用于保存细胞、组织或器官的包含分离的线粒体

本发明涉及一种用于保存分离的细胞、组织或器官的包含分离的线粒体的保存液组合物；以及一种使用该保存液组合物来保存分离的细胞、组织或器官的方法。背景技术：1、器官移植指的是用另一个正常的组织或器官替换功能失常的组织或器官。随着20世纪80年代免疫抑制剂的发展，器官移植手术的成功率得到了提高，到今天仍在不断发展出优越的器官移植手术方法。此外，自从2020年韩国实施了《器官移植法》以来，借助脑死亡人士器官捐献进行的器官移植手术数量迅速增加。2、因为从捐献者体内分离出来的组织或器官很难在体外长时间维持其功能，如果能尽快进行移植，就能提高移植到活体生物中的成功率。然而，不幸的是，分离的组织或器官需要时间才能送达需要移植的患者那里，最终导致该组织或器官变得不可使用，或移植的组织或器官功能恶化。如果能够在不损害分离的组织或器官功能的情况下保存组织或器官，那么这些组织或器官就可以更容易地得到运输，患者也可以为移植做好准备，宝贵的组织或器官将不会被废弃，移植到活体生物中的成功率也可以由此提高。近期，已出现有关保存组织和器官的研究(wo2021-007275a1)。3、然而，目前对能长时间维持分离的组织或器官活性的保存液或设备的开发仍处于不足的状态。因此，有必要开发一种保存液或设备，该保存液或设备能够维持分离的组织或器官的生物功能，并能长时间保存这些分离的组织或器官。4、发明的详细说明5、技术问题6、因此，本发明的发明人试图开发一种可以长时间保存分离的细胞、组织或器官的保存液。结果证实，包含分离的线粒体的保存液可以长时间维持分离的细胞、组织或器官的活性。因此，本发明的发明人开发了一种可有效用于保存细胞、组织或器官的保存液。7、解决方案8、为了实现上述目标，在本发明的一个方面，提供了一种用于保存分离的细胞、组织或器官的包含分离的线粒体的保存液组合物。9、在本发明的另一个方面，提供了一种保存分离的细胞、组织或器官的方法，包括：在保存液组合物存在的情况下保存该细胞、组织或器官。10、发明效果11、本发明的包含分离的线粒体的保存液可以在保持分离的细胞、组织或器官的活性的同时，长期保存分离的细胞、组织或器官。因此，其可以维持用于移植的活体生物组织的活性，并且最终有很高的可能性提高移植成功率。因此，其在移植医学领域以及再生医学领域具有很高的工业应用潜力。12、附图的简要说明13、图1展示了使用含线粒体组氨酸-色氨酸-酮戊二酸(htk)溶液或不含线粒体的htk溶液储存分离的心脏时，标准化的灌注液体积与时间(小时)的关系。14、图2展示了使用线粒体htk溶液或不含线粒体的htk溶液储存分离的心脏时，随储存时间(小时)变化的心肌纤维细胞的图像。15、图3展示了储存在线粒体htk溶液或不含线粒体的htk溶液中的分离器官图像。16、图4展示了在线粒体htk溶液或不含线粒体的htk溶液中储存分离的肾脏时，肾脏中ace2酶活性水平的分析结果。17、图5是一张共聚焦显微镜照片，展示了在含线粒体或不含线粒体的htk溶液中储存分离的心肌细胞后，使用mitotrackertm染色确认线粒体运动的结果。此处，hpl线粒体指的是源自人血小板的线粒体。18、图6展示了在线粒体htk溶液或不含线粒体的htk溶液中储存分离的心肌细胞后心肌细胞存活率的增加程度，并展示了wst-1检测的结果。19、图7展示了在线粒体htk溶液或不含线粒体的htk溶液中储存分离的心肌细胞后心肌细胞存活率的增加程度，并展示了细胞内atp测量的结果。20、图8是一张共聚焦显微镜照片，展示了在线粒体htk溶液或不含线粒体的htk溶液中储存分离的心脏组织后，心脏组织内线粒体运动情况。