一种建立欧洲水仙高效再生体系的方法与流程

本发明属于组培，具体涉及一种建立欧洲水仙高效再生体系的方法。背景技术：1、水仙为石蒜科(amaryllidaceae)水仙属(narcissus)多年生单子叶草本花卉。水仙属植物花色丰富，花型独特，观赏价值高，培养简单，已广泛应用于切花、花境、地被及庭院栽培。水仙应用潜力大，但很多商业品种不能产生种子，生产中主要利用子球进行繁殖，繁殖速度慢，引入品种或新品种推广速度慢。利用植物组织培养是实现良种快繁的有效途径。目前，利用双鳞片建立高效再生体系已经在水仙的多个品种中实现，但高效的愈伤组织再生体系及体胚发生体系研究相对滞后。虽然有愈伤组织再生植株的报道，但多数分化率和繁殖系数都较低、没有建立良好的愈伤组织再生体系。2、水仙离体再生体系常用的外植体有鳞片、带鳞茎盘的鳞片或鳞茎内的花器官等。但使用鳞片或者带鳞茎盘的鳞片，污染率高，难以获得较好的消毒效果，同时要消耗鳞茎球，不利于稀有或者珍贵品种的扩繁；而以鳞茎内的花器官为材料，也要消耗鳞茎球。水仙在栽培过程中，为了减少花器官发育对养分的消耗，通常掐除抽生的花葶。因此，如果能以抽生的花器官为外植体材料，可以减少组织培养对鳞茎的损耗。技术实现思路1、本发明的目的在于提供一种建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其以抽生的花器官为外植体，突破了外植体取材瓶颈，建立了高效的再生体系，为水仙多倍体的诱导和基因工程育种奠定基础。2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：3、一种建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其包括以下步骤：4、1）摘取刚抽生花葶的花蕾，经清洗、消毒后，剥除外面的花鞘，将子房切片于愈伤组织诱导培养基中进行培养；5、2）将步骤1）获得的愈伤组织接入不定芽诱导分化培养基中进行培养；6、3）将步骤2）获得的带有不定芽的组织切块接到不定芽增殖培养基上进行培养；7、4）将步骤3）培养获得的不定芽转至生根培养基中进行培养。8、进一步地，步骤1）所述愈伤组织诱导培养基的配方为：ms+2mg/l 6-ba+0.5mg/lnaa+1 mg/l 2,4-d+30 g/l蔗糖+7.5 g/l琼脂，ph=5.8。9、进一步地，步骤1）所述培养是于25±1℃条件下暗培养90d。10、进一步地，步骤2）所述不定芽诱导分化培养基的配方为：ms+1.5 mg/l 6-ba+0.5mg/l 2,4-d +30 g/l蔗糖+7.5 g/l琼脂，ph=5.8。11、进一步地，步骤2）所述培养是于25±1℃光照培养16 h、20±1℃暗培养8 h，光照强度2000lx，培养70d。12、进一步地，步骤3）所述不定芽增殖培养基的配方为：ms+10mg/l 6-ba+1mg/l naa+30 g/l蔗糖+7.5 g/l琼脂，ph=5.8。13、进一步地，步骤3）所述培养是于25±1℃光照培养16 h、20±1℃暗培养8 h，光照强度2000lx，培养40d。14、进一步地，步骤4）所述生根培养基的配方为：1/2 ms+0.1mg/l naa+0.05mg/l iba+60 g/l蔗糖+7.5 g/l琼脂，ph=5.8。15、进一步地，步骤4）所述培养是于25±1℃光照培养16 h，暗培养8 h，光照强度2000lx，培养70d。16、本发明的显著优势在于：17、1）本发明利用水仙抽生花葶的花蕾为外植体，减少了对鳞茎的消耗，并实现了对剪除花枝的有效利用，这在欧洲水仙的组织培养中还未见报道。18、2）本发明利用次氯酸钠消毒包在鞘衣内的花器官，污染率极低，极大的提升了材料的利用率，对外植体的损伤也比较小，消毒效果良好。19、3）本发明利用子房为外植体，突破了外植体取材瓶颈，且其愈伤组织诱导率及分化率都较数高，可形成大量的不定芽，符合工厂化生产的要求，同时也为水仙的分子育种提供材料，是一种高效的再生体系，为水仙多倍体的诱导和基因工程育种奠定基础。技术特征：1.一种建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其特征在于，包括以下步骤：2. 根据权利要求1所述的建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其特征在于，步骤1）所述愈伤组织诱导培养基的配方为：ms+2mg/l 6-ba+0.5mg/l naa+1 mg/l 2,4-d +30 g/l蔗糖+7.5 g/l琼脂，ph=5.8。3.根据权利要求1所述的建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其特征在于，步骤1）所述培养是于25±1℃条件下暗培养90d。4. 根据权利要求1所述的建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其特征在于，步骤2）所述不定芽诱导分化培养基的配方为：ms+1.5 mg/l 6-ba+0.5 mg/l 2,4-d +30 g/l蔗糖+7.5 g/l琼脂，ph=5.8。5. 根据权利要求1所述的建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其特征在于，步骤2）所述培养是于25±1℃光照培养16 h、20±1℃暗培养8 h，光照强度2000lx，培养70d。6. 根据权利要求1所述的建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其特征在于，步骤3）所述不定芽增殖培养基的配方为：ms+10mg/l 6-ba+1mg/l naa +30 g/l蔗糖+7.5 g/l琼脂，ph=5.8。7. 根据权利要求1所述的建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其特征在于，步骤3）所述培养是于25±1℃光照培养16 h、20±1℃暗培养8 h，光照强度2000lx，培养40d。8. 根据权利要求1所述的建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其特征在于，步骤4）所述生根培养基的配方为：1/2ms+0.1mg/l naa+0.05mg/l iba+60 g/l蔗糖+7.5 g/l琼脂，ph=5.8。9. 根据权利要求1所述的建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其特征在于，步骤4）所述培养是于25±1℃光照培养16 h，暗培养8 h，光照强度2000lx，培养70d。技术总结本发明公开了一种建立欧洲水仙高效再生体系的方法，其是以刚抽生花葶的花蕾为外植体材料，通过对其进行诱导、培养，以实现水仙愈伤组织再生体系的制备，其突破了外植体取材瓶颈，减少了组织培养对鳞茎的损耗，为水仙多倍体的诱导和基因工程育种奠定基础。技术研发人员：郑家召受保护的技术使用者：福建东进农业科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/5/12