol/l的氢氧化钠，56℃下超声102分钟，将超声处理后的溶液在常温下以3000转/分钟离心15分钟，提取上清液；然后进行抽滤，得到澄清上清液，加入盐酸调节至ph值3.6；离心机中以3000转/分钟离心15分钟后，弃去上清液；将沉淀物收集到已经活化的透析袋中，分别置于20％、30％、40％、50％硫酸铵缓冲液中透析一天；透析好的沉淀物置于真空冻干机中冷冻干燥，获得所述蛋白。14、优选的是，培养大肠杆菌op50包括配制lb固体培养基和配制lb液体培养基，大肠杆菌菌液在所述lb固体培养基上进行划线分离，37℃培养12小时获得单克隆菌落；将所述单克隆菌落接种至所述lb液体培养基，37℃摇床培养12小时扩增，取得菌液备用，菌株保存在30％甘油中，-80℃冻存；15、其中，所述lb固体培养基包括10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10g nacl、20g琼脂和去离子水，所述lb液体培养基包括10g胰蛋白胨、5g酵母提取物和10g nacl。16、优选的是，所述ngm培养板包括3g nacl、20g agar、2.5g peptone以及添加去离子水至975ml。17、优选的是，所述ngm培养板培养秀丽隐杆线虫包括将ngm培养基高压灭菌后冷却至55℃左右，加入灭菌的cacl2、mgso4、fudr和磷酸缓冲液，混匀后倒入板中，对于高糖板、给药板和普通板，加入灭菌的葡萄糖溶液、经0.22μm滤膜的药液和相同体积的去离子水，将涂布有大肠杆菌op50菌液的ngm培养板倒置于37℃培养箱培养8小时以上，接种线虫后，置于20℃生化培养箱培养。18、优选的是，通过次氯酸钠法同步化所述秀丽隐杆线虫包括将抱卵期线虫冲洗并裂解，然后清洗除去多余的大肠杆菌，离心后加入等体积裂解液震荡至线虫完全裂解，清洗并孵化12小时，获得同步化线虫。19、与现有技术相比，本发明的有益效果为：20、本发明对降糖辣椒的研究不仅能够推动糖尿病治疗相关食品和药品的开发，还可以提高辣椒种植户的经济收入，促进乡村振兴战略的实施，具有广阔的发展前景与应用价值。技术特征：1.一种基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，其特征在于，包括：2.根据权利要求1所述的基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，其特征在于，所述黄酮提取方法包括称取2.0g辣椒冻干粉，置于500ml圆底烧瓶中，加入80％乙醇溶液，保持料液比例为1:40，进行超声冷凝回流提取60分钟，重复进行4-5次提取，将提取液进行离心，吸取上清液，然后在60℃下旋蒸至乙醇完全挥发，剩余液体置于-80℃预冻2小时，随后放入冻干机中进行两天的冻干处理，获得所述黄酮。3.根据权利要求1所述的基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，其特征在于，所述多糖提取方法包括取10g辣椒粉末，加入250ml蒸馏水放入蒸馏瓶中，设置旋转蒸发仪为80℃、120rpm提取三小时；通过四层纱布过滤两次，得到提取液后，利用真空泵过滤两次，获得滤液；再将所述滤液进行减压蒸馏，接着加入4倍体积的无水乙醇，在4℃条件下静置过夜；之后以7500转/分钟、15分钟条件下离心，取沉淀物，将所述沉淀物置于-80℃预冻2小时后再放入冻干机中冻干，获得所述多糖。4.根据权利要求1所述的基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，其特征在于，所述多酚提取方法包括在1升烧杯中称取20.0g辣椒冻干粉，加入1升无菌去离子水后加入转子中，并用保鲜膜封口；进行磁力搅拌0.5小时，随后在80℃条件下浸提2小时，以8000转/分钟离心15分钟，弃去上清液，在沉淀中加入体积分数为60％的乙醇后，再次磁力搅拌0.5小时，在80℃下浸提2小时，随后超声40分钟，在8000转/分钟条件下离心15分钟，取上清液，将上清液于50℃下旋蒸浓缩，浓缩液置于-80℃预冻2小时，再进行冻干处理，获得所述多酚。5.根据权利要求1所述的基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，其特征在于，所述蛋白提取方法包括取20g辣椒冻干粉放入1000ml烧瓶中，加入0.4mol/l的氢氧化钠，56℃下超声102分钟，将超声处理后的溶液在常温下以3000转/分钟离心15分钟，提取上清液；然后进行抽滤，得到澄清上清液，加入盐酸调节至ph值3.6；离心机中以3000转/分钟离心15分钟后，弃去上清液；将沉淀物收集到已经活化的透析袋中，分别置于20％、30％、40％、50％硫酸铵缓冲液中透析一天；透析好的沉淀物置于真空冻干机中冷冻干燥，获得所述蛋白。6.根据权利要求1所述的基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，其特征在于，培养大肠杆菌op50包括配制lb固体培养基和配制lb液体培养基，大肠杆菌菌液在所述lb固体培养基上进行划线分离，37℃培养12小时获得单克隆菌落；将所述单克隆菌落接种至所述lb液体培养基，37℃摇床培养12小时扩增，取得菌液备用，菌株保存在30％甘油中，-80℃冻存；7.根据权利要求1所述的基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，其特征在于，所述ngm培养板包括3g nacl、20g agar、2.5g peptone以及添加去离子水至975ml。8.根据权利要求7所述的基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，其特征在于，所述ngm培养板培养秀丽隐杆线虫包括将ngm培养基高压灭菌后冷却至55℃左右，加入灭菌的cacl2、mgso4、fudr和磷酸缓冲液，混匀后倒入板中，对于高糖板、给药板和普通板，加入灭菌的葡萄糖溶液、经0.22μm滤膜的药液和相同体积的去离子水，将涂布有大肠杆菌op50菌液的ngm培养板倒置于37℃培养箱培养8小时以上，接种线虫后，置于20℃生化培养箱培养。9.根据权利要求8所述的基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，其特征在于，通过次氯酸钠法同步化所述秀丽隐杆线虫包括将抱卵期线虫冲洗并裂解，然后清洗除去多余的大肠杆菌，离心后加入等体积裂解液震荡至线虫完全裂解，清洗并孵化12小时，获得同步化线虫。技术总结本发明公开了一种基于秀丽隐杆线虫模型的辣椒降糖功能因子筛选方法，包括提取辣椒的降糖功能因子，降糖功能因子包括黄酮、多糖、多酚和蛋白；构建秀丽隐杆线虫模型，并通过秀丽隐杆线虫模型筛选出降糖功能因子；构建秀丽隐杆线虫模型包括：培养大肠杆菌OP50；将大肠杆菌OP50涂抹至NGM培养板；NGM培养板培养秀丽隐杆线虫；通过次氯酸钠法同步化秀丽隐杆线虫，制得秀丽隐杆线虫模型。本发明对降糖辣椒的研究不仅能够推动糖尿病治疗相关食品和药品的开发，还可以提高辣椒种植户的经济收入，促进乡村振兴战略的实施，具有广阔的发展前景与应用价值。技术研发人员：王剑峰,王君怡,刘新华,曹春信受保护的技术使用者：浙江师范大学行知学院技术研发日：技术公布日：2024/5/16