21、图9展示了在线粒体htk溶液或不含线粒体的htk溶液中储存分离的心脏时，心脏atp合酶活性水平的分析结果。22、图10展示了在线粒体htk溶液或不含线粒体的htk溶液中储存分离的心脏时，心脏柠檬酸合酶活性水平的分析结果。23、图11展示了在不同浓度的含线粒体的线粒体htk溶液中储存分离的肾脏时，肾脏ace2酶活性水平的分析结果。24、图12展示了在激活或未激活的不同来源线粒体htk溶液中储存分离的肾脏时，肾脏ace2酶活性水平的分析结果。25、发明的最佳实施方式26、包括线粒体的保存液组合物27、在本发明的一个方面，提供了一种用于保存分离的细胞、组织或器官的包括分离的线粒体的保存液组合物。28、在本文中，“线粒体”一词指的是真核细胞生存所必需的一种细胞器，它参与三磷酸腺苷(atp)这一能源物质的合成和调节。线粒体参与体内多种代谢途径，例如细胞信号传导、细胞分化、细胞死亡，以及控制细胞周期和细胞生长。29、在本文中，“分离的线粒体”一词可以指从自体、同种异体或异种异体来源获取的线粒体。30、在本文中，“自体线粒体”一词指的是从同一个体的组织或细胞中获取的线粒体。此外，“同种异体线粒体”一词指的是从与受体物种相同，但从具有不同等位基因基因型的另一个体的组织或细胞中获取的线粒体。此外，“异种异体线粒体”一词指的是从属于不同物种个体的组织或细胞中获取的线粒体。31、在这种情况下，所述个体可以是哺乳动物，优选为人类。32、线粒体可以从个体的组织或细胞中分离得到。例如，线粒体可以从体细胞、生殖细胞或干细胞中获得，或者可以从血细胞或血小板中获得。此外，线粒体可以是从具有正常线粒体生物活性的细胞中获得的正常线粒体。此外，线粒体可以从体外培养的自体或同种异体细胞中获得。33、在本文中，“细胞”一词指的是构成生物体的结构或功能单位，由细胞膜包围细胞质，并包括蛋白质和核酸等生物分子。细胞指的是细胞膜内包括线粒体的细胞。34、在本文中，“体细胞”一词指的是构成生物体的细胞，不包括生殖细胞。体细胞可以是选自以下组成的组中的任意一种：肌肉细胞、肝细胞、神经细胞、成纤维细胞、上皮细胞、脂肪细胞、骨细胞、白细胞、淋巴细胞、血小板、粘膜细胞以及它们的组合。优选地，线粒体可以从具有优异线粒体活性的肌肉细胞或肝细胞中获得。此外，线粒体也可以从自体或同种异体的外周血单核细胞(pbmc)中获得。35、在本文中，“血小板”一词指的是血细胞的一种类型，是血液的形成要素之一。血小板在骨髓中产生，并在血管或组织受损后在止血和血液凝固中发挥重要作用。线粒体可以从自体或同种异体的血小板中获得。36、在本文中，“生殖细胞”一词指的是参与繁殖的细胞，包括精子和卵子，生殖细胞是有性繁殖生物的配子，以及它们发育过程中的所有阶段的祖细胞。线粒体可以从自体或同种异体的生殖细胞中获得。生殖细胞可以是精子或卵子。37、在本文中，“干细胞”一词指的是未分化的细胞，它具有分化成各种类型组织细胞的能力。干细胞可以是选自以下组成的组中的任意一种：间充质干细胞、成人干细胞、去分化干细胞、胚胎干细胞、骨髓干细胞、神经干细胞、角膜缘干细胞、组织来源干细胞以及它们的组合。38、在这种情况下，间充质干细胞可以是选自以下组成的组中的任意一种：脐带、脐带血、骨髓、脂肪、肌肉、神经、皮肤、羊膜、胎盘、滑液、睾丸、骨膜以及它们的组合。优选地，间充质干细胞提取自人类脐带。39、此外，线粒体可以通过浓缩和破碎从个体分离或在体外培养的细胞或组织样本来获得。此外，线粒体可以通过破碎经过冻存后解冻的细胞或组织样本来获得。40、此外，线粒体可以从经过冻干、冻存或冻存后解冻的细胞或组织样本中获得，但只要所获得的线粒体的生物活性不受负面影响，就没有特别的限制。