一种中华羊茅成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建

本发明属于基因编辑育种领域，尤其涉及一种中华羊茅成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立方法。背景技术：1、中华羊茅是我国特有的禾本科羊茅属多年生草本植物。其对不良环境有很强的适应性，具有很强的耐寒耐旱和耐盐碱的能力。将其和其他草种进行混播具有良好的坪用特性，中华羊茅具有绿期长的特点也可将其用作草坪草。另一方面中华羊茅再生能力强，营养丰富，可用于青贮饲料或直接放牧。综上中华羊茅是一种极具开发价值的草种。2、组织培养技术，是利用植物的全能性理论的无性繁殖技术。分离出植物组织中成熟的胚为外植体放置于不同培养基进行无菌培养。组织培养技术具有繁殖速度快、生产效率高、保持原有品种的固有形状和特性、节约土地和节约繁殖材料等优点。3、中华羊茅种子的带菌率普遍较高是组织培养技术建立的一大难题，同时如何在提高出愈率的同时保持最低污染率是组织培养技术建立的又一大难题。因此，目前有关中华羊茅成熟胚为外植体进行组织培养的技术并不成熟。技术实现思路1、为克服现有技术的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种中华羊茅成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立方法。2、本发明是这样实现的，一种中华羊茅成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立方法，该方法包括以下步骤：3、(1)将中华羊茅种子依次进行内生真菌去除处理以及消毒处理；4、(2)将种子对半切开置于ph＝5.8～5.9的诱导培养基中培养44～46d；所述诱导培养基为：基础培养基+2mg/l 2,4-d+0.05mg/l 6-ba；5、(3)转入ph＝5.8～5.9的继代培养基中培养29～31d；继代培养基为：基础培养基+2mg/l 2,4-d+0.05mg/l 6-ba；6、(4)转入ph＝5.7的分化和增殖培养基中继续培养至苗长为2～3cm；所述分化和增殖培养基为：基础培养基+2mg/l 6-ba+0.5mg/l naa；7、(5)转入ph＝5.7的生根培养基培养至待分化苗的根长为5～7cm；所述生根培养基为基础培养基；8、(6)将苗移出，闭瓶炼苗，2d后注入自来水，开瓶炼苗3d，然后洗净根部，使用灭菌后的蛭石培养，获得完整的再生植株。9、优选地，在步骤(1)中，所述内生真菌去除处理为：将种子放置于65℃烘干箱内45d。10、优选地，在步骤(1)中，所述消毒处理为：将种子依次用50％ h2so4浸泡12min、75％c2h5oh浸泡2min、50％84浸泡20min。11、优选地，在步骤(2)～(5)中，所述基础培养基为：4.33g/l ms salts粉末+30g/l麦芽糖+3.5g/l植物凝胶。12、优选地，在步骤(2)中，所述诱导培养基的培养条件为：放置于恒温26±1℃条件下黑暗培养45d。13、优选地，在步骤(3)中，所述继代培养基的培养条件为：放置于恒温26±1℃条件下黑暗培养30d。14、优选地，在步骤(4)中，所述分化和增殖培养基的培养条件为：光照培养、光照强度4300～4800lux、每天14h·d-1、培养温度为26±1℃。15、优选地，在步骤(5)中，所述生根培养的培养条件为：培养温度为26±1℃、光照强度4300～4800lux、每天光照14h·d-1条件下培养。16、相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：本发明以中华羊茅的成熟胚胎为外植体的，提供中华羊茅成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立方法，具有繁殖速度快、生产效率高、保持原有品种的固有形状和特性等特点，为顺利开展基因编辑以及种质创新工作的顺利推进提供重要试验材料。技术特征：1.一种中华羊茅成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述内生真菌去除处理为：将种子放置于65℃烘干箱内45d。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述消毒处理为：将种子依次用50％h2so4浸泡12min、75％c2h5oh浸泡2min、50％84浸泡20min。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)～(5)中，所述基础培养基为：4.33g/l ms salts粉末+30g/l麦芽糖+3.5g/l植物凝胶。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述诱导培养基的培养条件为：放置于恒温26±1℃条件下黑暗培养45d。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述继代培养基的培养条件为：放置于恒温26±1℃条件下黑暗培养30d。7.如权利要求1的方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述分化和增殖培养基的培养条件为：光照培养、光照强度4300～4800lux、每天14h·d-1、培养温度为26±1℃。8.如权利要求1的方法，其特征在于，在步骤(5)中，所述生根培养的培养条件为：培养温度为26±1℃、光照强度4300～4800lux、每天光照14h·d-1条件下培养。技术总结本发明公开了一种中华羊茅成熟胚愈伤组织诱导及再生体系建立方法，步骤为：(1)将中华羊茅种子依次进行内生真菌去除处理以及消毒处理；(2)消毒后的中华羊茅种子，依次放入诱导培养基、继代培养基、分化和增殖培养基和生根培养基中培养，待分化苗的根长度为5～7cm；(3)将苗移出，闭瓶炼苗后，注入自来水，开瓶炼苗，然后洗净根部，使用灭菌后的蛭石培养，获得完整的再生植株。本发明选择中华羊茅成熟胚为外植体进行植物组织再生培养，所需材料低廉易得，操作过程简单宜行，此外，本发明得到的中华羊茅成熟胚愈伤组织及其再生体系，为基因编辑以及中华羊茅种质创新提供重要的基础材料。技术研发人员：胡涛,耿婕,李忠祥,胡继勋受保护的技术使用者：兰州大学技术研发日：技术公布日：2024/5/16