含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂及其制备方法

本发明涉及蜡样芽孢杆菌抑制剂领域技术，尤其是指一种含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂及其制备方法和应用。背景技术：1、油茶(camellia oleifera)为山茶科山茶属植物。油茶皂素是从油茶籽饼粕中提取的一类齐墩果烷型五环三萜类皂苷混合物，具有抗菌、抗炎、抗高血压、抗肿瘤、杀虫驱虫等功效。2、蜡样芽孢杆菌(bacillus cereus)作为一种常见的食源性致病菌，会引起人类腹泻、呕吐等食物中毒症状。它在自然界可以以生物膜形态粘附于食品加工设备和食品器具表面，使其难以去除，给人类食品安全带来了严重危害。3、蜡样芽孢杆菌具有附着在奶牛厂生产设备的不锈钢表面并形成生物膜的能力。与细菌浮游态相比，以生物膜形式存在的细菌对抗菌素和物理清洁等更有抵抗力，给乳制品业的食品安全带来了巨大挑战。因此抑制蜡样芽孢杆菌生物膜形成，是当下处理乳制品等行业食品污染的热点和新策略。4、目前，采用抗生素抑制蜡样芽孢杆菌生物膜形成的手段面对较多问题。一是抗生素的过量使用，不仅导致畜牧农产品中的药物残留和污染环境，还导致越来越多细菌对抗生素的耐药性增强。因此，迫切需要寻找替代抗生素的物质来解决细菌生物膜所带来的危害。如今绿色环保、毒副作用下的植物源抑菌剂、微生物制剂等是国内外的研究热点。5、群体感应抑制剂是一类以群体感应系统为靶标，干扰细菌生物膜形成、毒力因子产生或致病基因表达的物质，与传统抗生素不同，群体感应抑制剂在对细菌生长影响最小化的情况下，可以特异性地抑制细菌致病性状的表达，最大限度减少耐药突变体的出现。6、细菌的群体感应在细菌生物膜形成过程中起到重要作用。群体感应，是一种细菌与细菌间的通信机制，控制参与细菌多种生命过程的基因的表达，使细菌在其环境中适应和生存,群体感应系统广泛存在于革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。细菌合成并分泌信号分子，并在周围环境中积累，随着细菌密度的增大，信号分子水平达到临界阈值时，信号分子与受体结合，刺激与生物膜形成相关基因表达，从而调控细菌生物膜的形成。群体感应系统在调控细菌生物膜形成过程中发挥至关重要的作用。本次采用油茶皂素作为群体感应抑制剂，抑制蜡样芽孢杆菌群体感应进而抑制其生物膜形成。并且我们对三种不同的蜡样芽孢杆菌菌株(atcc 10987,atcc 14579和bncc 191637)进行实验检测。7、随着科技发展，油茶皂素本身开发污染小，且利用油茶饼粕提取油茶皂素，原料既丰富又便宜，成本低，毒副作用小。申请号为202110024275.9的发明公开了一种植物抑菌组合物及其应用；现有技术中未能提供抑制剂降低革兰氏阳性菌蜡样芽孢杆菌中luxs基因表达，从而减少ai-2信号分子产生，进而抑制其群体感应介导的生物膜形成；目前，关于采用油茶皂素对蜡样芽孢杆菌生物膜形成进行抑制研究、开发与利用的报道几乎没有，尤其是针对其抑制机制；因此，针对此现状，迫切需要开发一种含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂及其制备方法和应用，以满足实际使用的需求。技术实现思路1、有鉴于此，本发明针对现有技术存在之缺失，其主要目的是提供一种含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂及其制备方法和应用，其提供了含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂，该抑制剂可降低革兰氏阳性菌蜡样芽孢杆菌中luxs基因表达，从而减少ai-2信号分子产生，进而抑制其群体感应介导的生物膜形成；生物膜的有效抑制可减少细菌耐药性，大大减少细菌抗性，使其容易清除；通过抑制luxs基因表达而减少ai-2信号分子产生从而干扰蜡样芽孢杆菌抑制生物膜。