41、此外，线粒体可以未受损并具有正常的生物活性。具体而言，具有正常生物活性的线粒体可以具有一个或多个特征，选自以下特征组成的组：(i)具有膜电位，(ii)在线粒体内生成atp，及(iii)在线粒体内去除ros或降低ros的活性。42、保存液组合物还可以包括至少一种选自组氨酸、色氨酸和酮戊二酸组成的组的成分。43、酮戊二酸可以是α-酮戊二酸。44、组合物可以包含分离的线粒体和至少一种选自组氨酸、色氨酸和酮戊二酸组成的组的成分的混合物。45、组合物中分离的线粒体的浓度可以是约0.01μg/ml至约1mg/ml，约0.01μg/ml至约100μg/ml，约0.01μg/ml至约90μg/ml，约0.01μg/ml至约80μg/ml，约0.01μg/ml至约70μg/ml，约0.01μg/ml至约60μg/ml，约0.01μg/ml至约50μg/ml，约0.01μg/ml至约40μg/ml，约0.01μg/ml至约30μg/ml，约0.01μg/ml至约20μg/ml，约0.01μg/ml至约10μg/ml，约0.01μg/ml至约9μg/ml，约0.01μg/ml至约8μg/ml，约0.01μg/ml至约7μg/ml，约0.01μg/ml至约6μg/ml，约0.01μg/ml至约5μg/ml，约0.1μg/ml至约10μg/ml，约0.5μg/ml至约10μg/ml，约1μg/ml至约10μg/ml，约2.5μg/ml至约10μg/ml，或约5μg/ml至约10μg/ml。46、组合物中组氨酸的浓度可以是约1mm至约500mm，约5mm至约500mm，约10mm至约500mm，约25mm至约500mm，约50mm至约500mm，约75mm至约500mm，约100mm至约500mm，约125mm至约500mm，约150mm至约500mm，约175mm至约500mm，约198mm至约500mm，约100mm至约400mm，约100mm至约300mm，约100mm至约200mm，或约100mm至约198mm。47、组合物中色氨酸的浓度可以是约1μm至约100mm，约1μm至约90mm，约1μm至约80mm，约1μm至约70mm，约1μm至约60mm，约1μm至约50mm，约1μm至约40mm，约1μm至约30mm，约1μm至约20mm，约1μm至约10mm，约1μm至约5mm，约10μm至约10mm，约100μm至约10mm，约0.5mm至约10mm，约1mm至约10mm，约1.5mm至约10mm，或约2mm至约10mm。48、组合物中酮戊二酸的浓度可以是约1μm至约100mm，约1μm至约90mm，约1μm至约80mm，约1μm至约70mm，约1μm至约60mm，约1μm至约50mm，约1μm至约40mm，约1μm至约30mm，约1μm至约20mm，约1μm至约10mm，约1μm至约5mm，约10μm至约10mm，约100μm至约10mm，约250μm至约10mm，约500μm至约10mm，约750μm至约10mm，约1mm至约10mm，约1mm至约5mm，或约1mm至约2mm。49、此外，保存液组合物还可以进一步包含冷藏溶液或低温保存溶液，用于长期保存分离的细胞、组织或器官。50、冷藏溶液可以包含羟乙基淀粉(hes)、n-乙酰半胱氨酸(nac)和地塞米松(dex)。羟乙基淀粉(hes)可以是四羟乙基淀粉(t-hes)、五羟乙基淀粉(p-hes)或六羟乙基淀粉(h-hes)，但不限于此。51、冷藏溶液还可以包含必需的氨基酸、胰岛素和葡萄糖，但不限于此。52、低温保存溶液可以包含羟乙基淀粉(hes)和二甲基亚砜(dmso)。