一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方

本发明属于动物模型构建，具体涉及一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法和应用。背景技术：1、移植相关血栓性微血管病(ta-tma)是一类造血干细胞移植(hsct)后的严重的血栓并发症。其病因尚不清楚，目前认为ta-tma的发病可能与补体系统激活，形成膜攻击复合物引起内皮受损有关。ta-tma与血栓性血小板减少性紫癜(ttp)、非典型溶血尿毒综合征(ahus)有着类似的临床特征，主要表现为微血管性溶血性贫血、外周血血小板减少、乳酸脱氢酶升高、血肌酐升高、外周血破碎红细胞增多、微循环纤维蛋白沉积、微血管血栓形成，最终导致多器官功能衰竭。回顾既往文献，ta-tma的发病率为0.5％～76％，一项大型综述发现死亡率为75％，大多数患者在ta-tma诊断后3个月内死亡。它影响肾脏、胃肠道、中枢神经系统、心脏、肺和浆膜表面等。ta-tma发生的危险因素包括钙调神经磷酸酶抑制剂、移植物抗宿主病(gvhd)、感染、静脉血栓栓塞疾病、abo血型不相容、人类白细胞抗原不匹配等。2、ta-tma的治疗基于对潜在病理生理学的认识，分为预防措施和支持治疗。预防措施，如避免内皮毒素，避免感染，优化移植预处理方案，可最大限度地减少内皮损伤。积极的支持治疗包括尽量减少输血、控制高血压和任何潜在感染，支持治疗是ta-tma治疗的核心。其他方法包括停用钙调神经磷酸酶抑制剂、治疗性血浆交换(tpe)、利妥昔单抗、去纤肽和依库珠单抗，疗效和生存效益各不相同。3、目前治疗ta-tma的药物仅依靠探索性的临床病例应用，而ta-tma的小鼠模型方面仍是空缺。技术实现思路1、针对现有技术的不足，本发明提供一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法和应用，通过应用小剂量的炎症加氧化应激构建ta-tma小鼠模型，填补了ta-tma小鼠模型的空白，为探究治疗ta-tma的药物研究提供了可靠的技术支持。2、本发明是通过以下技术方案实现的：3、一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：4、步骤1)构建小鼠异基因造血干细胞移植模型：选择不同品种的小鼠分别作为受体和供体；移植前第7天开始每天对受体小鼠给予庆大霉素+左氧氟沙星的酸化水喂养，含有抗生素的酸化水持续喂养至移植后第7天，之后更改为普通酸化水继续喂养；移植当天接受6.5gy致死性辐照，辐照后4～6h内回输供体小鼠来源的骨髓细胞，完成造血干细胞移植；5、步骤2)构建移植相关血栓性微血管病小鼠模型：移植后第14天，小鼠血象基本重建，此时先对小鼠腹腔注射3％ h2o2，30min后，再腹腔注射脂多糖lps，即得。6、优选地，所述步骤1)中，作为受体的小鼠为6～8周野生型balb/c小鼠，作为供体的小鼠为6～8周野生型c57bl/6小鼠。7、优选地，步骤1)所述庆大霉素的剂量为40万u/l，所述左氧氟沙星的浓度为50mg/l。8、优选地，步骤1)所述骨髓细胞为去除红细胞，有核细胞数为5×106个的骨髓细胞。9、优选地，步骤2)所述3％ h2o2的注射量为5ml/kg；所述脂多糖lps的注射量为2.5mg/kg。10、优选地，步骤2)所述脂多糖lps来源于大肠杆菌0111:b4。11、上述构建方法构建得到的小鼠模型在制备治疗移植相关血栓性微血管病的药物中的应用。12、上述构建方法构建得到的小鼠模型在筛选治疗移植相关血栓性微血管病的药物中的应用。13、上述构建方法构建得到的小鼠模型在与移植相关血栓性微血管病有关的药物药效、副作用研究中的应用。14、上述构建方法构建得到的小鼠模型在移植相关血栓性微血管病发生、发展的病因及病理机制的研究中的应用。15、本发明的有益效果如下：16、本发明通过综合运用小鼠生存情况观察、血小板计数分析、生化指标检测、外周血涂片查找破碎红细胞以及肾脏切片he染色等多种实验手段，全面验证了小剂量lps与h2o2联合诱导ta-tma模型的可行性，填补了ta-tma小鼠模型研究领域的空白，并为深入研究ta-tma的发病机理和治疗策略提供了实验工具和平台。通过本发明的方法构建的ta-tma小鼠模型，研究人员能够更加准确地模拟人类ta-tma疾病的病理过程，从而有助于揭示其发病机制和病理生理变化。同时，该模型还可用于评估不同药物对ta-tma的治疗效果，为药物筛选和优化提供可靠依据。此外，本发明所建立的ta-tma小鼠模型具有操作简便、重复性好、稳定性高等优点，适用于大规模的药物筛选和深入研究。因此，本发明有助于推动ta-tma相关药物研究的进展，为临床上治疗ta-tma提供新的思路和方法，具有重要的实际应用价值。技术特征：1.一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：2.根据权利要求1所述的一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中，作为受体的小鼠为6～8周野生型balb/c小鼠，作为供体的小鼠为6～8周野生型c57bl/6小鼠。3.根据权利要求1所述的一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤1)所述庆大霉素的剂量为40万u/l，所述左氧氟沙星的浓度为50mg/l。4.根据权利要求1所述的一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤1)所述骨髓细胞为去除红细胞，有核细胞数为5×106个的骨髓细胞。5.根据权利要求1所述的一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤2)所述3％h2o2的注射量为5ml/kg；所述脂多糖lps的注射量为2.5mg/kg。6.根据权利要求1所述的一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤2)所述脂多糖lps来源于大肠杆菌0111:b4。7.如权利要求1-6任一项所述的一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法构建得到的小鼠模型在制备治疗移植相关血栓性微血管病的药物中的应用。8.如权利要求1-6任一项所述的一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法构建得到的小鼠模型在筛选治疗移植相关血栓性微血管病的药物中的应用。9.如权利要求1-6任一项所述的一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法构建得到的小鼠模型在与移植相关血栓性微血管病有关的药物药效、副作用研究中的应用。10.如权利要求1-6任一项所述的一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法构建得到的小鼠模型在移植相关血栓性微血管病发生、发展的病因及病理机制的研究中的应用。技术总结本发明公开了一种移植相关血栓性微血管病小鼠模型的构建方法和应用，所述构建方法为：先构建小鼠异基因造血干细胞移植模型，移植后第14天腹腔注射小剂量LPS+H