2、为实现上述目的，本发明采用如下之技术方案：3、一种含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂，按重量份计包括油茶皂素32-40份、大黄提取物2-5份、白术提取物2-5份、大蒜提取物1-3份。4、作为一种优选方案：所述油茶皂素的终浓度为32mg/ml。5、所述的含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂的制备方法，包括以下步骤：6、s1、制备油茶皂素：研磨油茶饼粕成浆，向油茶饼粕浆中加水提取，离心分离后得到粗提取物；在60-70℃条件下醇沉2h，然后进行离心分离，得到液相和油相；将液相于-15至-1℃条件下冷却5-24h，分离得到固相；固相脱醇并干燥后得到粗茶皂素；7、s2、制备大黄提取物：取大黄根粉碎，以体积浓度为60-90％的乙醇水溶液为提取溶剂进行提取，采用多级闪蒸浓缩得到大黄总浸膏，将大黄总浸膏采用有机混合溶剂萃取，得到大黄提取物；8、s3、制备白术提取物：取白术根茎药材粉碎过筛，通过co2超临界萃取进行提取，得到萃取产物，将萃取产物在5mpa-8mpa，50-60℃进行分离，得到白术提取物；9、s4、制备大蒜提取物：将去皮后的大蒜烘干、粉碎；高压水油混相浸提，浸提时采用的浸提液为水和食用精炼菜籽油，该水和食用精炼菜籽油按重量配比为1：2-3的比例配制，静置浸提液，使得水、油层分层，取油层得到大蒜提取物；10、s5、制备抑制剂：将上述s1中得到的油茶皂素、s2中得到的大黄提取物、s3中得到的白术提取物和s4中得到的大蒜提取物按照比例进行混合，向混合液中加入防腐剂，调节ph得到含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂。11、作为一种优选方案：所述步骤s1中向油茶饼粕浆中加水提取，加水量为油茶饼粕重量的2-3倍，在70-80℃条件下提取2h。12、作为一种优选方案：所述步骤s1中固相在80-85℃,真空度为0.08-0.09mpa条件下脱醇。13、作为一种优选方案：所述步骤s2中有机混合溶剂为石油醚和乙酸乙酯，其体积比为3：1-1：3。14、作为一种优选方案：所述步骤s2中乙醇水溶液为提取溶剂进行提取时采用加热提取的方式，加热提取的提取温度为60℃，提取时间为2小时/次。15、作为一种优选方案：所述步骤s3中通过co2超临界萃取进行提取的条件为：在20-30mpa，40-55℃下萃取。16、作为一种优选方案：所述步骤s4中大蒜与浸提液按重量配比比例为1：3-4。17、所述的含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂的应用，所述含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂用于抑制生物膜形成进而抑制蜡样芽孢杆菌。18、本发明与现有技术相比具有明显的优点和有益效果，具体而言，由上述技术方案可知，提供了含油茶皂素的蜡样芽孢杆菌抑制剂，该抑制剂可降低革兰氏阳性菌蜡样芽孢杆菌中luxs基因表达，从而减少ai-2信号分子产生，进而抑制其群体感应介导的生物膜形成；生物膜的有效抑制可减少细菌耐药性，大大减少细菌抗性，使其容易清除；本发明提供的油茶皂素作为一种天然产物，具有成本低、毒副作用小的特点；油茶皂素是从油茶加工副产物油茶饼粕中提取得到的，是对油茶饼粕的变废为宝，是油茶资源的高值化利用，且因为油茶饼粕资源量大，油茶皂素的提取有充足的原料，性价比高；细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌的抑制剂报道较少，其中报道较多的是金黄色葡萄球菌，而针对蜡样芽孢杆菌群体感应抑制的报道甚少，其中本技术涉及的通过抑制luxs基因表达而减少ai-2信号分子产生从而干扰蜡样芽孢杆菌群体感应系统抑制生物膜。19、为更清楚地阐述本发明的结构特征和功效，下面结合附图与具体实施例来对其进行详细说明。