低温保存溶液可以包含细胞培养基，如dmem或mem，以及生理缓冲液，如plasmalyte或pbs。53、具体而言，低温保存溶液可以包含至少一种额外的低温保护剂，选自以下组成的组：乙酰胺、琼脂糖、海藻酸盐、1-苯胺、白蛋白、醋酸铵、丁二醇、硫酸软骨素、氯仿、胆碱、二乙二醇、二甲基乙酰胺、甲基甲酰胺、二甲基亚砜(dmso)、赤藓糖醇、乙醇、乙二醇、甲酰胺、葡萄糖、甘油、α-甘油磷酸、甘油单醋酸酯、甘氨酸、羟乙基淀粉、肌醇、乳糖、氯化镁、硫酸镁、麦芽糖、甘露醇、甘露糖、甲醇、甲基乙酰胺、甲基甲酰胺、甲基尿素、苯酚、复合多元醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、脯氨酸、丙二醇、吡啶n-氧化物、核糖、丝氨酸、溴化钠、氯化钠、碘化钠、硝酸钠、硫酸钠、山梨醇、蔗糖、海藻糖、三乙二醇、三甲胺醋酸、尿素、缬氨酸、木糖、糊精、右旋糖酐和异麦芽低聚糖。54、另一方面，保存液组合物还可以包含iap(凋亡抑制剂)、rho相关蛋白激酶(rock)信号通路抑制剂和/或属于生长因子如egf、fgf、pdgf、igf、epo、bdnf、tgf、tnf和/或vegf的蛋白质。55、此外，保存液组合物可以包含从抗氧化剂、渗透调节剂和能量源中选取的一种或多种添加剂。56、抗氧化剂可以包括但不限于α-生育酚(维生素e)、α-生育酚醋酸酯、抗坏血酸、抗坏血酸棕榈酸酯、丁基羟基茴香醚、丁基羟基醌、丁基羟基甲苯、羟基香豆素、乙基没食子酸酯、丙基没食子酸酯、辛基没食子酸酯、十二烷基没食子酸酯、丙基羟基苯甲酸酯、三羟基苯丁酮、二甲基苯酚、卵磷脂、辅酶q10、乙醇胺，或其组合。57、渗透调节剂可以包括但不限于葡聚糖、氯化钠、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、甘露醇、右旋葡萄糖、碳酸氢钠、氯化钙、氯化钾、乳酸钠、林格液、乳酸林格液、羟乙基淀粉、棉籽糖、甘油，或其组合。58、能量源可以包括但不限于三磷酸腺苷(atp)、三磷酸腺苷二钠盐、葡萄糖、麦芽糖、甘露糖、半乳糖或果糖，且可以是三磷酸腺苷(atp)和/或三磷酸腺苷二钠盐。59、在一个实施方案中，保存液组合物可以包含腺苷、谷胱甘肽、bes(n,n-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸)、hes(羟乙基淀粉)或peg(聚乙二醇)作为活性成分，除此之外，还至少包含一种选自组氨酸、色氨酸和酮戊二酸组成的组的物质。此外，可添加ec(euro-collins)冷藏液、uw(威斯康星大学)溶液bgp-hmp(n,n-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸(bes)-葡萄糖酸-聚乙二醇[bgp]基溶液(低温机械灌注[hmp])溶液)、bgp-cs(冷藏)溶液等，但不限于此。60、细胞、组织或器官可来源于哺乳动物。哺乳动物可为人类、牛、马、猪、狗、绵羊、山羊或猫。61、细胞、组织或器官可用于移植到活体生物中。62、细胞包括构成组织或器官的细胞，其实例可包括但不限于肌肉细胞、肝细胞、成纤维细胞、上皮细胞、神经细胞、脂肪细胞、骨细胞、白细胞、淋巴细胞、干细胞或粘膜细胞。63、组织可选自皮肤、肌肉、角膜、软骨、神经和骨骼。64、器官可为从心脏、肝脏、肾脏、小肠、胃、胰腺、肺、胆囊、神经、皮肤、血管、牙齿、眼睛、角膜、大脑、脊髓、甲状腺、骨髓、肌肉、胸腺、脾脏、大肠、睾丸和卵巢中选取的任一器官。65、保存液组合物可进一步包含可增加分离的细胞、组织或器官的长期保存效率的添加剂。