一种蜡样芽孢杆菌与茶饼粉组合物及使用方法与

本发明属于农业病害杀灭领域，具体涉及一种蜡样芽孢杆菌与茶饼粉组合物及使用方法。背景技术：1、蜡样芽孢杆菌(bacillus sc)是一种对植物真菌、细菌性病害有抑制作用的病原细菌，可广泛应用于植物根、茎、叶、花以及果蔬上病害防治，代谢产物吲哚乙酸能促进植物生长，由于蜡样芽孢杆菌对病害的防治效果较为良好，且不会对环境和人体造成危害，因此越来越受到人们的重视。目前国内登记的以蜡样芽孢杆菌为有效成分的农药品种有10个，应用于水稻、番茄、西瓜、黄瓜、烟草、草莓、等多种作物的真菌、细菌性病害的防治。2、然而与化学农药相比，蜡样芽孢杆菌因剂型单一且生物活性易受环境影响，工作效率低等不足缺点。孢子在生产和保存过程中存在消解或使用时无法充分萌发等风险，从而导致产品蜡样芽孢杆菌防效低、效果不稳定等。茶饼粉中含有11～13％的皂苷类物质、11～17wt％的粗蛋白、5～7wt％的粗脂肪、3～5wt％的矿物质和24～35wt％的易水解多糖，是一种天然的表面活性剂，具有湿润速度快，分散能力强的特性，可提高孢子在植物上附着力，增加芽孢杆菌对某些植物细菌、真菌病害的防效。3、叶斑病是发生在花生叶片、叶柄、茎和花果上的黑斑病、褐斑病、网斑病总称。这三种病害能混合发生于同一株上，黑斑病和网斑病发生较重时，导致叶片提前落叶，甚至整株枯死，花生受害后一般减产10～20％，重则30％以上，叶斑病是我国花生主要病害之一，也是我国花生低产原因之一。目前国内防治花生叶斑病采用化学农药防治，长期使用化学农药会产生抗药性和农药残留问题。4、本领域需要开发一种针对花生叶斑病的农药，具有良好的安全性，避免叶斑病产生抗药性，并且具有较高的防效性。技术实现思路1、本发明涉及一种蜡样芽孢杆菌与茶饼粉组合物及使用方法。本发明所述蜡样芽胞杆菌分离自舒城县茶园土壤，命名为蜡样芽孢杆菌 bacillus cereus，于2023年7月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，菌种保藏号为cgmcc no.28028。2、该菌株由安徽省合肥高尔生命健康科学研究院有限公司药效室团队从舒城县茶园土壤里分离鉴定获得。具体测序结果如下：3、its序列：4、tgcaagtcgagcgaatggattaagagcttgctcttatgaagttagcggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcccataagactgggataactccgggaaaccggggctaataccggataacattttgaaccgcatggttcgaaattgaaaggcggcttcggctgtcacttatggatggacccgcgtcgcattagctagttggtgaggtaacggctcaccaaggcaacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggcccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacggagcaacgccgcgtgagtgatgaaggctttcgggtcgtaaaactctgttgttagggaagaacaagtgctagttgaataagctggcaccttgacggtacctaaccagaaagccacggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttatccggaattattgggcgtaaagcgcgcgcaggtggtttcttaagtctgatgtgaaagcccacggctcaaccgtggagggtcattggaaactgggagacttgagtgcagaagaggaaagtggaattccatgtgtagcggtgaaatgcgtagagatatggaggaacaccagtggcgaaggcgactttctggtctgtaactgacactgaggcgcgaaagcgtggggagcaaacaggattagataccctggtagtccacgccgtaaacgatgagtgctaagtgttagagggtttccgccctttagtgctgaagttaacgcattaagcactccgcctggggagtacggccgcaaggctgaaactcaaaggaattgacgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcaacgcgaagaaccttaccaggtcttgacatcctctgaaaaccctagagatagggcttctccttcgggagcagagtgacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttgatcttagttgccatcattaagttgggcactctaaggtgactgccggtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggctacacacgtgctacaatggacggtacaaagagctgcaagaccgcgaggtggagctaatctcataaaaccgttctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagctggaatcgctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacaccacgagagtttgtaacacccgaagtcggtggggtaacctttttggagccagccgcctaaggtgggacagatgattggggtga5、本发明中无特别说明，蜡样芽孢杆菌均采用蜡样芽孢杆菌bcsc。6、本技术的目的之一是提供一种防治花生叶斑病的方法，包括如下步骤：7、(1)将蜡样芽孢杆菌水剂、粉剂和茶饼粉分散在水中，得到喷洒药剂；蜡样芽孢杆菌水剂和茶饼粉在水中的分散比例使得所述喷洒药剂中，蜡样芽孢杆菌与茶饼粉组合物水剂的亩喷洒量(a)蜡样芽孢杆菌150-400ml+茶饼粉200～400g，粉剂的亩喷洒量蜡样芽孢杆菌40～60g+茶饼粉250～350g。8、(2)将所述喷洒药剂喷洒在大田花生苗上，适期为花生始花期。9、本技术提供的防治花生叶斑病的方法中，利用蜡样芽孢杆菌产生的孢子萌发侵入到花生植株组织中起到占位作用，阻止叶斑病菌丝对植株浸染。而茶饼粉中含有脂肪、蛋白、茶皂素等成分，其能够提高所述蜡样芽孢杆菌在水中的分散性，同时为蜡样芽孢杆菌孢子萌发提供营养物质。10、需要说明的是，本领域中，高浓度、高纯度的茶皂素对于细菌、真菌具有抑制作用，而以茶饼粉的方式加入茶皂素等皂苷类物质，则不会带来对蜡样芽孢杆菌的抑制，反而能够提高蜡样芽孢杆菌的杀菌活性。这可能是因为，一方面茶皂素的浓度和纯度被茶饼粉其他物质稀释了，降低了其对于蜡样芽孢杆菌的抑制性；另一方面，茶饼粉的蛋白、脂肪等营养物质为蜡样芽孢杆菌提供了生长环境，也抵消了皂苷类物质的抑制作用；第三，皂苷类物质增加了的分散性，使其喷洒均匀性提高，提高了对叶斑病的防控效果。11、优选地，所述蜡样芽孢杆菌水剂孢子浓度为13亿孢子/ml等。粉剂孢子浓度为100亿孢子/克等。12、优选地，所述蜡样芽孢杆菌水剂通过液体发酵所得，粉剂通过固体发酵所得。13、本技术所述的蜡样芽孢杆菌水剂和粉剂通过下述方法获得。14、优选地，所述蜡样芽孢杆菌水剂通过如下方法制备得到：15、(a)从舒城县舒茶镇“九一六”茶园采集土壤，在马铃薯、葡萄糖、玉米粉、黄豆粉、琼脂培养基上进行分离培养，获得蜡样芽孢杆菌的菌株；16、(b)对蜡样芽孢杆菌菌株进行扩繁培养，得到蜡样芽孢杆菌二级菌种，所述蜡样芽孢杆菌水剂中，液体发酵培养基为20％新鲜马铃薯液、5％蔗糖、5％玉米粉、5％黄豆粉加65％水高温消毒冷却，冷却后的培养基加5％二级菌种，在发酵灌中发酵，发酵温度36～37℃时间72小时。所述粉剂培养基新鲜马铃薯20％，15％玉米粒、15％的黄豆粉，5％蔗糖，45％的水，高温消毒冷却后，培养料放到经过消毒的容器中；一层二级菌种铺一层培养料，然后放到培养箱发酵，发酵温度36～37℃，湿度80％，时间72小时。需要说明的是，本技术所述分离培养后，蜡样芽孢杆菌水剂的孢子含量至少在13亿/ml以上，一般固体培养的蜡样芽孢杆菌孢子在100亿孢子/克以上。