一种小鼠MI/RI模型的构建方法与流程

本发明属于医疗生物模型，具体涉及一种小鼠mi/ri模型的构建方法。背景技术：1、功能性心肌细胞死亡是心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury，mi/ri)重要的病理生理学基础。具体指冠状动脉部分或完全急性阻塞后，在一定时间又重新获得再通时，缺血心肌虽然得以恢复正常灌注，但其组织损伤反而呈进行性加重的病理过程。缺血期引起的心肌超微结构、能量代谢、心功能和电生理等一系列损伤性变化，在血管再通后表现得更为突出，甚至可发生严重的心律失常而导致猝死。2、现有研究中，对其发生机制认为主要与细胞内氧自由基的大量产生、钙离子超负荷、白细胞的炎症作用及高能磷酸化合物缺乏等有关。除了心脏，缺血再灌注损伤还可见于脑、肺、肝、胰、肾及胃肠道等器官。3、对于这方面的研究，因为还没有确切的关系确定，故需要进行大量的实验进行研究。而在推进研究的过程中，影响实验效率的一个因素就是建模困难，其中作为实验对象的小鼠建模时，无法准确稳定的形成心肌缺血的前置条件，同时如何在缺血后又恢复稳定供血，也缺乏有效手段。现有的手段不仅成本较高，且小鼠存活率较低，即使完成处置过程，小鼠出现mi/ri的情况不稳定，成功率较低。技术实现思路1、为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种小鼠mi/ri模型的构建方法，通过一种低成本的处置方式，能够稳定且高效的形成mi/ri的小鼠模型，给研究mi/ri症状的机制研究提供便捷。2、本发明所采用的技术方案为：3、第一方面，本发明提供一种小鼠mi/ri模型的构建方法，构建用于心肌缺血再灌注损伤研究的实验对象；4、在健康的活体小鼠的冠状动脉的左前降支活结结扎20-40min诱发小鼠心肌缺血，根据心肌缺血特征指标确定缺血后20-40min打开活结恢复冠状动脉血流并持续灌注至少1.5h，直至缺血区变红、心电图抬高的st段回落50％以上完成灌注操作，并根据心肌损伤特征指标确认满足心肌损伤的判断要求，即确认灌注有效并获得mi/ri小鼠模型。5、结合第一方面，本发明提供第一方面的第一种实施方式，心肌缺血特征指标为对应的心室壁发绀和心电图显示st段抬高。6、结合第一方面，本发明提供第一方面的第二种实施方式，心肌损伤特征指标为肌酸激酶以及乳酸脱氢酶的活性，两个标志物的活性指标至少均高于正常值的150％则满足心肌损伤的判断要求。7、结合第一方面或第一方面的第二种实施方式，本发明提供第一方面的第三种实施方式，心肌损伤特征指标还包括心肌梗死面积，通过2，3，5-三苯基氯化四氮唑对小鼠的心肌组织染色判断梗死面积增大至少10％满足判断心肌损伤要求。8、结合第一方面，本发明提供第一方面的第四种实施方式，具体步骤如下：9、首先，准备期间小鼠需要保持12h以上的禁食过程，开始处置前，先在腹腔注射2％的戊巴比妥钠对小鼠麻醉，并将其固定在操作台上，将小鼠四肢固定后使用十六道生理记录仪监测ⅱ导联心电图；10、然后，开始处置时，对小鼠插管连接呼吸机保持机械通气，然后打开胸腔后将心脏抬高，于胸骨左侧第2-3肋骨之间行横切口1cm，剪开心包暴露心脏；11、再向右翻起心脏并缩小心脏搏动范围，充分暴露冠状动脉的左前降支血管，采用8/0带线缝合针活结结扎冠状动脉左前降支30min以诱发心肌缺血，通过同时出现的左心室壁发绀、心电图显示st段抬高现象确认缺血操作成功；12、然后封闭胸腔，待小鼠恢复自主呼吸后将插管拔除并保持缺血状态至少20min后，打开活结恢复冠状动脉的血流，并持续灌注至少1.5h后通过同时出现的缺血区变红、抬高的st段回落50％的现象确认再灌注成功；13、最后对灌注成功的小鼠检查心肌损伤特征指标ck、ldh活性变化，确认满足心肌损伤的判断要求后获得mi/ri小鼠模型。14、结合第一方面，本发明提供第一方面的第五种实施方式，小鼠选用野生型小鼠作为处置对象。15、本发明的有益效果为：16、本发明中提供的技术路线在保证小鼠具有较高存活率的同时，通过确切部位的活结结扎来形成有效的心肌缺血情况，并通过外部设备进行标志物检测，然后再通过限定时间来再灌注保持稳定形成心肌缺血再灌注的情况，从而给现有研究mi/ri症状的机制提供大量低成本的实验模型。技术特征：1.一种小鼠mi/ri模型的构建方法，构建用于心肌缺血再灌注损伤研究的实验对象，其特征在于：2.根据权利要求1所述的一种小鼠mi/ri模型的构建方法，其特征在于：心肌缺血特征指标为对应的心室壁发绀和心电图显示st段抬高。3.根据权利要求1所述的一种小鼠mi/ri模型的构建方法，其特征在于：心肌损伤特征指标为肌酸激酶以及乳酸脱氢酶的活性，两个标志物的活性指标至少均高于正常值的150％则满足心肌损伤的判断要求。4.根据权利要求1或3所述的一种小鼠mi/ri模型的构建方法，其特征在于：心肌损伤特征指标还包括心肌梗死面积，通过2，3，5-三苯基氯化四氮唑对小鼠的心肌组织染色判断梗死面积增大至少10％满足判断心肌损伤要求。5.根据权利要求1所述的一种小鼠mi/ri模型的构建方法，其特征在于：具体步骤如下：6.根据权利要求1所述的一种小鼠mi/ri模型的构建方法，其特征在于：小鼠选用野生型小鼠作为处置对象。技术总结本发明公开了一种小鼠MI/RI模型的构建方法，构建用于心肌缺血再灌注损伤研究的实验对象；在健康的活体小鼠的冠状动脉的左前降支活结结扎20‑40min诱发小鼠心肌缺血，根据心肌缺血特征指标确定缺血后20‑40min打开活结恢复冠状动脉血流并持续灌注至少1.5h，直至缺血区变红、心电图抬高的ST段回落50％以上完成灌注操作，并根据心肌损伤特征指标确认满足心肌损伤的判断要求，即确认灌注有效并获得MI/RI小鼠模型。技术研发人员：李飞飞,徐可伟,田建峰,陈华科,周龙甫受保护的技术使用者：中国人民解放军西部战区总医院技术研发日：技术公布日：2024/5/12