添加剂可为水、糖类(例如，蔗糖、棉籽糖、淀粉)、ph缓冲剂(例如，磷酸钠、磷酸钾)、atp、缓冲剂、白蛋白或抗氧化剂(例如，维生素e)。66、用于灌注或再灌注的包括线粒体的组合物67、在本发明的另一个方面，提供了一种用于灌注或再灌注的、包括分离的线粒体的组合物。68、灌注可以指通过向分离的细胞、组织或器官注射或连续流动灌注液，以人工液体替代原生质。再灌注可以指暂时停止对分离的细胞、组织或器官的血液供应，然后恢复血流。69、组合物可以是用于肠外给药的组合物。组合物可以是液体。此外，组合物可以包含一种或多种添加剂。添加剂可以包括赋形剂、稀释剂、抗粘附剂、防腐剂、载体、表面活性剂或其组合。此外，组合物还可以包含盐类，如mgcl2、cacl2、nacl、kcl或其组合。70、组合物可以是药物组合物。71、使用保存液组合物保存细胞、组织或器官的方法72、在本发明的另一个方面，提供了一种保存分离的细胞、组织或器官的方法，包括：在包括分离的线粒体的保存液组合物存在的条件下储存分离的细胞、组织或器官。73、细胞、组织、器官、线粒体以及保存液组合物均如上所述。74、在本文中，“在保存液组合物存在的条件下”一词，可指将本发明的保存液组合物与待保存的对象即细胞、组织或器官接触。75、在一个实施方案中，这是一种通过将细胞、组织或器官等浸没在本发明的保存液组合物中，从而使保存溶液与待保存对象接触的保存细胞、组织或器官等的方法。待保存对象的保存液用量没有特别限制，但使用能够完全浸没待保存对象的量可能更为合适。76、保存容器没有特别限制，可以使用密封容器或开放式容器。其选择可以根据目的适当决定。优选地，容器可维持有氧条件(即氧气、二氧化碳和氮气等气体可以自由吸入的条件)。77、储存可在冷藏条件下进行。冷藏条件可为约-4℃至约25℃、约-4℃至约20℃、约-4℃至约15℃、约-4℃至约10℃、约-2℃至约10℃、约-2℃至约8℃、约0℃至约15℃、约0℃至约10℃、约0℃至约8℃、约0℃至约6℃、约0℃至约5℃、约0℃至约4℃、约0℃至约3℃，或约2℃至约5℃。78、另一方面，当使用本发明的保存液组合物通过浸没待保存对象将待保存对象低温保存时，可以根据需要向保存液组合物中添加已知的低温保护剂(例如，dmso、甘油等)。79、储存时间可以根据目的设定适当的时间。具体来说，储存可进行至多约10天、至多约9天、至多约8天、至多约7天、约0小时至约7天、约0小时至约6天、约0小时至约5天、约0小时至约4天、约0小时至约3天、约0小时至约2天、约0小时至约42小时、约0小时至约36小时、约0小时至约30小时、约0小时至约24小时、约0小时至约18小时、约0小时至约12小时、约0小时至约9小时、约0小时至约6小时或约0小时至约3小时，但不限于此。80、所述方法还可以包括从细胞中分离线粒体。可使用已知的方法从细胞中分离线粒体。从细胞中分离的线粒体可以包括破裂细胞并从裂解液中分离的线粒体。分离可以通过离心的方式进行。81、发明的实施方式82、以下通过具体实施例更详细地描述本发明。然而，以下实施例仅用于说明本发明，本发明的范围并不限于此。83、实施例1基于含分离的线粒体的溶液的使用，确认心脏功能84、实施例1.1准备血小板85、约40毫升至约50毫升的浓缩人血小板经过2000xg离心约30分钟。移除含有血浆的上清液，获得血小板沉淀(颗粒)。所得到的血小板沉淀在与血浆相同体积的ttg混合保存液中重悬(0.195m海藻糖、20mm tris和65mm甘氨酸：ttg)。重悬的血小板沉淀分装成1毫升每份，-80℃储存备用。86、实施例1.2从血小板中提取线粒体87、解冻冷冻储存的血小板，通过涡旋混合约5分钟进行破碎，然后在2000xg离心约5分钟。