17、优选地，所述分离培养分离培养温度为36～37℃，分离培养时间为72h。18、优选地，所述茶饼粉通过将油茶茶饼粉碎得到。19、优选地，所述茶饼粉的颗粒为1～10μm。20、优选地，将油茶籽仁进行热榨或冷榨后得到油茶粕，将所述油茶粕压饼脱水后得到所述油茶茶饼。21、热榨或冷榨后得到油茶粕，压饼之后的茶饼含有的粗蛋白、粗脂肪含量更高，更容易作为蜡样芽孢杆菌的萌生或孢子生长的营养。22、优选地，所述油茶茶饼粉中含有11～13wt％的皂苷类物质、11～17wt％的粗蛋白、5～7wt％的粗脂肪、3～5wt％的矿物质和24～35wt％的易水解多糖。23、上述油茶茶饼粉的组成既能够提高蜡样芽孢杆菌的分散性，又能够促进所述蜡样芽孢杆菌的孢子产出和菌丝生长，且皂苷类物质对蜡样芽孢杆菌的抑制性也不明显。24、作为优选技术方案，步骤(1)“将蜡样芽孢杆菌扩增液和茶饼粉分散在水中，得到喷洒药剂”可以按照如下步骤进行：25、(1a)将茶饼粉分散在少量水中，得到茶饼粉水分散液；26、(1b)将茶饼粉水分散液加入至剩余的水中，然后加入蜡样芽孢杆菌扩繁液，得到喷洒药剂。27、(1c)将茶饼粉水分散液加入蜡样芽孢杆菌粉剂，得到喷洒药剂。28、优选地，步骤(1a)茶饼粉水分散液先进行超声预处理，然后进行步骤(1b、1c)。29、优选方案中，将茶饼粉水分散液在超声条件下进行预处理，可以将蛋白的二级或三级结构展开，暴露出亲油基团和亲水基团，提高茶饼粉中蛋白的水分散性，尤其是在茶饼粉中还含有部分的皂苷类物质，在超声作用下更加提高了蛋白的分散性，进而提高蜡样芽孢杆菌对蛋白的利用率；此外，由于处理后的茶饼粉水分散液中的蛋白也暴露了亲油基团，能够提高其与脂肪的结合性，即一定程度上也增加了脂肪的水溶性，且能够拉近脂肪和蛋白的距离，也能够提高蜡样芽孢杆菌菌对脂肪和蛋白的利用率。选用超声对茶饼粉水分散液进行预处理，配合从茶园土壤分离培养的蜡样芽孢杆菌，能够将叶斑病的7d防效提高到74％以上，15d防效可以达到81％以上。30、优选地，硬脂酸的加入总量为茶饼粉质量的2.5～3.5wt％。31、硬脂酸的加入能够对超声预处理的茶饼粉水分散液进行消泡，同时不会对喷洒后蜡样芽孢杆菌孢子的萌发生长造成影响，而且由于有效对泡沫进行了消除，提高了蜡样芽孢杆菌与蛋白质与脂肪的接触，提高了蜡样芽孢杆菌孢子的萌发和生长。32、优选地，在步骤(1)完成后，10分钟以内进行步骤(2)。33、步骤(1)完成后，较快进行步骤(2)可以减少皂苷类物质对蜡样芽孢杆菌孢子的影响，并且在喷洒后，水分较快挥发，蜡样芽孢杆菌孢子与营养物质接触，并在皂苷类物质的作用下迅速进入花生植株组织内占位。34、本技术目的之二是提供一种蜡样芽孢杆菌的培养方法，所述培养方法包括如下步骤：35、(a)从茶园采集土壤，在马铃薯、蔗糖、玉米粉、黄豆粉、琼脂培养基上进行分离培养，获得蜡样芽孢杆菌的菌株；36、(b)对蜡样芽孢杆菌的菌株进行扩繁培养，得到蜡样芽孢杆菌二级菌种。液体发酵培养基按照20％新鲜马铃薯液、5％蔗糖、5％玉米粉、5％黄豆粉加1l水比例高温消毒冷却，冷却后的培养基加5％二级菌种，在发酵灌中发酵，发酵温度36～37℃时间72小时。所述粉剂培养基为新鲜马铃薯20％，15％玉米粒、15％的黄豆粉，5％蔗糖，45％的水，高温消毒冷却后，培养料放到经过消毒的容器中，方法；一层二级菌种铺一层培养料，然后放到培养箱发酵，发酵温度36～37℃，湿度80％，时间72小时。优选地，分离、发酵培养温度为36～37℃，培养时间为72h。37、本技术提供的蜡样芽孢杆菌的培养方法获得的蜡样芽孢杆菌扩繁料对花生叶斑病具有特异性作用。38、与现有技术相比，本技术具有如下有益效果：39、(1)本技术提供的花生叶斑病的方法中，利用蜡样芽孢杆菌产生的孢子萌发侵入花生植株组织内占位，抑制叶斑病在花生植株扩展。而茶饼粉中含有脂肪、蛋白、茶皂素等成分，其能够提高所述蜡样芽孢杆菌在水中的分散性，同时为蜡样芽孢杆菌的萌发提供营养物质，茶皂素本身具有杀虫防病作用，本技术提供的防治花生叶斑病药后15d，防效能够达到81％以上。40、(2)本技术提供的蜡样芽孢杆菌的培养方法获得的蜡样芽孢杆菌扩繁料对花生叶斑病具有特异性作用。