一种肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法及应用

本发明涉及动物模型构建，具体是一种肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法及应用。背景技术：1、静脉血栓栓塞症（vte）是恶性肿瘤常见的并发症之一，包括深静脉血栓形成（dvt）和肺血栓栓塞症（pte）。肺栓塞是以各种栓子阻塞肺动脉或其分支为发病原因的一组疾病或临床综合征的总称，其中最常见的栓子为血栓，通常所称的肺栓塞即为肺血栓栓塞症。肺癌作为我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，且癌症患者发生静脉血栓栓塞(vte)的总体风险是普通人群的4倍，而肺栓塞(pe)是vte最严重的临床表现。在肿瘤患者中，vet的发生率比非肿瘤病人高数倍，已经成为肿瘤病人死亡的第二大原因。目前，由于vet临床症状不典型，容易被癌症症状掩盖，且肿瘤环境、患者自身因素、某些治疗手段均可能是其危险因素，预后较差，所以临床上对vet的早期认识和干预极为关键。2、pte各个阶段背后的机制，例如血栓形成的开始、传播和消退，目前仍未完全了解，而动物模型是探索这些问题并研究pte预防和治疗新目标的宝贵工具，目前按其主要临床前方法是使用鼠模型，其中许多模型已显示出在区分可能影响血栓形成的几个因素（从遗传效应到治疗干预）方面的实用性，从而更好地了解病症的发展和解决的机制。3、目前肺栓塞的动物模型建模的方法可大致分为三种：1) 引入非血栓来源的颗粒；最常在大鼠和兔子身上进行，而这些物种之间的建模方法和目标差异很大。2) 外科手术；肺动脉闭塞不仅可以通过血栓形成或非血栓形成颗粒进行栓塞，还可以通过使用手术技术来实现。3) 通过体内血栓形成诱导血栓栓塞或通过注射体外制备的血凝块，对于通过诱导内源性血栓形成的 pe 建模，对动物静脉内注射引起血小板聚集的激动剂或触发凝血级联的物质，使用体外制备的血栓性肿块对 pe 进行建模的方案假定对动物血液进行初始取样，并制造给定大小和数量的天然或改良血栓，然后将其静脉内给药于同一动物。4、既往建立1型和2型哺乳类动物肺癌肺栓塞模型造模方式通过注射异物或者手术，使得血栓形成，但是异物血栓不可能完全复制自体血栓栓塞的生理特征；既往建立3型哺乳类动物肺癌肺栓塞模型造模方式通过体内诱导血栓或者体外注射血块，使得血栓形成，但是这种造模方式不仅只是诱导形成单纯的肺栓塞，并且造模的动物死亡率相对较高。因此，需要一种更合适的、稳定的能够模拟肺癌合并肺栓塞的动物模型。技术实现思路1、本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法及应用，本发明所采取的技术方案如下：2、第一方面，提供一种肺癌合并动物模型的制备方法，包括如下步骤：3、s1.以裸鼠、nod-scid、nsg等免疫缺陷小鼠为动物模型构建对象，每只小鼠尾静脉注射约5×105个~1×106个肺癌细胞；4、s2.注射细胞后3-4周，每组小鼠随机各取1只取材，小鼠安乐死，取肺脏观察是否有结节或肿瘤，并将取出的肺组织4%pfa固定，并做he染色观察；5、s3. 小鼠若有肺癌成瘤后，开始建立肺栓塞模型：每只小鼠尾静脉给予混合液，注射后观察小鼠状态，以小鼠呼吸加快加深，口唇发绀，两肺出现弥漫性干湿啰音等肺栓塞体征表示造模成功；6、s4.小鼠即将死亡前摘眼球取血，室温静置30min后，分离血清，-80℃保存备用；7、s5.死亡的小鼠取肺，肺组织一半4%pfa固定，并做he染色观察，另置于-80℃冻存。8、上述方法建立的肺癌合并肺栓塞小鼠模型，能为该类疾病模型的病理生理学研究、临床药物研究和外科手术实践提供良好的动物模型，具有很好的应用前景。9、第二方面，上述肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法得到的肺癌合并肺栓塞动物模型在药物筛选中的应用，例如筛选治疗或缓解肺癌合并肺栓塞症状的药物，也属于本发明的保护范围。10、本发明涉及到的原料或试剂均为普通市售产品，涉及到的操作如无特殊说明均为本领域常规操作。11、本发明的有益效果如下：本发明操作简单、快速，效果确切，耗材低廉，肺栓塞成功率高，致死率低；且检查手段方便，能够有效的弥补现有技术的不足，能够为该类疾病模型的病理生理学研究、临床药物研究和外科手术实践提供良好的动物模型。技术特征：1.一种肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法，其特征在于包括以下步骤：2.根据权利要求1所述的一种肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法，其特征在于还包括：3.根据权利要求1所述的一种肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法，其特征在于还包括：4.根据权利要求1所述的一种肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法，其特征在于：每只小鼠注射5×105个~1×106个肿瘤细胞。5.根据权利要求1所述的一种肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法，其特征在于：每只小鼠注射100μl胶原和肾上腺素混合液，其中含10μg胶原和5μg肾上腺素。6.如权利要求1-5任一项所述的肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法得到的肺癌合并肺栓塞动物模型在药物筛选中的应用。技术总结本发明提供一种肺癌合并肺栓塞动物模型的建立方法及应用，该方法对免疫缺陷小鼠静脉注射肺癌细胞，培养一段时间待小鼠有肺癌成瘤后，再对小鼠静脉注射胶原和肾上腺素混合液，以小鼠呼吸加快加深、口唇发绀、两肺出现弥漫性干湿啰音及其它肺栓塞体征表示造模成功；本发明操作简单、快速，效果确切，耗材低廉，肺栓塞成功率高，致死率低；且检查手段方便，能够有效地弥补现有技术的不足，为该类疾病模型的病理生理学研究、临床药物研究和外科手术实践提供良好的动物模型。技术研发人员：陈千,郭盟,陈思思,陈塞特,李聪聪,孙昌正受保护的技术使用者：温州正合生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/5/12