得到的上清液在12000xg下离心10分钟，以获得沉淀的线粒体。88、实施例1.3稳定分离的心脏89、为了确认心脏的功能，首先对分离的心脏进行稳定化处理。90、具体而言，sd(sprague-dawley)大鼠(12周龄，雄性)用氯胺酮麻醉，后处死。取出大鼠的心脏，并通过主动脉导管将分离的心脏置于langendorff装置中。用krebs-henseleit溶液灌注分离的心脏约20分钟以清洗心脏。通过心脏的主动脉注入冷藏储存的组氨酸-色氨酸-酮戊二酸(htk)溶液，并灌注约10分钟以稳定心脏。91、htk溶液含有198mm组氨酸、2mm色氨酸、1mm酮戊二酸、30mm甘露醇、4mm mgcl2、15μm cacl2、15mm nacl和9mm kcl。92、实施例2基于含线粒体溶液的使用，确认取出的心脏的灌注维持情况93、将实施例1.2中准备的线粒体添加到htk溶液中，以制备含有5μg/ml线粒体的线粒体-htk溶液。94、在实施例1.3中准备的稳定后的心脏中，分别注入含有5μg/ml线粒体的线粒体-htk溶液和不含线粒体的htk溶液约2分钟。之后，心脏分别浸没在含有150μg/30ml线粒体的线粒体-htk溶液和30ml不含线粒体的htk溶液中，并在大约4℃下保存。在10小时、12小时和29小时后，将储存的心脏通过主动脉导管置于langendorff装置中，并通过其灌注krebs-henseleit溶液。测量流过心脏的灌注液量。此时，灌注液量的变化取决于心率，并与心率相关。因此，测量随时间变化的标准化灌注液体积(毫升)，并将其表示在图1中。95、如图1所示，在9小时、10小时、12小时和29小时，与仅在不含线粒体的htk溶液中储存相比，在线粒体-htk溶液中储存时，心脏的灌注液量增加了约20％。96、此外，在分离心脏后，将分离的心脏储存在线粒体-htk溶液或不含线粒体的htk溶液中，然后检查心跳持续时间。97、在心脏分离后9小时，储存在线粒体-htk溶液或不含线粒体的htk溶液中的心脏的跳动清晰可辨。储存在不含线粒体的htk溶液中的心脏在9小时后心跳非常微弱，但即使在9小时后，储存在线粒体-htk溶液中的心脏与储存在不含线粒体的htk溶液中的心脏相比，心跳更快、更稳定。98、因此，确认了在含线粒体溶液存在下，分离的心脏长时间维持了心肌收缩力。99、实施例3基于含线粒体溶液的使用，确认取出的心脏中心肌纤维细胞的维持情况100、从实施例2中测量了灌注液的心脏中分离出心肌纤维细胞。在显微镜下观察分离细胞的状况。分离的心脏储存在线粒体-htk溶液或不含线粒体的htk溶液中时，根据储存时间(9小时、10小时、12小时和29小时)的心肌纤维细胞图像如图2所示。101、如图2所示，当储存在线粒体-htk溶液中时，与储存在不含线粒体的htk溶液中的细胞相比，从心脏分离出的心肌细胞多大约2到3倍。102、因此，确认了当心脏储存在含线粒体溶液中时，与不含线粒体的情况相比，心脏中心肌细胞的数量增加。103、实施例4确认储存在包含分离的线粒体溶液中的心脏、肝脏和肾脏的功能104、实施例4.1为确认分离的心脏、肝脏和肾脏的功能所进行的准备105、c57bl6小鼠(7周龄，雄性)用氯胺酮麻醉后，取出心脏、肝脏和肾脏。取出的心脏、肝脏和肾脏用pbs溶液清洗数次，以去除血液和异物。清洗过的器官分别浸没在冷藏储存的不含线粒体的htk溶液和线粒体-htk溶液中，然后进行冷藏保存。106、实施例4.2基于含线粒体溶液的使用，确认取出的心脏、肝脏和肾脏的色度变化107、在实施例4.1中储存的心脏、肝脏和肾脏用pbs溶液清洗数次后进行了拍照，以比较它们的色度变化。如图3所示，当储存在线粒体-htk溶液中时，心脏保持了鲜红色，而在不含线粒体的htk溶液中储存时，其红色消失了。在肝脏和肾脏中也观察到了类似的结果。108、实施例4.3基于含线粒体溶液的使用，确认取出的肾脏中酶活性的维持情况109、在实施例4.1中储存的整个肾脏分别在60小时和160小时后进行了匀浆处理，然后根据制造商的手册使用ace2活性测定试剂盒(目录号k897-100，biovision)测量了高度表达在肾脏中的ace2(血管紧张素ii转换酶)的活性。如图4所示，在不含线粒体的htk溶液和线粒体-htk溶液中，ace2活性随时间增加。特别是，确认当肾脏储存在线粒体-htk溶液中时，ace2的活性增加速度比仅在不含线粒体的htk溶液中储存时更慢，即ace2活性的增加被延迟。110、换言之，器官分离后持续能量减少和压力增加导致ace2的表达和活性增加。因此，发现增加的ace2活性降低了器官中的压力，而用线粒体处理能提供能量，由此降低了ace2的活性。111、实施例5确认使用含线粒体溶液对取出的心脏的效果112、实施例5.1从取出的心脏中分离心肌细胞113、取出的心脏的左心室碎片用胶原酶(worthington biochemical co.，批号ls004194)和蛋白酶(sigma aldrich，批号p4630)处理5分钟，然后在2000xg离心以获得心肌细胞。114、实施例5.2分离的线粒体染色115、从血小板中分离出的线粒体用mitotrackertm(thermofisher，批号m7512)，一种特异性线粒体染色试剂，染色10分钟。之后，通过在12000xg离心去除上清液，并在线粒体分离溶液中重新悬浮。116、实施例5.3基于含线粒体溶液的使用，确认心肌细胞存活率的增加情况117、在实施例5.1中分离的心肌细胞被储存在不含线粒体的htk溶液和在实施例5.2中准备的染色的线粒体-htk溶液中9小时，然后使用共聚焦显微镜确认线粒体的运动。结果确认，如图5所示，溶液中的线粒体移动进入心肌细胞。118、此外，通过测量wst-1(水溶性四唑盐)和细胞内atp(图6和图7)，确认了线粒体移入心肌细胞导致的存活率增加。119、实施例5.4基于含线粒体溶液的使用，确认心脏组织内线粒体运动120、取出的心脏被储存在不含线粒体的htk溶液和在实施例5.2中准备的染色的线粒体-htk溶液中。9小时后，进行固定和切片处理。随后，使用共聚焦显微镜确认移动到组织中的线粒体(图8)。121、实施例5.5根据含线粒体溶液的使用，确认心脏组织中线粒体酶活性的增加情况122、从正被储存的取出的心脏组织中分离出线粒体，然后分别测量了atp合酶和柠檬酸合酶的活性。结果如图9和图10所示，当使用线粒体-htk溶液时，atp合酶和柠檬酸合酶的活性都显著提高。123、实施例6根据线粒体浓度确认肾脏中酶活性的维持情况124、肾脏的准备与实施例4.1中的方法相同，除了储存时间为192小时以及依赖浓度的线粒体-htk溶液处理(0、5、10、15和20μg/ml)，测量了ace2的活性。如图11所示，证实了线粒体以浓度依赖的方式降低ace2的活性。125、实施例7基于含不同来源和激活状态的线粒体溶液的使用，确认酶活性的维持情况126、肾脏的准备与实施例4.1中的方法相同，除了储存时间为192小时以及使用不同来源和激活状态的线粒体-htk溶液处理，测量了ace2的活性。此时，经过超声处理后，将失活的线粒体在56℃下加热30分钟。127、结果如图12所示，确认使用每种热失活线粒体时，ace2的活性没有降低，但使用来自脐带血间充质干细胞(uc-msc)、血小板和外周血单核细胞(pbmc)的不同来源线粒体时，ace2的活性降低了。技术实现思路